Name: 검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: 학습하세요 형광 중재 단층 촬영법을 이용하여 췌장염 마우스 모델에서 장 대식세포 침윤을 정량화하는 방법을. 이 비침습적 기술은 염증성 장 질환의 질병 활성을 종단적으로 모니터링하여 치료 연구에 활용됩니다.

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우리는 우수한 기술 지원에 대 한 양 소냐 Dufentester, 양 Elke 웨버와 부인 Klaudia Niepagenkämper 감사합니다.

모든 동물 실험 Landesamt 위한 Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) 노르 트 베스트 팔 렌 독일 동물 보호 법률 (Tierschutzgesetz)에 의해 승인 되었다.
1. 재료 및 실험 설치
<ol>
	<li>동물 케어입니다.
	<ol>
		<li>(예를 들어, C57BL/6) 어떤 DSS 취약 긴장의 성별 및 나이 일치 마우스를 사용 하 여 20 ~ 25 g bodyweight에.</li>
		<li>현지 동물 보호 지침에 따라 마우스 실험 그룹과 집 당 적어도 5 개 이상의 마우스를 계획 합니다.</li>
		<li>다이어트 및 압력가 음료수 광고 libitum표준 설치류 차를 제공 합니다.</li>
		<li>표준 차를 제거 하 고 파 무료 차 우와 최소 3 일 전에 endoluminal 자동 형광을 줄이기 위해 검색 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>DSS 유발 급성 대 장 염의 감 응 작용입니다.
	<ol>
		<li>DSS의 2 세대 분해 (분자량 40000 ~ 다)의 2% (w/v 솔루션)를 얻기 위해 압력가 마로 소독 식 수 100 ml.</li>
		<li>DSS 솔루션으로 독점적으로 쥐의 마시는 공급을 마우스 하루 당 액체의 5 mL을 추정. 컨트롤 마우스10DSS 없이 같은 식 수를 제공 합니다. 참고: 실험의 끝까지 매일 쥐를 모니터링 합니다. 하는 그들의 초기 체중의 20% 보다 큰 잃거나 죽어가는 되는 마우스를 안락사 (즉, 자세, 운동 감소를 지속적으로 hunched, 보람 호흡, 현저 하 게 코트를 세우 다) 동물에 로컬 해당 지침에 따라 복지입니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>형광-중재 단층 촬영의 준비입니다.
	<ol>
		<li>형광 염료와 원하는 항 체 (예: 쥐 반대로 마우스 f 4/80) 레이블 (예: Cyanine7, λ여기: 750 nm, λ방출: 776 nm) 제조 업체의 프로토콜에 설명 된 대로. 적절 한 투 석 막에 순화 된 항 체를 dialyze (기 공 크기 &#60; 50-100 kDa) 0.15 M 이상 2 시간 또는 하룻밤에 대 한 염화 나트륨의 1 L에 대 한.<ol>
			<li>0.1 m M NaHCO3 의 1 L에 항 체를 전송 하 고 적어도 2 시간에 대 한 dialyze.</li>
			<li>디 메 틸 sulfoxide (DMSO)에 형광 염료의 필요한 금액을 해산 (항 체의 10.8 µ L/mg) 항 체 솔루션에 추가. 20-fold 어 금 니 과잉에 형광 염료를 사용 하 여 1: 3의 염료 단백질 비율을 달성 하기 위해.</li>
			<li>1 헤 0.15 M 나트륨의 1 L에 대 한 투 석 또는 PD-10 염 열을 사용 하 여 레이블이 없는 항 체 제거에 4 ° C에서 어둠 속에서 incubate 고 vivo에서 응용 프로그램에 대 한 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)에서 해결 합니다.</li>
			<li>분 광 광도 법에 의해 최종 항 체 농도 및 라벨 비율을 결정 합니다.</li>
			<li>250-330 nm의 흡수에서 단백질 농도 측정 하 고 염료에 의해 추가 흡수를 고려. 280에서 최대 흡수를 수정 nm (단백질) 750에서 최대 흡수의 11 %nm (다음 단계) Cyanine7 라벨에 대 한.</li>
			<li>250-800 nm에 화합물 (일반적으로 1:10)의 희석을 측정 하 고 750에서 Cyanine7의 농도 추출 nm.</li>
			<li>염료-단백질 비율을 결정: 염료/항 체 = 750에서 최대 흡수 nm / 200000 / (280에서 최대 흡수 nm-750에서 최대 흡수 x 0.11 nm) / 170000.</li>
			<li>4 ° C에서 항 체 솔루션을 유지 하 고 주입 하기 전에 표백 피하기 위해 빛에서 그것을 보호.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>그것은 사용 될 때까지 주입 및 빛에서 방패 직전 무 균 주사기에 필요한 항 체 솔루션 볼륨을 로드 합니다.</li>
		<li>프로브 주입의 최적의 타이밍 및 트레이 서 약 동학에 따라 스캐닝 절차를 결정 합니다.</li>
		<li>산소에서 흡입 1.5-2.5 %isoflurane 사용 하 여 마우스를 anesthetize 또는 레이블이 지정 된 항 체의 꼬리 정 맥 주사에 대 한 전용된 restrainer에 안전 하 게 넣어.</li>
		<li>전체 길이 항 체에 대 한 분류 항 체 이상 24 h 검색, 이전 murine colitis에 반대로 마우스 F4/80 macrophage 시각화 등을 주입. 마우스를 정 맥 주사 (i.v.) 꼬리를 통해 염료의 2.0 nmol에 해당 하는 금액에 레이블이 지정 된 항 체와 정 맥.</li>
		<li>사용 동일 하 게 표시 난다 항 체 (예: 쥐 IgG 또는 해당 기본 항 체 유산 하 다른 isotype) 복용량에 isotype 컨트롤로 특정 조사에 해당. 참고: vivo에서 의 결과 검색 후 주입 제어 화합물의 특정 조사 데이터 이미징의 해석에 대 한 참조로 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>전기 면도기를 사용 하 여 빛의 반사와 흡수를 최소화 하기 위해 복 부에 동물 모피를 면도.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 기술 장비
<ol>
	<li>수의 형광 중재 단층 (FMT) 장치를 사용 하 여 작은 동물 형광 ( 그림 4)에 대 한.</li>
	<li>"새로운 연구 결과"를 클릭 하 여 각 프로젝트에 대 한 새로운 연구를 만듭니다 단추 및 이미징 매개 변수 및 나중에 참조할 수에 대 한 복용량을 포함 하 여 관련 추적기 연구 설명에 포함 됩니다.</li>
	<li>이 연구에서 "새로운 연구 그룹"을 클릭 하 여 각각 연구 설계 (예를 들어, 특정 추적 프로그램 및 불특정 isotype 제어에 대 한)에 따르면 연구 그룹 만들기 버튼. 동물의 각 번호와 각 연구 그룹을 장비.</li>
	<li>추적 프로그램 구문에 대 한 시스템 보정.<ol>
		<li>라벨에 변화에 대 한 정상화 하 고 오이 데이터에서 양적 측정을 가능 하 게 하는 추적기의 각 일괄 처리에 대 한 보정을 수행 합니다.</li>
		<li>각 개별 시스템의 교정에 대 한 악기 제조 업체의 지침에 따라 "추가 새 추적 프로그램"을 선택, 시스템 단계를 통해 가이드를 제공 합니다. 적용 된 항 체 솔루션의 희석 및 프로브에 추적 프로그램의 계산 된 절대 농도 제공 합니다.</li>
		<li>FMT, 정의 된 두께 및 흡수 특성 (중요 한 조직 닮은)의 조직 흉내 낸 팬텀을 사용 하 여 및 사용 되는 항 체 솔루션의 특정 볼륨 작성. FMT 장치에 이것을 측정 합니다. 참고: 시스템 미래 vivo에서 측정에서 절대 추적 농도 계산 하 주어진된 농도 함께 제공 조사의 기준 측정을 사용 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>42 ° C의 온도 heatable 시험 카세트를 사용 하 여 참고:이 시험 기간 동안 저체온증이 되기에서 쥐를 방지할 수 있습니다.</li>
</ol>
3. 동물 마 취
<ol>
	<li>1.5-2% vol %isoflurane ([2-chloro-2-(difluoromethoxy)-1,1,1-trifluoro-ethane])와 anesthetize는 마우스를 1.5 L O2/min의 지속적인 흐름을 사용 하 여.</li></ol>쥐 취 (isoflurane 기화 기)에 대 한 특별히 설계 된 흡입 시스템을 사용 하 여 쉽게 마 취 깊이 제어 하 고 직원 노출을 최소화 하기 위해.
	<li>누출 방지 유도 챔버에 마우스를 놓고 isoflurane 공급 (100% (v/v), 산소, 3 L/min에서에서 5 vol %)을 위한 기화 기에 설정 합니다. 그것은 휴식 하 고 의식이 될 때까지 마우스를 모니터링 합니다.</li>
	<li>100 %v / v, 산소, 검사 하는 동안 운동 유물을 최소화 하기 위해 1.5 L/분에에서 1.5 vol %의 복용량에 원뿔을 통해 지속적인 isoflurane 흡입으로 단층에 대 한 시험 카세트에 그것을 배치 합니다. 5 분 이상 지속 되는 절차에 대 한 각 막 손상을 방지 하기 위해 마우스 눈에 눈 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>반사를 확인 하 여 마 취 깊이 평가 합니다. 마우스의 뒷면;에 누워 충분 한 마 취 이면 마우스 안 돌아서 한다. 그것의 발가락; 사이 부드럽게 마우스를 꼬집어 충분 한 마 취 인 경우는 다리 수술 관용의 철회 (단계) 수 없습니다.</li>

4. 형광 중재 단층 촬영 검사
참고: 적응이 사용 되는 FMT 시스템 관련 다음과 같은 세부 사항이 필요에 따라 대체 형광 반사율 이미징 장치 또는 FMT 시스템에 대 한 참조 테이블의 재료연구.
<ol>
	<li>시험 카세트에 그것의 뒤에 마 취 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>스캐닝 절차를 수행 합니다.<ol>
		<li>이미징 시스템에는 카세트 삽입 하 고 즉시 연속 마 취를 위해 그것을 닫습니다. 이전에 만든 연구 그룹에서 적절 한 샘플을 선택 합니다. 추적 프로그램 농도 대 한 값이 제대로 계산 되도록 드롭다운 메뉴에서 관리 추적 프로그램을 선택 합니다.</li>
		<li>적절 한 파장에서 형광 반사율 이미지 획득 (720 Cyanine7에 대 한 nm) 검사 계획 및 개요 "이미지 획득" 버튼을 클릭 하 여 검색 필드에 대 한.</li>
		<li>검색 필드에 형광 반사율 이미지 오버레이로 나타납니다를 참조 하십시오. (예를 들어, 콜론 또는 복 부), 관심 영역을 조정 공기 또는 나머지 모피의 영역을 피하고. 이미지 대상에 따라 이미지의 숫자 데이터 요소 내 설정 검색 필드 오른쪽에 있는 메뉴에서 중간 및 스캔-필드 해상도 거친에서 선택 하 여. 참고: 명심 좋은 검색 필드 이상 크게 스캔 시간 비용 더 나은 공간적 해상도 제공할 수 있습니다.</li>
		<li>"검색."를 클릭 하 여 선택 된 파장에서 데이터/이미지 수집 시작 참고: 전체 복 부의 중간 벌금 스캔에 대 한 검색 시간 약 5 분; 수 있습니다. 이 시간에서 각 데이터 요소는 별도로 여기 레이저 조명 하 고 결과 형광 기록 됩니다.</li>
		<li>스캔의 끝에 이미징 카세트에서 동물을 제거 하 고 케이지에 다시 배치 하기 전에 완전히 복구할 수 동물 허용.</li>
		<li>실험 기간 동안 다양 한 시간 지점에서 필요 하다 고 인정 하는 경우는 FMT를 반복 (예를 들어, 0, 5, 9-10 일 (실험의 끝)), 따라서 배경 형광 신호를 증가 하는 본문에 항 체의 축적을 고려 하지만.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5입니다. 사후 검사
<ol>
	<li>레드 라이트 지구 온난화 램프 아래 종이 타월에 별도 장에 마우스를 놓고 전체 복구까지 고민 또는 불편의 흔적에 대 한 마우스를 모니터링 합니다. 다시으로 그것의 각각 완전히 깨어 있을 때 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>100% (v/v)의 복용량에 아이 솔 레이 터에 CO2 의 전달에 의해 실험의 끝에 쥐, 100 vol %, 그리고 3 L/min를 안락사. 마십시오 하지 미리 채울 챔버 CO2 로 CO2 의 높은 농도에 갑자기 노출 조 난을 일으킬 수 있습니다. 마우스 안락사 급속 한 자 궁 경관 탈 구 등의 후속 보조 모드에 의해 호흡을 멈춘 후 죽음을 확인 합니다.</li>
	<li>복 부 개복 술에 의해 결 explant 고 단계 4.2.1-4.2.4에에서 설명 된 대로 explanted 콜론의 비보 전 검사를 수행 합니다. 각 대 장 경도 Metzenbaum 수술가 위를 사용 하 여 열고 염 추가 분석을 위해 그것을 준비 하기 전에 철저 하 게 린스.</li>
	<li>메스를 사용 하 여 원심 결에서 0.5 cm 조각 잘라내어 즉시 극저온 1.5 mL 튜브에. 액체 질소와-70 ° C에서 저장소에 추가 사용 (예:myeloperoxidase (MPO) 측정)까지 동결.</li>
	<li>나무 막대기를 사용 하 고 조직학 분석에 대 한 점 막 바깥쪽 ("스위스 롤 기법")와 함께 근 위 끝에는 원심에서 나머지 경도 열린된 콜론을 롤. 준비는 정착 액에 장소 ( 테이블의 자료를 참조)-80 ° C14에 고정 하 고.</li>
</ol>
6. 데이터 재구성 및 해석
<ol>
	<li>각각 이미징 소프트웨어의 재구성 도구를 사용 하 여 원시 이미지 데이터; 형광 분포의 3 차원 지도 만들 검사 때 검사 시 재구성 도구에 자동으로 추가 됩니다, 함수 "대기열에 추가 개조" 선택 됩니다.<ol>
		<li>그렇지 않으면 스캔 각각 연구 아래에 있는 드롭다운 메뉴에서 및 연구 선택 그룹, 검색을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 고 "재건에 추가 합니다." 선택</li>
	</ol>
	</li>
	<li>추가 분석을 위해 분석 소프트웨어를 데이터 집합을 로드 합니다. 메뉴 표시줄의 드롭다운 메뉴에서 각각 연구 선택한 후 연구 그룹 및 개별 동물; 오른쪽에 있는 메뉴에서 이 동물에 대 한 수행 하는 모든 검사 표시 됩니다. 정확한 검사를 선택 하 고 "로드." 클릭 참고: 추적 프로그램 배포의 3D 개조 왼쪽에 처음 인수 형광 반사율 이미지의 오버레이로 표시 됩니다. 모델 회전 고 쉽게 분석을 위해 확대 될 수 있습니다.</li>
	<li>재건축된 3D 지도에 난다 레이블 축적 (예를 들어, 간 또는 소변 방광)의 포커스를 식별 하 고 대상 조직 (예: 창 자 또는 창 자)에서 차별화 합니다.</li>
	<li>상단 바에서 대상에 대 한 가장 적절 한 투자 수익 모양을 선택 합니다. (ROI) 분석 소프트웨어;에서 각각 측정 도구를 배치 하 여 관심의 영역으로 레이블 대상 조직 소프트웨어 제공할 것입니다 형광 강도 투자 수익로 (피코-)에 대 한 어 금 니 양의 추적 프로그램을 스캔에 대 한 조정 되었습니다.</li>
	<li>질병 활동 (조직학) 선 동적인 침투와 상관 관계에서의 평가 대 한 가장 적합 한 상응 ROI 크기에 대 한 정규화 된 적절 한 투자 수익에 추적 프로그램의 총 금액을 선택 합니다. 참고: 경우 특정 모델의 대표로 서 적절 한 투자 수익의 다른 기능을 선택할 수 있습니다.</li>
</ol>
7입니다.전 비보 분석
<ol>
	<li>되며 오신 얼룩과 면역 형광 염색 법입니다.
	<ol>
		<li>2 분;에 대 한 70% 에탄올 (EtOH)에 배치 하 여 섹션을 deparaffinize 증류수로 씻어 나중. 5 분 동안 되며 솔루션 stain 그리고 그 후 10 분 동안 따뜻한 수돗물으로 씻어.</li>
		<li>증류수, 2 분, 오신 솔루션 counterstain와 헹 구 고 다시 증류수로 씻어.</li>
		<li>70 %EtOH, 96 %EtOH, 99 %EtOH, 및 크 실 렌 (2 회) 2 분 각각 탈수와 섹션의 선택을 취소. 수 지 장착 매체와 탑재 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>면역 형광 검사 얼룩입니다.
	<ol>
		<li>면역 형광 염색 법에 대 한 이전 획득된 조직 단면도 ("스위스 롤")를 사용 하 고 7 µ m의 cryo 컷 섹션을 준비.</li>
		<li>10 분 동안 5.0% 쥐 혈 청에서 아세톤 고정 및 냉동 콜론 섹션을 차단 하 고 희석된 (1/500 v/v) biotinylated 주 쥐 반대로 마우스 F4/80 항 체와 함께 밤새 품 어. 섹션 Tris 버퍼 염 분 (TBS)에 세 번 세척 하 고 PBS/BSA에 Streptavidin FITC (1: 100 v/v)와 품 어 (0.1 %w / v) 4 ° c.에서 하룻밤</li>
		<li>TBS에 섹션을 세척 하 고 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 1:1000 v/v) 대비 달성 하기와 얼룩. Confocal 현미경 형광 이미지 분석 ( 테이블의 재료; 40 x 확대 필터 큐브 N2.1 여기 필터 515-560 참조)와 고 전력 분야 당 F4/80-긍정적인 세포. 참고: vivo에서 FMT 및 사후 조직학 분석 immunohistochemistry 또는 의도 된 대상에 따라 면역 형광 염색 등을 결합 하는 때 동일한 복제 및 서식의 항 체를 사용 하 여 보십시오. F4/80-긍정적인 세포에서 vivo에서 와 ex vivo의검출에 대 한 다른 형식은 사용 했다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>콜론 샘플에서 MPO 측량입니다.
	<ol>
		<li>콜론 샘플 PBS 씻어 서 또는 MPO 측정에 대 한 해 동된 견본 취득 갓을 사용 합니다. 모든 샘플 무게와 균질 조직 세포의 용 해 버퍼는 ELISA에 제공에서 키트 ( 재료의 표참조) 조직의 mg 당 세포의 용 해 버퍼의 20 µ L의 볼륨에서.</li>
		<li>15 sonicate s (쥡니다 주파수: 20khz, 전력: 70 W)와 g와 4 ° C x 200에서 10 분에 대 한 샘플을 원심</li>
		<li>상용 ELISA 키트 ( 재료의 표참조)를 사용 하 여 제조 설명에 따르면. 중복에 테스트를 실시 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Bruckner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+endoscopy+for+in+vivo+multimodal+imaging+of+carcinogenesis+and+assessment+of+intestinal+wound+healing+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine endoscopy for in vivo multimodal imaging of carcinogenesis and assessment of intestinal wound healing and inflammation.</a> J Vis Exp. (90), (2014).</li>
<li>Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+imaging.+current+technology+and+perspectives+for+oncological+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Small animal imaging. current technology and perspectives for oncological imaging.</a> Eur J Cancer. 38 (16), 2173-2188 (2002).</li>
<li>Bettenworth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+18F-FDG+PET%2FCT+imaging+to+monitor+lesion+activity+in+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation.</a> J Nucl Med. 54 (5), 748-755 (2013).</li>
<li>Vowinkel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+A-IV+inhibits+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein A-IV inhibits experimental colitis.</a> J Clin Invest. 114 (2), 260-269 (2004).</li>
<li>Korlach, J., Schwille, P., Webb, W. W., Feigenson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+lipid+bilayer+phases+by+confocal+microscopy+and+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Characterization of lipid bilayer phases by confocal microscopy and fluorescence correlation spectroscopy.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 96 (15), 8461-8466 (1999).</li>
<li>Ntziachristos, V., Tung, C. H., Bremer, C., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+molecular+tomography+resolves+protease+activity+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorescence molecular tomography resolves protease activity in vivo.</a> Nat Med. 8 (7), 757-760 (2002).</li>
<li>Ntziachristos, V., Bremer, C., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+imaging+with+near-infrared+light%3A+new+technological+advances+that+enable+in+vivo+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Radiol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence imaging with near-infrared light: new technological advances that enable in vivo molecular imaging.</a> Eur Radiol. 13 (1), 195-208 (2003).</li>
<li>Ntziachristos, V., Bremer, C., Graves, E. E., Ripoll, J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tomographic+imaging+of+near-infrared+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo tomographic imaging of near-infrared fluorescent probes.</a> Mol Imaging. 1 (2), 82-88 (2002).</li>
<li>Ballou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+labeling+in+vivo+using+cyanine-conjugated+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Tumor labeling in vivo using cyanine-conjugated monoclonal antibodies.</a> Cancer Immunol Immunother. 41 (4), 257-263 (1995).</li>
<li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat Protoc. 2 (3), 541-546 (2007).</li>
<li>Kawada, M., Arihiro, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+advances+in+research+of+chemically+induced+experimental+models+of+human+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Insights from advances in research of chemically induced experimental models of human inflammatory bowel disease.</a> World J Gastroenterol. 13 (42), 5581-5593 (2007).</li>
<li>Nowacki, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+5A+apolipoprotein+A-I+%28apoA-I%29+mimetic+peptide+ameliorates+experimental+colitis+by+regulating+monocyte+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The 5A apolipoprotein A-I (apoA-I) mimetic peptide ameliorates experimental colitis by regulating monocyte infiltration.</a> Br J Pharmacol. 173 (18), 2780-2792 (2016).</li>
<li>Hansch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+experimental+arthritis+with+near-infrared+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of experimental arthritis with near-infrared fluorescence.</a> Arthritis Rheum. 50 (3), 961-967 (2004).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+Technique+for+Intestinal+Tissue+Preparation+for+Immunohistochemical+and+Immunofluorescent+Analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses.</a> J Vis Exp. (113), (2016).</li>
<li>Diaz-Granados, N., Howe, K., Lu, J., McKay, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sulfate+sodium-induced+colonic+histopathology%2C+but+not+altered+epithelial+ion+transport%2C+is+reduced+by+inhibition+of+phosphodiesterase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dextran sulfate sodium-induced colonic histopathology, but not altered epithelial ion transport, is reduced by inhibition of phosphodiesterase activity.</a> Am J Pathol. 156 (6), 2169-2177 (2000).</li>
<li>Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+intestinal+inflammation+in+DSS-induced+model+of+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Investigating intestinal inflammation in DSS-induced model of IBD.</a> J Vis Exp. (60), e3678(2012).</li>
<li>Dieleman, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
<li>Kojouharoff, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+tumour+necrosis+factor+%28TNF%29+but+not+of+IL-1+reduces+inflammation+in+chronic+dextran+sulphate+sodium-induced+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutralization of tumour necrosis factor (TNF) but not of IL-1 reduces inflammation in chronic dextran sulphate sodium-induced colitis in mice.</a> Clin Exp Immunol. 107 (2), 353-358 (1997).</li>
<li>Sunderkotter, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subpopulations+of+mouse+blood+monocytes+differ+in+maturation+stage+and+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Subpopulations of mouse blood monocytes differ in maturation stage and inflammatory response.</a> J Immunol. 172 (7), 4410-4417 (2004).</li>
<li>Willmann, J. K., van Bruggen, N., Dinkelborg, L. M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+in+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging in drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 7 (7), 591-607 (2008).</li>
<li>Ntziachristos, V., Ripoll, J., Wang, L. V., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+and+listening+to+light%3A+the+evolution+of+whole-body+photonic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Looking and listening to light: the evolution of whole-body photonic imaging.</a> Nat Biotechnol. 23 (3), 313-320 (2005).</li>
<li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+deeper+than+microscopy%3A+the+optical+imaging+frontier+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat Methods. 7 (8), 603-614 (2010).</li>
<li>Stuker, F., Ripoll, J., Rudin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+molecular+tomography%3A+principles+and+potential+for+pharmaceutical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Fluorescence molecular tomography: principles and potential for pharmaceutical research.</a> Pharmaceutics. 3 (2), 229-274 (2011).</li>
<li>Beziere, N., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optoacoustic+imaging%3A+an+emerging+modality+for+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Optoacoustic imaging: an emerging modality for the gastrointestinal tract.</a> Gastroenterology. 141 (6), 1979-1985 (2011).</li>
<li>Habtezion, A., Nguyen, L. P., Hadeiba, H., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+Trafficking+to+the+Small+Intestine+and+Colon%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Leukocyte Trafficking to the Small Intestine and Colon.</a> Gastroenterology. 150 (2), 340-354 (2016).</li>
<li>Ungar, B., Kopylov, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+development+of+new+biologics+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Advances in the development of new biologics in inflammatory bowel disease.</a> Ann Gastroenterol. 29 (3), 243-248 (2016).</li>
<li>Sandborn, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vedolizumab+as+induction+and+maintenance+therapy+for+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Vedolizumab as induction and maintenance therapy for Crohn's disease.</a> N Engl J Med. 369 (8), 711-721 (2013).</li>
<li>Vermeire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etrolizumab+as+induction+therapy+for+ulcerative+colitis%3A+a+randomised%2C+controlled%2C+phase+2+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Etrolizumab as induction therapy for ulcerative colitis: a randomised, controlled, phase 2 trial.</a> Lancet. 384 (9940), 309-318 (2014).</li>
<li>Coskun, M., Vermeire, S., Nielsen, O. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Targeted+Therapies+for+Inflammatory+Bowel+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Novel Targeted Therapies for Inflammatory Bowel Disease.</a> Trends Pharmacol Sci. , (2016).</li>
<li>Vermeire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mucosal+addressin+cell+adhesion+molecule+antibody+PF-00547%2C659+in+ulcerative+colitis%3A+a+randomised+study%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The mucosal addressin cell adhesion molecule antibody PF-00547,659 in ulcerative colitis: a randomised study.</a> Gut. 60 (8), 1068-1075 (2011).</li>
<li>Terai, T., Nagano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+fluorophores+and+fluorescent+probes+for+bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Small-molecule fluorophores and fluorescent probes for bioimaging.</a> Pflugers Arch. 465 (3), 347-359 (2013).</li>
<li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+Measurement+of+Tumor+Vascular+Permeability+and+Perfusion+using+a+Hybrid+System+for+Simultaneous+Magnetic+Resonance+and+Fluorescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic Measurement of Tumor Vascular Permeability and Perfusion using a Hybrid System for Simultaneous Magnetic Resonance and Fluorescence Imaging.</a> Mol Imaging Biol. 18 (2), 191-200 (2016).</li>
<li>Ale, A., Ermolayev, V., Deliolanis, N. C., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+background+subtraction+technique+for+hybrid+fluorescence+molecular+tomography%2Fx-ray+computed+tomography+imaging+of+a+mouse+model+of+early+stage+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Fluorescence background subtraction technique for hybrid fluorescence molecular tomography/x-ray computed tomography imaging of a mouse model of early stage lung cancer.</a> J Biomed Opt. 18 (5), 56006(2013).</li>
<li>Chames, P., Van Regenmortel, M., Weiss, E., Baty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+antibodies%3A+successes%2C+limitations+and+hopes+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic antibodies: successes, limitations and hopes for the future.</a> Br J Pharmacol. 157 (2), 220-233 (2009).</li>
<li>Faust, A., Hermann, S., Schafers, M., Holtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+probes+and+their+potential+contribution+to+radiotracer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nuklearmedizin%22%5BJournal%5D)">Optical imaging probes and their potential contribution to radiotracer development.</a> Nuklearmedizin. 55 (2), 51-62 (2016).</li>
<li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274 (3 Pt 1), G544-G551 (1998).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

의료 이미징 기술을 최근 몇 년 동안에서 급속 하 게 진화, 비록 우리는 여전히 개발의 그들의 초기 단계에서 염증 성 프로세스 또는 종양, 뿐만 아니라 다른 질병을 감지 하는 우리의 능력에 제한 됩니다. 그러나, 이것은 이해 종양 성장, 침략, 또는 전이 개발 및 염증 성 질환 및 퇴행 성, 심장 혈관과 면역 질병의 발달에서 세포 프로세스에 매우 중요. 전통적인 이미징 기술을 신체적 또는 생리 적 매개 변수에 의존, 분자 이미징 vivo에서특정 분자 마커20의 시각화 수 있습니다.
작은 동물 이미징, 방사성 핵 종 기반 접근 (예를 들어, s잉 글-광자 방출 계산 된 단층 촬영 (SPECT)과 양전자 방출 단층 촬영 (PET)), 초음파, 및 중재 하는 형광 이미징을 사용할 수 있는 특정 시각화 대상 분자 구조입니다. 대부분의 사용 가능한 추적 백본으로 전장 항 체를 사용 하 여 오랫동안 레이블을, 긴 순...

동물 모델 연구에서 널리 이용 된다 그리고 모니터 질병 활동과 활력, 몸 무게 변경의 정량화 등 혈액, 소변, 배설물의 분석에 많은 비-침략 적 절차 존재 한다. 그러나, 이들은 또한 간 개별 다양성에 적용 되는 간접 대리 매개 변수만 있습니다. 그들은 자주 조직 표본, 반복 시간 지점에서 직렬 관찰 방지의 사후 분석으로 보완 해야 한다 고 에 비보를 처리 하는 생리 적 또는 병 적인 관찰. 정교한 이미징 기술에 작은 동물 등장, 교차 단면 영상, 광학 이미징 및 내 시경, 이러한 프로세스의 직접적인 시각화를 가능 하 게 하 고 또한 같은 동물1 의 반복적인 분석에 대 한 허용을 포함 한 , 2 , 3. 또한, 반복적으로 같은 동물에 있는 질병의 다양 한 상태 모니터링에 동물 윤리의 관점에서 것 필요한 하는 동물의 수 저하 될 수 있습니다.
여러 다른 광학 이미징 기술을 형광 이미징 vivo에서 존재 한다. 원래, confocal 영상 표면과 표면 아래 형광 이벤트4,5공부를 고용 했다. 그러나 최근에,, 양적 3 차원 조직 평가 대 한 허용 하는 단층 촬영 시스템 개발된6되었습니다. 이 낮은 흡수, 민감한 탐지기와 단색 광원7근처-적외선 (NIR) 스펙트럼에서 빛을 방출 하는 형광 프로브 개발을 통해 성취 되었습니다. 전통적인 에칭한 이미징 기술을, 동안 같은 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 자기 공명 영상 (MRI) 또는 초음파 (미국), 물리적에 주로 의존 하 고 시각화 형태학, 광학 이미징 제공할 수 있습니다 추가 정보 기본 분자 프로세스에8을프로브 생 또는 외 인 형광을 사용 합니다.
분자 생물학에서의 발전 목표의 증가 수에 대 한 스마트 하 고 타겟 형광 분자 프로브의 생성을 촉진 하기 위하여 왔다. 예를 들어 수용 체-중재 통풍 관 및 지정된 대상 지역에 배포 수 구상 될 carbocyanine 파생 표시 된 항 체9를 사용 하 여. 신체의 그렇지 않으면 액세스할 수 없는 영역에 특정 추적기 기능을 붙일 수는 사용 가능한 항 체의 풍부한 tumorigenesis, 신경의 모델에서 분자 및 세포 프로세스에 전례 없는 통찰력을 제공 심혈 관, 면 역학적, 그리고 염증 성 질병7.
이 연구에서 우리는 murine 모델 colitis의 단층 형광 중재를 사용 하 여를 설명합니다. Dextran 황산 나트륨 (DSS)-유도 대 장 염은 선 동적인 장 질병 (IBD)10유사한 창 자 염증의 화학적으로 유도 된 마우스 표준형. 특히 창 자 염증11의 개발에 타고 난 면역 체계의 기여를 평가 하기 위해 유용 합니다. 모집, 활성화, 및 monocytes 그리고 대 식 세포의 침투 IBD의 병 인에 중요 한 단계를 나타냅니다, 이후 그들의 신규 모집의 시각화 및 침투의 활동 모니터링, 예를 들어의 효과에 필수적입니다. 전 임상 설정12에 잠재적인 치료 물질. 우리는 DSS colitis의 유도 설명 하 고 monocyte/대 식 세포 마커 F4/80의 특정 시각화에 대 한 형광 분자 단층 촬영을 사용 하 여 창 자 점 막으로 대 식 세포 침투의 단층 촬영-중재 특성을 보여 13. 또한, 우리는 항 체 라벨; 등 보조 및 보완 절차를 설명 실험적인 체제; 그리고 분석 및 질병 활동 지 수 등 기존의 판독 상관 관계에서 얻은 이미지의 해석을 cytometry 및 조직학 분석과 immunohistochemistry 흐름. 우리는이 기술과 다른 이미지 형식에 대 한 비교의 한계를 논의.

<table><tbody><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alfalfa-free diet</td><td>Harlan Laboritories, Madison, USA</td><td>2014</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen eye ointment</td><td>Bayer, Leverkusen, Germany</td><td>80469764</td><td></td></tr><tr><td>Dextran sulphate sodium (DSS)</td><td>TdB Consulatancy, 웁살라, 스웨덴</td><td>DB001</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td><td>E 4382</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>시그마 - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td><td>E 9884</td><td></td></tr><tr><td>Florene 100V/V</td><td>Abbott, Wiesbaden, Germany</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>Haematoxylin&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td><td>HHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. Tissue Tek compound&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sakura, Zoeterwonde, 네덜란드</td><td>4583</td><td>조직학적 분석을 위한 고정제</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수, PBS</td><td>Lonza, Verviers, Belgium</td><td>4629</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 0,9%</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>5/12211095/0411</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨 분말</td><td>Sigma Aldrich Deisenhofen, Germany</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Standard diet</td><td>Altromin, Lage, Germany</td><td>1320</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura, Leiden, Netherlands</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Hemoccult (guaiac paper test)</td><td>Beckmann Coulter, Germany</td><td>3060</td><td></td></tr><tr><td>Biotin rat-anti-mouse anti-F4/80 antibody</td><td>Serotec, Oxford, UK</td><td>MCA497B</td><td></td></tr><tr><td>Biotin rat-anti-mouse anti-GR-1&nbsp;</td><td>BD Pharmingen, 하이델베르크</td><td>독일 553125</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-Alexa546</td><td>Molecular Probes, Darmstadt, Germany</td><td>S-11225</td><td>excitation/emission maximum:&nbsp; 556/573nm</td></tr><tr><td>anti-CD11b rat-anti-mouse 항체 TC</td><td>Calteg, Burlingame, USA</td><td>R2b06</td><td></td></tr><tr><td>Purified anti-mouse F4/80 antibody</td><td>BioLegend, London, UK</td><td>123102</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>FITC-conjugated anti-Ly6C rat-anti-mouse 항체</td><td>BD Pharmingen, Heidelberg, Germany</td><td>553104</td><td></td></tr><tr><td>FACS buffer</td><td>BD Pharmingen, Heidelberg, Germany</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>Cy7 NHS Ester</td><td>GE Healthcare&nbsp; 유럽, 프라이부르크, 독일</td><td>PA17104</td><td></td></tr><tr><td>MPO ELISA</td><td>Immundiagnostik AG, Bensheim, Germany</td><td>K 6631B</td><td></td></tr><tr><td>Cy5.5 labeled anti-mouse F4/80</td><td>antibody BioLegend, London, UK</td><td></td><td>123127 ready to use labelled Antibodies (alternative)</td></tr><tr><td>Anti-Mouse F4/80 Antigen PerCP-Cyanine5.5</td><td>eBioscience, Waltham, USA</td><td>45-4801-80</td><td>ready to use labelled Antibodies (alternative)</td></tr><tr><td>DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td> <td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>67-68-5</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>792632</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>A4612</td><td></td></tr><tr><td>Tris Buffered Saline Solution (TBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>SRE0032</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur 유세포 분석 시스템</td><td>BD Biosciences GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FMT 2000 In Vivo 이미징 시스템</td><td>PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA</td><td>FMT2000</td><td></td></tr><tr><td>True Quant 3.1 이미징 분석 소프트웨어</td><td>PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA</td><td>FMT2000</td><td></td></tr><tr><td>Leica DMLB 형광 현미경</td>에 포함됨 <td>Leica,&nbsp; 35578 Wetzlar, Germany&nbsp;</td><td>DMLB</td><td></td></tr><tr><td>Bandelin Sonopuls HD 2070</td><td>Bandelin, 12207 베를린, 독일</td><td>HD 2070</td><td>초음파 균질기</td></tr><tr><td>일회용 메스 No 10</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, 독일</td><td>Z692395-10EA</td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum 가위 14cm</td><td>Ehrhardt Medizinprodukte GmbH, Geislingen, 독일</td><td>22398330</td><td></td></tr><tr><td>루어 잠금 주사기 5ml</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, 독일</td><td>Z248010</td><td></td></tr><tr><td>주사기 바늘</td><td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td><td>Z192368&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tube 50ml</td><td>BD Biosciences, Erembodegem, 벨기에</td><td>352070</td><td></td></tr></tbody></table>

검색 및 대 식 세포 관련 murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

질병의 murine 모델은 과학적 연구에 불가결. 그러나, 내 시경 검사 나 컴퓨터 단층 촬영 영상 등 많은 진단 도구는 정기적으로 동물 모델에서 채택 하지. 기존의 실험 판독 자주 내 개별 후속 시험을 방지 하 고 필요한 연구 동물의 수를 증가 하는 사후 고 비보 전 분석에 의존 합니다. 형광-중재 단층 형광 프로브의 비-침략 적, 반복, 양적, 3 차원 평가 수 있습니다. 매우 중요 한 특정 검색 및 고유한 분자 대상의 특성에 대 한 수 있는 분자 제조 업체의 사용 허가 하 고. 특히, 타겟된 프로브 염증, 자가 면역 질환, 감염, 혈관 질환, 셀 마이그레이션, tumorigenesis, 등에서 유전자 활성화 및 단백질 발현을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 문서에서는, 우리 단계별 지침을 제공이 정교한 이미징 기술에 vivo에서 탐지 및 (즉, f 4/80-긍정적인 대 식 세포 침투)의 널리 murine 모델에서 염증의 특성에 대 한 장 염증입니다. 이 기술은 또한 면역 세포 또는 줄기 세포 추적 같은 다른 연구 분야에서 사용할 수 있습니다.

Colitis의 평가:
DSS 유도 colitis 인간의 IBD를 닮 고 체중 감소, 직장 출혈, 표면 궤, 그리고 취약 쥐15점 막 손상에 이르게 하는 창 자 염증의 화학적으로 유도 된 murine 모델입니다. 타고 난 면역 체계가 장내 염증10,11의 발전에의 기여를 연구 특히 유용 합니다. Potently colitic 염증 유도, 쥐 들이 지속적으로 실험 통해 DSS를 관리. 체중 감소와 지저분한 신비로운 혈액 염증의 임상 색인으로 사용 되었다. 그림 1A에서 같이, 마우스 제어 동물 물 혼자 받고 몸 무게에 중요 한 변경 보여...

특정 대상 프로브 질병 (예를 들어, 염증, 감염, 및 tumorigenesis)의 다양 한 종류의 단백질 표정 등의 분자 메커니즘을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 연구에서 우리는 murine 모델 f 4/80 전용 형광 중재 단층 촬영을 사용 하 여 대 장 염의 장 대 식 세포 침투의 양적 차원 단층 평가 설명 합니다.

검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

이 표적 특이적 인 비보(in vivo) 이미징 접근법의 전반적인 목표는 염증성 장질환의 질병 활성 분자 마커를 시각화하는 것입니다. 이 방법은 염증성 장질환 분야의 핵심 질문과 더불어, 실험적 치료제나 특정 세포 사건이 염증에 미치는 영향에 관한 관련 치료 연구의 답을 찾는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 질병 활성을 비침습적으로 종단 관찰할 수 있다는 점입니다.이 방법은 염증성 질환에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 암이나 면역 관련 질환과 같은 다른 질병을 연구하는 데에도 적용될 수 있습니다. 대장염을 유도하려면, 100 milliliters의 멸균 증류수에 2 g의 dextran sodium sulfate(DSS)를 녹여 실험용 마우스의 음수 공급 용기에 채워주며, 마우스 한 마리당 하루 5 milliliters의 물을 섭취할 것으로 추정합니다. 스캔 24시간 전에, 빛이 차단된 멸균 주사기에 원하는 항체 칵테일을 넣고 실험 동물의 꼬리 정맥에 항체를 정맥 주사합니다.실험 당일, 빛의 반사와 흡수를 최소화하기 위해 전기 면도기를 사용하여 실험 동물의 복부 영역 털을 제모합니다. 두께와 흡수 특성이 정의된 조직 모사 팬텀을 사용하여, 팬텀에 관심 있는 항체 용액을 특정 부피만큼 채우고 FMT 장치에서 형광을 측정합니다. 그 다음, 소동물용 수의학적 형광 매개 단층 촬영(fluorescence-mediated tomography) 또는 FMT 장치에서 New Study를 클릭하고, 촬영 파라미터와 투여량을 포함하여 연구 설명에 관련 추적자를 입력합니다.실험 설계에 따라 연구 그룹을 구성하고, 각 그룹에 적절한 수의 동물을 배치합니다. 추적자 구조물에 대해 시스템 보정이 완료되면, 마취된 첫 번째 마우스를 42 °C 가열 가능 검사 카세트에 앙와위로 놓습니다. 카세트를 영상 시스템에 삽입하고 해당 연구 그룹에서 적절한 샘플을 선택합니다.추적자 농도 값이 정확하게 계산되도록 투여된 추적자를 선택하고, 스캔에 적합한 파장에서 형광 반사 이미지를 획득하십시오. 이미지 획득(Acquire Image)을 클릭하여 스캔 영역을 지정하고, 스캔 영역이 형광 반사 이미지 위에 오버레이로 표시되는지 확인하십시오. 오류가 발생하거나 털이 남아 있는 영역을 피하도록 주의하며, 관심 영역을 완전히 포함하도록 스캔 영역을 조정하십시오.이미지 대상으로 하여, 스캔 필드 내의 이미지 데이터 포인트 수를 설정할 스캔 필드 해상도를 선택하십시오. 그런 다음 Scan을 클릭하여 선택한 파장에서 이미지 획득을 시작하십시오. 스캔이 끝나면 카세트에서 동물을 꺼내어, 케이지로 돌아가기 전 모니터링 하에 동물이 완전히 회복될 수 있도록 하십시오.그 후 실험적으로 적절한 다양한 시점에 따라 FMT를 반복할 수 있습니다. 획득한 이미지를 분석하려면 적절한 영상 분석 소프트웨어를 열고 첫 번째 스캔의 raw 데이터를 선택하십시오. 재구성 도구를 사용하여 형광 분포의 3D 맵을 생성하십시오.모든 스캔이 적절한 재구성 데이터 세트에 추가되면, 관심 있는 첫 번째 데이터 세트를 엽니다. 선택한 개별 실험 동물을 대상으로 수행된 모든 스캔이 표시됩니다. 적절한 스캔을 선택하고 Load를 클릭하십시오.트레이서 분포의 3D 재구성이 처음에 획득한 형광 반사 이미지 위에 오버레이로 나타납니다. 다음으로, 재구성된 3D 맵에서 비특이적 표지 축적 지점을 식별하고 측정 도구를 사용하여 관심 영역을 선택하십시오. 그러면 소프트웨어가 관심 영역에 대한 형광 강도와 스캔 시 보정된 트레이서의 피코몰(picomolar) 양 측정값을 생성합니다.본 실험에서는 활성화된 대식세포를 직접 시각화하기 위해 마우스 F4/80에 대한 형광 접합 항체를 사용하였습니다. 비염증성 대조군 동물과 비교하여 염증성 대장염 마우스의 결장에서 형광 매개 단층 촬영을 통해 형광 추적자의 축적이 유의하게 증가한 것이 측정되었으며, 이는 염증성 동물에서 단핵구 침윤 및 활성 대식세포로의 분화가 증가했음을 나타냅니다. 반대로, 비특이적 형광 접합 IgG 항체를 적용했을 때는 염증성 그룹과 비염증성 대조군 그룹 모두의 복부 또는 장에서 검출 가능한 형광 반응이 나타나지 않았으며, 이는 F4/80 항체의 프로브-표적 상호작용의 특이성을 입증합니다.적출된 결장에서 F4/80 표적 추적자의 축적을 ex vivo로 측정한 결과, in vivo에서 검출된 F4/80 추적자 신호 축적이 결장에서 기인했음을 추가로 확인하였습니다. 실제로, 계산된 결합 항체 양은 조직학적으로 결정된 침윤 대식세포 수와 잘 상관관계가 있었으며, 이는 특정 추적자를 이용한 in vivo 영상 촬영이 국소 질환 활성도를 나타낼 수 있음을 확인시켜 줍니다. 일단 숙달되면, 적절하게 수행될 경우 몇 분 내에 분석 및 수행이 가능합니다.특이적 항체 기반 추적자 제작을 포함한 준비 단계는 보통 2~3일이 소요됩니다. 이와 같은 실험 절차를 계획할 때는 항체와 동물 질환 모델 모두에 대해 적절하고 신뢰할 수 있는 대조군을 포함하는 것이 중요합니다. 본 절차 이후에는 추가적인 의문을 해결하고 데이터를 검증 및 정량화하기 위해 대장내시경 또는 유세포 분석과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.

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미만성 형광 tomography는 잠복기로 높은 걸쳐 상대적으로 저렴한 비용과 잠재적인 접근 방식을...

암 생체 현지화위한 작은 동물의 계산된 Tomography 주 도형 시간 도메인 미만성 형광 Tomography

이 동영상은 형광 매개 단층촬영(FMT)을 사용하여 쥐 대장염 모델에서 장 대식세포 침투를 평가하는 기술을 보여줍니다. 덱스트란 황산나트륨(DSS)을 통해 마우스에 대장염을 유발하면 대장에 침투한 대식세포의 F4/80 당단백질 마커를 인식하는 항체를 동물에게 주입합니다. 그런 다음 FMT 장치에서 마우스를 이미지화하여 형광 및 반사 신호를 3차원 이미지로 재구성하여 형광의 공간 분포와 강도를 결정합니다.

쥐 장 염증을 평가하기 위한 형광 매개 단층 촬영(Fluorescence-Mediated Tomography) 사용

우리는 염증 단계를 구별하기위한 비 침습 이미징 방법을 설명합니다. 루미놀의 전신 배달 호중구의 MPO 활동에 의존 급성 염증의 영역을 보여준다. 대조적으로, lucigenin의 주입은 대 식세포에서 Phox 활동에 의존 만성 염증으로 시각화 할 수 있습니다.

생체 내 이미징 방법에 급성 및 만성 염증을 구별하는

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

형질전환 리포터 마우스와 주사 가능한 형광 라벨을 사용함으로써, 장기 생체 내 회전 디스크 컨포칼 현미경 검사는 ApcMin/+ 대장암 모델에서 장 선종에 대한 골수성 세포 거동을 직접 시각화할 수 있습니다.

골수 세포 역학의 실시간 영상 APC 최소 / + 소장 종양 디스크 공 초점 현미경을 회전시켜

생체 내 이미징을 위한 형광단의 사용은 옵소니화, 빠른 제거, 낮은 검출 감도 및 숙주에 대한 세포 독성 효과로 인해 크게 제한될 수 있습니다. 필름 수화 및 압출에 의한 리포솜 내 형광단의 캡슐화는 형광 소멸 및 보호로 이어져 높은 검출 감도로 in vivo 이미징을 가능하게 합니다.

위한 도구로 리포좀 캡슐화 된 근적외선 형광의 형광 담금질 생체 광학 이미징

형광 매개 단층 촬영(FMT)과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(μCT)을 결합한 하이브리드 이미징 프로토콜을 설명합니다. 융합 및 재구성 후, 우리는 형광 분포의 정량적 측정을 추출하기 위해 대화형 장기 분할을 수행합니다.

하이브리드 μCT-FMT 및 촬상 화상 해석

여기, 우리는 CD11c.DTR 마우스의 기관 내 디프테리아 독소 치료에 의해 유도되는 무균 성 심근염의 쥐 모델에서 심장 CD45 + 백혈구 침윤을 시각화하기위한 가벼운 시트 현미경 접근법을 설명한다.

Light Sheet Microscopy에 의한 심근 성 심근염의 Murine 모델에서의 백혈구 침윤의 정량적 시각화

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

본 연구는 전체 마운트 장 조직과 다광자 현미경을 사용하여 분비된 점액을 정량화하여 카르바모일콜린 클로라이드와 같은 자극에 대한 점액 역학의 정밀한 체적 분석 및 시각화를 가능하게 하는 3D 이미징 방법을 제시합니다.

전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화

여기서는 BSL-2 승인 마이코박테리움 결핵 증의 감쇠 체내 영상 프로토콜을 제시합니다. 영구 폐 창을 이용한 쥐 폐 내 스트레스. 이 접근법은 동일한 폐 미세환경 내에서 세균 위치, 혈관 역학, 대식세포 흡수 등 초기 숙주-병원체 상호작용의 종단적 단일 세포 분해 분석을 가능하게 합니다.

초기 혈관 내 감염 중 쥐 폐에서 희석된 위영양성 결핵 균의 생명체 내 영상

학습하세요 형광 중재 단층 촬영법을 이용하여 췌장염 마우스 모델에서 장 대식세포 침윤을 정량화하는 방법을. 이 비침습적 기술은 염증성 장 질환의 질병 활성을 종단적으로 모니터링하여 치료 연구에 활용됩니다.

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