Name: 전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: 배우세요 전체 마운트 조직과 다광자 현미경을 이용한 장 점액의 3차원 정량화 방법을. 이 기술은 점액 구조와 분포 변화를 정밀하게 측정하여 점막 면역학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Haber, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+survey+of+the+small+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single-cell survey of the small intestinal epithelium.</a> Nature. 551 (7680), 333-339 (2017).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+colon-derived+O-glycosylated+mucus+encapsulates+and+modulates+the+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proximal colon-derived O-glycosylated mucus encapsulates and modulates the microbiota.</a> Science. 370 (6515), 467-472 (2020).</li>
<li>Johansson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inner+of+the+two+muc2+mucin-dependent+mucus+layers+in+colon+is+devoid+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The inner of the two muc2 mucin-dependent mucus layers in colon is devoid of bacteria.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (39), 15064-15069 (2008).</li>
<li>Nyström, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intercrypt+subpopulation+of+goblet+cells+is+essential+for+colonic+mucus+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An intercrypt subpopulation of goblet cells is essential for colonic mucus barrier function.</a> Science. 372 (6539), eabb1590(2021).</li>
<li>Van Der Post, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+weakening+of+the+colonic+mucus+barrier+is+an+early+event+in+ulcerative+colitis+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Structural weakening of the colonic mucus barrier is an early event in ulcerative colitis pathogenesis.</a> Gut. 68 (12), 2142-2151 (2019).</li>
<li>Van Der Sluis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muc2-deficient+mice+spontaneously+develop+colitis%2C+indicating+that+muc2+is+critical+for+colonic+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Muc2-deficient mice spontaneously develop colitis, indicating that muc2 is critical for colonic protection.</a> Gastroenterology. 131 (1), 117-129 (2006).</li>
<li>Velcich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+in+mice+genetically+deficient+in+the+mucin+muc2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer in mice genetically deficient in the mucin muc2.</a> Science. 295 (5560), 1726-1729 (2002).</li>
<li>Birchenough, G. M., Nyström, E. E., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sentinel+goblet+cell+guards+the+colonic+crypt+by+triggering+NLRP6-dependent+Muc2+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A sentinel goblet cell guards the colonic crypt by triggering NLRP6-dependent Muc2 secretion.</a> Science. 352 (6293), 1535-1542 (2016).</li>
<li>Dolan, B., Ermund, A., Martinez-Abad, B., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearance+of+small+intestinal+crypts+involves+goblet+cell+mucus+secretion+by+intracellular+granule+rupture+and+enterocyte+ion+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Clearance of small intestinal crypts involves goblet cell mucus secretion by intracellular granule rupture and enterocyte ion transport.</a> Sci Signal. 15 (752), eabl5848(2022).</li>
<li>Gustafsson, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+method+for+studying+mucus+formation%2C+properties%2C+and+thickness+in+human+colonic+biopsies+and+mouse+small+and+large+intestinal+explants%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">An ex vivo method for studying mucus formation, properties, and thickness in human colonic biopsies and mouse small and large intestinal explants.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302 (4), G430-G438 (2012).</li>
<li>Sawaed, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotics+damage+the+colonic+mucus+barrier+in+a+microbiota-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotics damage the colonic mucus barrier in a microbiota-independent manner.</a> Sci Adv. 10 (37), eadp4119(2024).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core+1-and+3-derived+o-glycans+collectively+maintain+the+colonic+mucus+barrier+and+protect+against+spontaneous+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Core 1-and 3-derived o-glycans collectively maintain the colonic mucus barrier and protect against spontaneous colitis in mice.</a> Mucosal Immunol. 10 (1), 91-103 (2017).</li>
<li>Cortez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrovirus+infects+actively+secreting+goblet+cells+and+alters+the+gut+mucus+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Astrovirus infects actively secreting goblet cells and alters the gut mucus barrier.</a> Nat Commun. 11 (1), 2097(2020).</li>
<li>Knoop, K. A., Mcdonald, K. G., Mccrate, S., Mcdole, J. R., Newberry, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+sensing+by+goblet+cells+controls+immune+surveillance+of+luminal+antigens+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microbial sensing by goblet cells controls immune surveillance of luminal antigens in the colon.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 198-210 (2015).</li>
<li>Nikitas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcytosis+of+Listeria+monocytogenes+across+the+intestinal+barrier+upon+specific+targeting+of+goblet+cell+accessible+E-cadherin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Transcytosis of Listeria monocytogenes across the intestinal barrier upon specific targeting of goblet cell accessible E-cadherin.</a> J Exp Med. 208 (11), 2263-2277 (2011).</li>
<li>Tsai, Y. H., Disson, O., Bierne, H., Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murinization+of+internalin+extends+its+receptor+repertoire%2C+altering+Listeria+monocytogenes+cell+tropism+and+host+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Murinization of internalin extends its receptor repertoire, altering Listeria monocytogenes cell tropism and host responses.</a> PLoS Pathog. 9 (5), e1003381(2013).</li>
<li>Birchenough, G. M., Johansson, M. E., Gustafsson, J. K., Bergstrom, J. H., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+goblet+cell+mucus+secretion+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">New developments in goblet cell mucus secretion and function.</a> Mucosal Immunol. 8 (4), 712-719 (2015).</li>
<li>Maheras, K. J., Gow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+anesthesia+time+using+2%2C2%2C2-tribromoethanol-chloral+hydrate+with+low+impact+on+mouse+psychoacoustics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Increased anesthesia time using 2,2,2-tribromoethanol-chloral hydrate with low impact on mouse psychoacoustics.</a> J Neurosci Methods. 219 (1), 61-69 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,2,2-트리브로모에탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>2-메틸-2-부탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>6cm 접시 및 nbsp;</td><td>알파 플러스</td><td>16021-1</td><td></td></tr><tr><td>아가로스&nbsp;</td><td>히스파나가르</td><td>A02599</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>바이오샵</td><td>ALB001</td><td></td></tr><tr><td>카르바모일콜린 염화물; 98% (적정), 결정질</td><td>시그마</td><td>SI-C4382-1G</td><td></td></tr><tr><td>구리선 (새롭게)</td><td>탑 테크 와이어 & 케이블 인더스트리얼</td><td>IW00125</td><td>절연층이 없는 구리선입니다</td></tr><tr><td>집게</td><td>시네테</td><td>ST-M110</td><td></td></tr><tr><td>거즈, 멸균</td><td>GMTH</td><td>1940년 5월</td><td></td></tr><tr><td>그래프패드 프리즘 8&nbsp;</td><td>그래프패드 소프트웨어</td><td></td><td></td></tr><tr><td>온열 패드</td><td>편안함</td><td>SY-666</td><td></td></tr><tr><td>IMARIS 10.0.0</td><td>옥스퍼드 악기</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>비오보바스</td><td>BL0415-1000</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>제네스타</td><td>BL0180-1000</td><td></td></tr><tr><td>팔로이딘 표지 검사</td><td>인비트로젠</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>시네테</td><td>02-1250.18</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>머 크</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>밀 배아 응집체(WGA) 접합체</td><td>바이오티움</td><td>29027</td><td></td></tr><tr><td>자이스 7MP, W Plan-Apochromat 20 x/1.0 DIC III 수중 침수 대물렌즈(NA 1.0), Spectra-Physics Mai Tai HP 사파이어 펨토초 레이저(딥씨 모듈 없음), BP500 nm-550 nm 및 BP565 nm-610 nm 검출기, 750 nm 레이저 파장을 갖춘</td><td></td><td></td><td>고NA 대물렌즈를 장착한 3D 스택을 획득하는 데 사용된 영상 플랫폼; 750 nm 파장으로 설정된 다광자 현미경용 여기 소스</td></tr></tbody></table>

전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화

Three-dimensional Quantification of Intestinal Mucus Using Whole-mount Tissue Imaging

이 방법에서는 다광자 현미경을 통해 획득한 전체 마운트 조직의 적층 이미지에서 장 점액의 양을 정량화했습니다. 장 조직을 형광 팔로이딘과 밀 배아 응집소(WGA)로 염색하여 세포 F-액틴과 점액을 각각 시각화했습니다15,16. PBS로 처리된 회장 및 결장 조직 모두에서 WGA+ 점액은 주로 상피 표면의 잔 세포 내에서 검출되었습니다. 카르바모일콜린 클로라이드(CCh) 투여 후 두 조직의 장 내강에서 점액의 증가가 관찰되었습니다. 특히, 분비된 점액은 상피 위에 연속적인 층을 형성하지 않고 대신 내강 전체에 산발적으로 분포되었습니다(그림 3A). WGA+ 점액의 총 부피를 계산하기 위해 Imaris의 표면 생성 도구를 사용하여 스택 이미지의 모든 WGA+ 구조를 라벨링하고 세포내 잔 ...

Mucus plays a critical role in maintaining intestinal homeostasis by facilitating digestion, forming a barrier against microbes, and regulating immune ...

three-dimensional-quantification-intestinal-mucus-using-whole-mount

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

향상된 이미징 기술은 발달 중에 장기의 3차원 이미징을 가능하게 합니다. 여기에서는 태아 쥐의 장에서 발달 중인 융모의 실시간 이미징을 허용하는 전체 장기 배양 시스템에 대해 설명합니다.

에 대한 마우스 태아의 전체 소장 문화 시스템 전의 VIVO 신호 전달 경로와 융모 개발의 3 차원 라이브 영상의 조작

정확한 식별 및 장 점막 안감을 따라 상피 세포의 위치는 다른 세포 계보를 정의하는 것이 필수적이다. 장 조직의 적절한 촬상 최대 해상도 단백질 발현 패턴을 식별하기 위해 중요하다. 이 연구는 처리 마우스 장 조직을위한 최적의 방법과 조건을 서술하는 것을 목표로하고있다.

면역 조직 화학적 및 면역 형광 분석을위한 창자 조직 준비를위한 향상된 스위스 압연 기술

특정 대상 프로브 질병 (예를 들어, 염증, 감염, 및 tumorigenesis)의 다양 한 종류의 단백질 표정 등의 분자 메커니즘을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 연구에서 우리는 murine 모델 f 4/80 전용 형광 중재 단층 촬영을 사용 하 여 대 장 염의 장 대 식 세포 침투의 양적 차원 단층 평가 설명 합니다.

검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

우리는 거꾸로 회전 디스크 공초점 현미경 검사법에 의해 뮤린 소장의 내장 영상을 사용하여 GFP 표지된 γδ IELs를 구상하는 방법을 기술합니다. 이 기술은 최대 4 시간 동안 점막 내의 살아있는 세포의 추적을 가능하게하고 장 내 면역 상피 상호 작용의 다양한 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

뮤린 소장에서 상피 내 림프구의 활력 영상

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

이 간소화된 프로토콜은 조직을 고정하는 것에서부터 시투 혼성화에서 형광을 함유한 미생물을 염색하는 것까지 복잡한 조직 샘플에서 박테리아를 감지하고 이미지화하는 워크플로우를 자세히 설명합니다.

시투 혼성화, 렉틴 염색 및 이미징에서 형광을 통한 장내 미생물군유립 상호 작용의 시각화

소장이 다양한 크기의 미립자를 처리하는 방법을 연구하기 위해 우리는 소장 통과를 결정하기 위해 확립된 생체 내 방법을 수정했습니다.

내강 미립자의 쥐 소장 기계 감지 연구

여기서는 기본 3차원(3D) 장 세포주 모델 시스템과 고정 장 등가물의 광학 현미경 평가를 위한 파라핀 임베딩 프로토콜을 구성하는 방법을 설명합니다. 선택한 단백질의 염색을 통해 단일 실험에서 여러 시각적 파라미터를 분석하여 전임상 약물 스크리닝 연구에 사용할 수 있습니다.

면역 성분이 있는 기본 3차원(3D) 장 모델 시스템

여기에서는 감염 중 병원성 박테리아를 장기 전체에서 검출하고 형광 리포터 활동을 정량화할 수 있는 절차에 대해 설명합니다.

고분해능 3차원 전장기 단층촬영(High-resolution three-dimensional whole-organ tomography of microbial infections)

이 논문에서는 복막 전이의 3차원 구조를 특성화하기 위해 최적화된 다중 면역형광 프로토콜에 대해 설명합니다.

Iterative Bleaching Extends Multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징

배우세요 전체 마운트 조직과 다광자 현미경을 이용한 장 점액의 3차원 정량화 방법을. 이 기술은 점액 구조와 분포 변화를 정밀하게 측정하여 점막 면역학 연구에 활용됩니다.

전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화

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