Name: 플라즈마 의학-세포 액체에서 처리량 접근 기초 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: 배우세요 냉물리 플라즈마 처리가 세포 대사 및 면역원성 세포 사멸에 미치는 영향을 96웰 플레이트 고처리량 분석으로 연구하는 방법을. 이 기법은 플라즈마 의학 및 암 치료 연구에 활용됩니다.

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독일 연방 교육부 및 연구 자금 (BMBF 부여 번호 03Z22DN11 및 03Z22DN12)은 기꺼이 인정 했다.

1. 플라즈마 종 모니터링 및 치료 설정
<ol><li>
플라즈마 종 모니터링
	<ol>
<li>대기압 플라즈마 제트와 가스 유량을 공급 하는 분 당 2 개의 표준 리터의 최대 사용 합니다.</li>
		<li>깃털 축에 수직 광 방출 분 광 광도 계, 앞 제트 놓고 기록 광전자 방출 및 파장 (200-1000 nm)를 사용 하 여 전용 소프트웨어.</li>
		<li>질소 또는 산소 건조 또는 습도 공급된 가스 (5%)를 0.5% 혼합.</li>
		<li>각 가스 상태에 대 한 광 방출 분광학을 반복 합니다.</li>
		<li>분석 데이터의 그래픽 표시에 대 한 적절 한 소프트웨어와 함께.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
플라즈마 치료 설정
	<ol>
<li>컴퓨터 기반 xyz 테이블 jet 수정.</li>
		<li>우물의 위치를 식별 하 고 적절 한 치료 시간 각 우물의 센터의 위 테이블에 조인 하는 제트 이동 컴퓨터 스크립트를 생성 합니다.</li>
		<li>10 추가4 완전 한 세포 배양 매체의 100 µ L에 포유류 부착 세포의 모든 종류의 (FCS가 10%, 2% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 RPMI1640) 층 류 두건 아래 여러 우물에.</li>
		<li>세포 접착 하룻밤 5% 이산화탄소 습도 분위기에서 37 ° C에서 발생 하는 것을 허용 한다.</li>
		<li>20에 대 한 플라즈마 세포 치료 250 µ m 간격 다른 높이 (z 축)에서 s.</li>
		<li>세포 배양 매체에서 각 잘 propidium 요오드 화물의 25 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>이미지 피드 인해 세포 괴 사를 유도 하지 않는 특정 높이 확인 하려면 현미경 세포 가스 옆으로 셀 위에 문화 매체를 밀어. 참고: 긴 치료 시간에 대 한 식별 켜고 모드 플라즈마가 특정 높이에서 액체 증발 접시를 다시 설정 하는 데 필요한 doubledistilled 물의 microliters의 수량을 식별 하기 위해 플라즈마 치료 전후 무게 대우 웰 스에서 삼 투 항상성입니다.</li>
		<li>각 치료 시간 xyz 테이블에 대 한 최종 프로토콜을 준비 (여기: 20 s, 40 s, 60 s 플라즈마 및 60 s 가스 제어) 위치, 잘 하 고 있고 준비 멀티 채널 펫 저수지 96 잘 접시의 액체 처리에 대 한 후속 분석 실험에.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 플라즈마 처리 액체에 있는 주요 반응 구성 요소 분석
<ol><li>
과산화 수소 플라즈마 처리의 분석
	<ol>
<li>평면-바닥 96 잘 접시 3 중에서 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 플라즈마의 100 µ L를 취급 합니다.</li>
		<li>10 양 고추냉이 과산화 효소의 U와 PBS의 100 µ L 및 과산화 수소 검출 시 약의 5 µ M 로드 마스터 믹스를 준비 (충분 한 잘, 그에 따라 최대 규모).</li>
		<li>각 음을 마스터 믹스의 95 µ L를 추가 합니다. 참고: 이전 단계 해야 수행할 수 또는 플라즈마 소스에서 별도 방에 깨끗 한 벤치에서 대기 오존 분석 결과의 감도 줄일 수 있습니다.</li>
		<li>별도 접시에 100 µ L PBS에서 100 µ M의 최고 농도와 PBS에서 과산화 수소의 두 배 희석 시리즈 준비.</li>
		<li>검출 시 약을 포함 하는 웰 스에 샘플 또는 과산화 수소 기준의 5 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>웰 스는 읽어 후 배경 빼기에만 검출 시 약을 포함 포함 됩니다.</li>
		<li>실 온에서 15 분 동안 어둠 속에서 접시를 품 어.</li>
		<li>Λ전 535 nm 및 λem 590 nm에 형광을 측정 microplate 리더에 접시를 놓습니다. 참고: 있으면 높은 과산화 수소 농도 샘플, 샘플 희석 증가 될 필요가 또는 수치 분석 결과의 채도 피하기 위해 보육 시간을 단축 할 수 필요.</li>
		<li>모든 샘플에서 빈 값을 빼기, 과산화 수소 표준 곡선을 계산 하 고 해당 기준선 곡선에서 알 수 없는 샘플 과산화 수소 농도 계량.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
플라즈마 처리 아 질산염의 분석
	<ol>
<li>Flatbottom 96well 접시 3 중에서 플라즈마와 PBS의 100 µ L를 취급 합니다.</li>
		<li>물 doubledistilled의 99 µ L를 정량화 시 약의 1 µ L을 추가 하 여 아 질산염 검출 솔루션의 마스터 믹스를 준비 (충분 한 잘, 그에 따라 최대 규모).</li>
		<li>명확 하 고, flatbottom 96well 접시에 잘 당 100 µ L를 추가 합니다. 우물의 수에 대 한 필요에 따라 규모.</li>
		<li>Doubledistilled 물에 아 질산염 기준의 희석 시리즈 준비.</li>
		<li>표준 또는 샘플의 10 µ L 96well 접시에 마스터 믹스를 추가 합니다.</li>
		<li>실 온에서 10 분 동안 어둠 속에서 접시를 품 어.</li>
		<li>각 음에 아 질산염 정량화 개발자 솔루션의 5 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>Microplate 리더 λ전 365 nm와 λem 450 nm에에서 형광을 읽기.</li>
		<li>모든 샘플에서 빈 값을 빼기, 아 질산염 표준 곡선을 계산 하 고 해당 기준선 곡선에서 알 수 없는 샘플 아 질산염 농도 계량.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
플라즈마 처리 Superoxide의 분석
	<ol>
<li>산화 시 토 크롬 (1 mg/mL)의 마스터 믹스 만들기 및 PBS에 catalase (20 µ g/mL).</li>
		<li>분명, 평면 바닥 96 잘 접시의 우물에 믹스 마스터의 100 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>치료 조건 당 3 중에서 플라즈마와 마스터 믹스를 취급 합니다.</li>
		<li>읽기 흡 광도 550 nm microplate 리더;를 사용 하 여 이 데이터를 그래프.</li>
		<li>잘 내 시 토 크롬 C의 어 금 니 소멸 계수와 액체의 빛 경로 길이 사용 하 여 생성 하는 초과 금액을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 플라즈마에 노출 된 세포의 생물학 응답
<ol><li>
플라즈마 처리 셀의 다차원 읽어: 신진 대사 활동
	<ol>
<li>층 류 흐름 후드를 사용 하 여 다음 절차의 모든.</li>
		<li>씨앗 104 세포 (B16 murine 흑색 종) 100 µ L 완전 평면 바닥 96 잘 접시에 잘 당 세포 배양 매체 보충.</li>
		<li>5% 이산화탄소와 부 화기의 습도 분위기에서 37 ° C에서 하룻밤 세포 접착을 허용 합니다.</li>
		<li>Xyz 테이블을 사용 하 여, 플라즈마 또는 미리 정의 된 스키마에 따라 혼자 가스 우물을 취급 하 고 다시 20 h 인큐베이터에 셀을 추가. 참고: 원하는 경우 벗어 supernatants 20 h 후 분석 extracellular 제품; 이후에 신선한 매체의 100 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>각 잘 추가 500 µ M resazurin (최종 농도 100 µ M);를 포함 하는 셀 문화 매체의 25 µ L resazurin 혼자 셀 배경 빼기 없이 세포 배양 매체에 포함 된 3 개의 우물을 준비 합니다.</li>
		<li>인큐베이터에서 3 h에 품 어.</li>
		<li>Λ전 535 nm와 microplate 리더에서 λem 590 nm에 형광을 읽기.</li>
		<li>모든 샘플에서 배경 형광을 빼기 고 컨트롤 값에는 데이터를 정상화.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
플라즈마 처리 셀의 다차원 읽어: 이미지 분석
	<ol>
<li>3.1.7에서 잘 플레이트를 사용 하 고 상쾌한 삭제.</li>
		<li>1 µ g/mL propidium 요오드 화물을 포함 하는 신선한 세포 배양 매체의 100 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>각 잘 이미지를 자동화 한 단계 현미경 접시를 넣어. 참고: 영상 정보는 실험 질문;에 따라 달라 집니다. 여기, 20 X 목표 읽기에 밝은 필드 채널, 디지털 위상 대비 채널, 그리고 적절 한 여기 빛 및 방출 하는 형광 (propidium 요오드 화물) 채널에서 각 잘 시야 3 x 3이 콘텐츠 이미징 장치에 사용 된 필터입니다.</li>
		<li>양적 이미지 분석 소프트웨어 디지털 단계 이미지 보기의 모든 필드에에서 총 cytosolic 영역을 결정 하는 각 음에 몇 군데. 참고: 원하는 경우, 예를 들어, 가능한 및 죽은 세포의 미토 콘 드리 아 활동 전용된 얼룩을 사용 하 여 번호 추가 매개 변수를 분석 합니다. 경우에이 작품에서 설명 보다 다른 얼룩을 사용 하 여, 현미경 검사 법에 사용 되는 형광 얼룩 이후의 흐름 cytometry 실험에 사용 되는 형광으로 괴기 하 게 오버랩 되지 않는 있는지 확인 하십시오.</li>
		<li>데이터, 그래프 및 원하는 경우, 신진 대사 활동에 대 한 가져온 값으로 상관 관계에 대 한 테스트 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
플라즈마 처리 셀의 다차원 읽어: Cytometry 흐름
	<ol>
<li>이 분석에 대 한 단계의 3.2.5 잘 플레이트를 사용 합니다.</li>
		<li>삭제는 상쾌한 고 칼슘과 마그네슘을 포함 하는 PBS의 200 µ L로 두 번 씻어 (0.9 m m와 0.5 m m, 각각). 참고: 수정 또는 세포내 항 원 또는 세포 주기 분석의 얼룩 등이 기여에서 다루지 않는 추가 생물 정보에 대 한이 단계에서 세포를 permeabilize.</li>
		<li>각 잘 하려면 칼슘 및 마그네슘 50 ng/mL 반대로 마우스 calreticulin 단일 클론 항 체를 포함 된 PBS의 50 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>인큐베이터에서 15 분 동안 품 어.</li>
		<li>200 µ L의 두 번 씻어 완전히 세포 배양 매체를 보충 하 고 접시에 액체를 폐기.</li>
		<li>각 음을 세포 분리 솔루션의 100 µ L을 추가 하 고 인큐베이터에 20 분 동안 품 어.</li>
		<li>흠 없는 B16 셀 서 스 펜 션의 또 다른 세트를 사용 하 여 흐름의 cytometric 수집 프로토콜 게이팅 전략, 그리고 상승 및 전압 검출기의 설치.</li>
		<li>96 잘 접시를 위한 자동 샘플러 장비 교류 cytometer에 접시를 로드 합니다.</li>
		<li>앞으로 1000 셀과 사이드 분산형 인구 실행 가능한 세포와 일반적으로 관련 된 최소 취득.</li>
		<li>Cytometry, 관심, 인구 게이트를.fcs 파일의 분석에 대 한 전용 소프트웨어를 사용 하 고 calreticulin의 평균 형광 강도 결정 합니다.</li>
		<li>데이터, 그래프 및 원하는 경우, 대사 활동, 이미징, 및 산화 제 증 착에 대 한 가져온 값으로 상관 관계에 대 한 테스트 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

기초 연구의 효능 및 전 임상 및 임상 연구에 플라즈마 의학 underpinning 메커니즘의 이해를 개발 하기 위한 기본적 이다. 기초 연구는 또한 치료에 대 한 새로운 응용 프로그램의 수사를 승진 시킨다. 잘 설립 플라즈마 반응 산소 및 질소 종19의 세대를 통해 그들의 생물학적 효과 중재, 거기은 여전히 필드에 세 가지 주요 과제입니다. 첫째, 어떤 종은 중요 한? 이 부분적으로 광학 진단 및 생물 학적 판독 플라즈마의 피드 가스 조성 변조 하 여 응답 될 수 있다. 20 두 번째, 어떤 효과에서 볼 수 있습니다 세포 등 생물학적 목표? 이것은, 적어도 부분적으로, 세포 배양 실험 및 다양 한 분석 실험을 사용 하 여 해결 되었습니다. 진 핵 세포에서 효과 지원 뿐만 아니라 다 면 발현 성 등 세포 주기 검거21, apoptosis22, 괴 사23, 그리고 피부 세포 자극24,,2526또는 세포의 감소 운동 성 또는 대사 활동27,,2829. 이러한 다 면 발현 성 효과에 관련 된 세 번째 도전, 종종 다른 세포 유형에서 본 다양 한 효과 설명 하기 위해 플라즈마 파생 oxidants에 세포질 응답을 결정 하는 주요 분자를 식별 하는 것입니다. 이 행 해질 수 있다 omics 기술을30,,3132 에 의해 및 최대 또는 downregulation의 siRNA (redox) 억제제, 항 산화 및 항 산화 효소, 뿐만 아니라의 변조 신호를 사용 하 여 대상 유전자는 플라즈마의 반응 종 출력입니다. 33 , 34 , 35 따라서, 유선형된 분석 결과 프로토콜 필요 반복의 많은 함께 큰 샘플 세트를 테스트 합니다.
이 연구는 상기 과제에 관해서는 플라즈마 의료 연구를 위한 생물학, 물리학에서 효율적인 실험 워크플로 예로 보여주. 플라즈마 소스 및 플라즈마 생성의 엔지니어링 측면에 대 한 내용은 전에 설명 했습니다. 36 , 37 , 38 이 분석 실험의 모든는 다양 한 장점 96well 접시에서 수행 됩니다. 예를 들어, 셀 문화 supernatants 같은 샘플 수행할 수 있습니다 쉽게 분석 결과에서 조사, 예를 들어 효소 연결 된 immunosorbent 분석을 통해 단백질 농도를 컬렉션 판. 96-웰 스에서 직접 읽을 수 있는 과학적인 장비를 사용할 수 있는 경우 이러한 접근 방식은 샘플 및 handsontime 당 비용을 최소화 하 고 동일한 샘플에서 다른 분석 실험을 다중화 하 여 결과 최대화. 멀티 채널의 사용 펫 또한 샘플 처리 속도. 원칙적으로, 여기서 설명 하는 분석 결과 또한 수행할 수 있습니다 밖으로 더 큰 잘 직경, 잘 플레이트 형식을 사용 하 여 다른 튜브와 다운스트림 분석 실험에 대 한 선박으로 추가 pipetting 단계가 필요 하지만. 그러나 384well 접시, 작은 접시 유형, 큰 피드 가스 용으로 제트기를 사용 하 여 생물 플라즈마 연구에 적합 한 형상을 표시 하지 않습니다. 특히, 그것만 단일 하지만 하지 인접 한 웰 스는 치료 하는 동안 영향을 보장할 수 없습니다.
액체 분석 종 증 착은 플라즈마에 의해 조사 필수적입니다. 전문가 분석, 다른 분석 실험의 병렬 설치는 동시에 다른 산화 제에 관해서는 plasmatreated 액체 특징 수 있습니다. 이 다중화 plasmaderived 종의 차별화 된 사진을 개발 수 있습니다. 설명 방식은 매우 민감한 과산화 수소 농도39, 조사는 종종 필요 하지만 항상 플라즈마 효과 설명 하기 위해 충분 하지. 40 , 41 , 42 생물학 관련 효과 수 있습니다 또한 부과 액체에 glutathione 분석 여기에 포함 되지 않습니다와 함께. 43 특정 아 질산염 분석 결과 좋습니다 기존 Griess 분석 10fold 분석 결과 고감도 (데이터 표시 되지 않음) 때문에. Plasmatreated 액체 hypochlorous acid DTNB 분석 결과 사용 하 여의 형성에 대 한 조사도 수 있습니다. 그러나, 이전 결과 우리의 플라즈마 소스와 그 종 형성을 나타내지 않았다. 19 , 39 , 44 플라즈마 처리 완료 된 후 종 악화가 일어난다 시간이 지남에. 아 질산염 질산염;에 반응 또한, 과산화 수소는 시간이 지남에 따라 소모 됩니다. 그러나, 이러한 프로세스는 몇 시간이 걸릴. 35 시 토 크롬 c 흡수 뿐만 아니라 몇 시간 동안 안정적입니다. 따라서, 프로세스 처리 후 첫 30 분 이내 발생 하는 경우 여기에 설명 된 오래 된 종의 농도에 변화 무시할 수 있습니다. 그러나, 주의 해야 한다 90% 과산화 수소 1 h (데이터 표시 되지 않음) 내에 최대 청소 수 있는 성분으로 특정 종류의 미디어 (예를 들어, Dulbecco의 수정이 글 매체) 조사 때 플라즈마 과산화 수소 증 착에의 한 과소로 이어지는 액체입니다.
멀티플렉스 분석 결과 세포 표면 마커 식 신진 대사 활동을 조사 하 고 셀 영역 (형태)에서 범위를 제공 됩니다. 이 분석 실험의 조합 흥미로운 결과 공개 수 있습니다. 예를 들어 우리는 이전에 표시 THP1 monocytes 대사 활동 및 셀 수 플라즈마에 노출 다음 선형 패션에서 감소 하지 않습니다. 플라즈마 처리 시간을 증가 함께 45 래더 셀 크기에서 증가 했다 고 따라서 높은 신진 대사 속도를 percell으로 이어지는 높은 미토 콘 드 리아 질량을 했다 관찰 했다. 기본적으로, 조합의 여러 리더, 현미경, cytometry 멀티플렉싱 세포질 응답 다음 플라즈마 처리에 대 한 정보. 흑색 종 세포에 우리 여기에 초점을 세포 독성 효과 calreticulin에 의해 중재 그들의 immunogenicity. 46 으로 다른 많은 질문 이미징 및 흐름 cytometry 결과 함께 신진 대사 활동을 연결 하는이 방법을 해결할 수 있습니다. 예를 들어 세포 분화 (예: macrophage 분극), 미토 콘 드 리아 멤브레인 전위, 세포 주기 분석, 세포 운동 성, 역학, 또는 genotoxicity의 분석에 대 한 micronucleus 형성 수 있습니다 또한 조사에 플라즈마 처리 셀입니다. 다 색 cytometry 동시에 다른 세포 인구에서 더 많은 응용 프로그램에 대 한 수 있습니다. 예를 들어 신호 녹음 방송 요인, mRNA 정량화, 세포내 cytokines의 측정 및 평가 총 감소 thiols 단일 세포 수준에서의 단백질의 인 산화 상태에 대 한 분석이 포함 됩니다. 각 샘플에 사용할 수 있는 추가 생물학 관련 정보 현재와 미래의 플라즈마 응용 프로그램을 이해 하기 더 플라즈마 산화 환 원 효과의 그림을 개발에 에이즈.

반응 종은 비정상적인 상처1 과 암 치유를 포함 하 여 질병에 중요 한 산화 환 원 레 귤 레이 터 이다입니다. 2 중요 한 것은, 이러한 종 병 리 뿐만 아니라 그것의 치료 해결책에서 포함 된다. 3 , 4 찬 실제 플라즈마는 많은 종류의 반응 종 퇴 학 시켜도 이온화 가스 이다. 5 신체 온도6에서 작동 하는 소위 냉 플라스마의 출현 이후 차가운 플라스마 세포와 열 피해 없이 조직에 적용할 수 있습니다. 효능과 전 임상 및 임상 관찰에서 플라즈마 장치 안전 응용 프로그램으로, 3 독일에서 의료 기기로 인증을 받았습니다. 7 차적인 안전에 관해서는 특히 여러 연구 나타났습니다 최초의 장치, 대기압 아르곤 플라즈마 제트를 사용 하 여 돌연변이 이벤트의 부재. 8 , 9 , 10 다른 두 장치는 플라즈마 제트 보다 다른 원리를 통해 작동 하는 소위 유 전체 장벽 방전 (DBD)입니다. 특히, 제트기 DBD 플라즈마는 큰 하지만 오히려 평면 조직 영역에서 효율적인 반면 메스 같은 표면 및 충 치의 치료에 대 한 허용. 세포질 산화 환 원 신호11을 이용, 기술은의 목적은 생명 의학 어플리케이션에 대 한 플라즈마 생성 반응 종 활용 하입니다. 12 임상 플라즈마 치료의 특히 유망한 응용 상처 치유의 지원 이다. 13 , 14 , 15 또한, 플라즈마 표시 했다 동물 모델에서 항 암 효과가지고. 16 , 17 , 18
동물 모델, 또는 심지어 인간에서 플라즈마 응용의 안전과 효능 검증, 생체 외에서 연구 해야 플라즈마 장치 실시를 표준화. 이 실험은 플라즈마 응용 프로그램을 탐구 하 고 직장에서 메커니즘의 윤곽을 그리 다 필수적 이다. 또한, 기초 연구 반응 종 및 후속 생물학적 효과의 구성의 영향을 이해 하는 것 필요 합니다. 이 연구에서는 플라즈마 생물 의학 연구를 더 잘 이해 하 고 세포에 미치는 영향을 제어 통합할 수 있는 방법을 보여 줍니다. 그것은 피드 가스 조성, 반응 종 출력의 모니터링, 액체, 셀, 및 조직, 및 결과 화학 및 생물 학적 결과 플라즈마의 응용 프로그램 튜닝을 설명 합니다. 또한, 예제는 플라즈마 96 잘 접시에 의료 연구에 중점을 두고 플라즈마 처리 및 다운스트림 생물학 분석 실험의 표준화에 지시 제공 됩니다. 이 접근은 뚜렷한 장점: 나) 셀 필요 조건, 시 약 비용, 시간과 실습 샘플; 당 당 수의 최소화 ii) 당의 중복 또는 triplicate 치료; 쉽게 설정할 수 있습니다 결과의 높은 정확도 그리고 iii) 원활한 다운스트림 시 금 96 잘 형식 플레이트 리더, 이미징, 및 교류 cytometry 실험의 촉진.

<table><tbody><tr><td>accutase</td>, <td>BioLegend</td><td>423201</td><td></td></tr><tr><td>amplex Ultra Red 검출 키트(말무 과산화효소 및 H2O2 포함)</td><td>Thermo</td><td>A36006</td><td></td></tr>, <tr><td>아르곤 가스</td><td>, Air Liquide,</td><td>N50</td><td></td></tr>, <tr><td>B16F10, 쥐 흑색종 세포</td>, <td>ATCC</td>, <td>CRL-6475</td><td></td></tr>, <tr><td>카탈라아제</td>, <td>Sigma</td><td>C30</td><td></td></tr>, <tr><td>세포 배양 인큐베이터</td><td>바인더</td><td>CB210</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스틱</td><td>NUNC</td><td>156545</td><td></td></tr><tr><td>시토크롬 c, 산화</td><td>시그마</td><td>C2037</td><td></td></tr><tr><td>데이터 분석</td><td>GraphPad 소프트웨어</td><td>프리즘 7.03</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>시그마</td><td></td><td>배치 테스트</td></tr><tr><td></td><td>0.01mg</td>유세포 분석기의 해상도로 모든 미세 스케일 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Beckman-Coulter</td><td>CytoFlex S</td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석 데이터 분석</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Kaluza 1.5a</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>이미징 정량화 소프트웨어</td><td>PerkinElmer</td><td>Harmony 4.5</td><td></td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>Thermo</td><td>Maxisafe 2020</td><td></td></tr><tr><td>질량 유량 컨트롤러</td><td>MKS</td><td>G 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>Measure-iT 아질산염 검출 키트</td><td>Thermo</td><td>M36051</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>PerkinElmer</td><td>Operetta CLS</td><td></td></tr><tr><td>광학 emssion 분광법</td><td>Avantes</td><td>AvaSpec-DDDD-2-USB2</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Thermo</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>피펫</td><td>Eppendorf/Brand</td><td>single/multi chanel</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 리더</td><td>Tecan</td><td>M200pro</td><td></td></tr><tr><td>프로피듐 요오드</td><td>BioLegend</td><td>421301</td><td></td></tr><tr><td>resazurin</td><td>VWR</td><td>B21187.06</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640 세포 배양 미디어</td><td>PanbioTech</td><td>P04-16500</td><td></td></tr><tr><td>xyz 테이블</td><td>CNC 단계</td><td>HIGH-Z S-400/T&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

플라즈마 의학-세포 액체에서 처리량 접근 기초 연구

Basic Research in Plasma Medicine - A Throughput Approach from Liquids to Cells

플라즈마 의학, 척추 시스템의 주변 온도와 이온된 가스는 세포와 조직에 적용 됩니다. 콜드 플라즈마 생성 반응 종 redox 알려진 조절 건강 및 질병에 생물학 과정. 전 임상 및 임상 증거는 피부의 만성 궤 양 치유에 플라즈마 처리의 유익한 효과를 가리킵니다. 플라즈마 암 치료 등 다른 신흥 주제 증가 관심을 받고 있다. 플라즈마 의료 연구는 물리학, 화학, 및 의학 분야 전문 지식을 필요합니다. 플라즈마 연구의 한 목표는 특정 응용 프로그램의 다양 한 플라즈마 처리 셀의 특성입니다. 이 포함, 예를 들어 세포 수 그리고 생존, 세포질 산화, 미토 콘 드리 아 활동, 세포 독성 및 세포 죽음, 세포 주기 분석의 세포 표면 마커 식 및 cytokine 릴리스. 이 연구는 필수 장비와 같은 플라즈마 생물 의학 연구에 필요한 워크플로 설명 합니다. 대기 압력 아르곤 플라즈마 제트, 특히 그것의 기본적인 방출 스펙트럼 모니터링 및 먹이 반응 종 출력 변조 하 가스 설정의 적절 한 작업을 설명 합니다. 높은 정밀 xyz 테이블 및 컴퓨터 소프트웨어를 사용 하 여, 제트기는 맴돌고 밀리초 정밀도에서 최대한 재현성에 대 한 마이크로 미터-정밀에서 96 잘 접시의 구멍. 산화 환 원 활동적인 분자의 액체 분석에 대 한 다운스트림 분석 표시 되 고 대상 셀은 플라즈마 처리. 특히, 흑색 종 세포 동일한 셀을 사용 하 여 다른 연속 분석 실험의 효율적인 순서로 분석: 신진 대사 활동, 총 셀 영역, 그리고 calreticulin에 대 한 중요 한 분자의 표면 마커 식의 측정은 암 세포의 면역성 세포 죽음입니다. 이 분석 실험 단일 플레이트에서 플라즈마 효과 대 한 내용이 풍부한 생물 정보를 검색합니다. 이 연구 필수 단계 및 플라즈마 의료 연구에 대 한 프로토콜을 설명합니다.

이 연구에서 간소화 된 워크플로우는 플라즈마의 효과에 의료 연구에 대 한 설명 했다. 여기에 활용 하는 종합 접근 플라즈마 제트, 액체, 반응성 주성분의 기본적인 광학 방출 프로 파일을 분석 하 고 세포의 생물학적 반응 (그림 1) 플라즈마로 처리.
이 워크플로 실시, 다양 한 구성 요소는 플라즈마 소스 (그림 2)를 제대로 설정 하 필요 했다. 다른 가스 (여기 주로 아르곤, 산소 및 질소)에 공급 되었고 여러 질량 유량 컨트롤러에 의해 제어. 중앙 패널 디지털 질량 유량 컨트롤러 미리 지정 된 피드 가스 플럭스를 조정에 사용 되었다. 특정 피드 가스 작곡 항복, 가스 여러 질량 유량 컨트롤러 (그림 2A)에서 가스를 결합 하는 밸브의 패널을 이용 하 여 물리적으로 혼합 했다. 플라즈마 소스는 켜지 고 플라즈마 유출 한 USB-분 광 광도 계 (그림 2B) 200의 광학 범위 앞 세워졌다 1000 nm nm. 액체 및 세포 치료에 대 한 효율적인 워크플로 96 잘 접시를 사용 하 여 설명 했다. 다 잘 요리 베이스 플레이트에 고정 플라스틱 프레임을 사용 하 여 삽입의 패키지 구멍 (그림 2C) 일치와 장소에서 개최 했다. 전체 설치 층 흐름 후드 (그림 2D) 배치 했다. 이 설치 포함 xyz 테이블 플라즈마 제트의 휴대용 조각을 탑재 했다. 후자는 충분히 큰 케이블 포트와 xyz 테이블에 경우 벤치, 외부 모터 제어 요소를 찾을 수 있습니다. 중요 한 것은, 테이블 컴퓨터 제어 이었고 마이크로미터 정밀 각의 센터를 통해 원하는 양의 시간에 대 한 제트기를 프로그래밍할 수 있습니다. 또한, (우리의 설치 잘 A1)에서 시작 위치 (그림 2E) 선택 자유롭게 되었다. 플라스틱 접시 홀더, 함께이 전적으로 액체 및 생물 실험의 설치에 관련 된 어떤 일상적인 변화 재현 플라즈마 처리에 대 한 허용.
다른 피드 가스 조건 (그림 3A) 구성 요소 반응 플라즈마에 연결 된 다른 봉우리를 따라 광 방출 분광학 (OES) 사용 되었다. 330에서 봉우리와 질소의 예를 들어 두 번째 긍정적인 시스템 380 nm 대표 반응성 질소, 종과 309 nm 대표 수 산 기 급진 파 (화살표 그림 3A)에서 피크 nm. 혼자 아르곤 가스에 비해, 질소의 존재 증가 질소의 혼합물으로 공급된 가스에 산소 또는 습도 저하 또는, 각각 감소 하는 반면. 대조적으로, 수 산 기 급진 파의 존재 산소 또는 질소 감소 했지만 현저 하 게 증가 하는 경우 습도 아르곤 가스 공급된으로 사용 되었다. 액체의 플라즈마 처리, 아르곤 가스와 아르곤 플라즈마에 의해 발생 하는 증발 결정 했다 첫번째 (그림 3B). 중요 한 것은, 플라즈마는 또한 온도에 영향을 미치는 때문에 두 조건이 모두 비슷한 결과 얻을 하지 않았다. 수 산 기 급진 파의 OES 결과 따라 과산화 수소 증 착 크게 산소 또는 질소 혼합물으로 감소 하지만 습도 공급 가스 (그림 3C) 증가. 또한, 공급된 가스에 질소의 아르곤 플라즈마 처리 액체 (그림 3D)에 비해 크게 높은 아 질산염 농도 이끌어 냈다. 이 워크플로 수 또한 다른 작곡과 액체에 플라즈마의 영향을 조사 하기 위해 사용할 수 있습니다. 예를 들어 과산화 수소 농도 PBS 및 RPMI1640 세포 배양 매체 (그림 3E) 혈 청 태아 종 아리의 존재의 독립적인 것 같았다. 동일한 샘플에서 혈 청의 존재는 그들의 혈 청 비 포함 대응 (그림 3F)에 비해 PBS와 세포 배양 매체에서 아 질산염 농도 감소. 대부분 초과 산소 / 질소 혼합 크게 냉각 하는 습도 아르곤-산소 플라즈마 (그림 3G)을 제외한 초과 세대와 건조 아르곤 가스 조건에서 제작 되었다.
다 잘 요리에서 셀의 플라즈마 치료를 위해 포함 셀 시드 하루 전에 접시 인큐베이터에서 제거 하 고 플라스틱 홀더를 추가 했다. 프로그램된 치료 패턴 적용, 증발 했다에 대 한 보상 및 접시 20 h. 참고는이 부 화 후 셀 문화 supernatants 수 새, 빈 96 잘 접시에 수집 되었고-저장에 대 한 인큐베이터에 다시 배치 했다 관심사의 단백질의 평가 위한 80 ° C. 다음으로, resazurin의 각 셀에 추가 되었습니다. 비 형광 형광 resorufin에 resazurin의 활성 NADPH를 생성 하는 효소에 의해 촉진 되었다 고 전반적인 신진 대사 활동(그림 4)와 상관 했다. 형광 강도 접시의 시각적 인식에 유사 했다 그리고 장기간된 플라즈마 처리 (그림 4B)의 세포 독성 효과 표시. 습도 가스 조건 건조 가스 조건 보다 더 유해 했다. 접시에 같은 셀 추가 다운스트림 분석 실험에 대 한 활용 했다. 접시에 셀은 현미경으로 조사 (그림 4C). 이미징 소프트웨어를 사용 하 여, 접시의 여러 우물 질적 비교 (그림 4D)를 위해 시험 되었다. 소프트웨어 허용 전체 면적의 정량화에 각 잘 인수 시야 내의 셀 하 고 결과 데이터를 각각 컨트롤 (그림 4E) 표준화 했다. 총 셀 영역의 감소 특히 습도 공급된 가스 조건으로 플라즈마 처리 샘플에서 보였다. 이미징, 후 셀 세척, 반대로 마우스 calreticulin 항 체와 스테인드, 분리, 되었고 cytometry (그림 4F)와 분석. 형광 calreticulin 가능한 셀 (그림 4G)에 얼룩의 농도 계산 되었고 샘플 (그림 4H) 사이 비교 의미. 플라즈마 처리는 플라즈마 처리 시간 건조 피드 가스 조건 적용에 대응 murine 흑색 종 세포 표면에 calreticulin의 upregulation를 유도 한다. 습도 공급된 가스 조건, 20 대와 40 치료의 s 60 s 처리 시간 더 치명적인에 비해 강력한 calreticulin 노출 유도. 이 셀에 도입 oxidants의 양에 관해서는 calreticulin 노출의 비 선형 레 귤 레이 션 했다 나왔다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56331/56331fig1.jpg"> 그림 1 : 생물학 물리학에서 플라즈마 의료 연구의 워크플로. 대기압 아르곤 플라즈마 제트의 반응 종 출력 피드 가스를 변조 하 여 조정 됩니다. 플라즈마 가스 단계에서 선택한 분자 분광학을 사용 하 여 모니터링 됩니다. 플라즈마는 액체를 취급 하 고 산화 제 증 착을 조사 하는 데 사용 됩니다. Microplates에서 경작 하는 세포는 플라즈마 처리 하 고 생물 학적 판독 수행 됩니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56331/56331fig1large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56331/56331fig2.jpg"> 그림 2 : 플라즈마 연구 벤치의 설치. (A)에 있는 다른 가스 스테인리스 파이프 중앙 패널을 통해 제어 되는 여러 질량 유량 컨트롤러에 구동 됩니다. 개별 피드 가스 조성 이후 밸브의 패널을 사용 하 여 혼합 합니다. (B) 광학 방출 분광학을 사용 하 여 다양 한 피드 가스 구성 간의 차이점을 조사 하는 플라즈마의 사후 일부 구성 요소를 모니터링할 수 있습니다. (C) 높은 처리량 플라즈마 연구, 96-잘 microplates 사용 됩니다. 상수 풀 그릴과 자동 플라즈마 처리에 대 한 출발점을 위해 접시는 매일 접시의 동일한 절대 위치를 보장 하는 프레임에 추가 됩니다. (D) 플라즈마 제트는 컴퓨터 제어 xyz-표 층 흐름 후드 아래에 고정 됩니다. 모든 96 정확한 위치 및 각에 플라즈마의 유지 시간 잘 플라즈마 소스의 움직임을 안내 하는 프로그램 파일에 기록 됩니다. 플라즈마 제트 장치 모터 제어의 기본 틀은 가까이에 있습니다. (E) 96 잘 접시의 플라즈마 처리를 자동화. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56331/56331fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56331/56331fig3.jpg"> 그림 3 : 플라즈마 제트와 액체 분석. (A) 광학 방출 분광학 다른 피드 가스 조건의 표시 됩니다. 질소의 두 번째 긍정적인 시스템 (330 380 nm nm) 산소 혼합물의 경우 결 석, 질소의 혼합물으로 증가 하 고 습도 아르곤 (왼쪽 패널) 현저 하 게 감소 되었다. 309에 수 산 기 급진 파의 피크 nm (화살표) 질소와 산소 조건에서 감소 하지만 습도 아르곤 아르곤 가스 혼자에 비해 현저 하 게 증가. (B) 가스 노출 액체의 증발을 리드. 플라즈마 및 아르곤 가스 혼자 치료 시 96well 접시에 잘 당 증발 양의 벌금 규모를 사용 하 여 치료 전후 접시 무게에 의해 결정 되었다. Plasmatreated 샘플에 증발 했다 높은 비교 아르곤 gastreated 샘플에. (C) (A)에 수 산 기 급진 파의 309 nm 피크와 어느 정도 상관 plasmatreated 액체에 수소 과산화물의 생성. 습도 (5%) 아르곤 플라즈마에 대 한 4fold 과산화 수소 농도 증가. (D) 아 질산염 질소 공급된 가스에 추가 하 고이 효과 습도 아르곤 플라즈마로 증가 했다 상승 했다. 산소의 추가 감소 아 질산염 발생 하지만 크게 없습니다. (E, F) 수소 과산화 수소와 아 질산염 농도 액체, 즉 RPMI1640 세포 배양 (R10F)와 다른 종류에 표시 됩니다 (R0F) 없이 PBS와 함께 송아지 태아 혈 청 (FCS) 없이 뿐만 아니라. 과산화 수소 레벨 아 질산염 수준 혈 청의 존재에 크게 감소 했다 반면 다른 미디어 (E) 사이 다 하지 않았다. (G) 초과 생산은 높은 건조 아르곤 가스 공급 가스; 질소, 산소, 또는 습도 아르곤의 혼합 액체에 낮은 초과 증 착을 했다. (B-G)을 표시 하는 데이터는 평균 + 2 ~ 3 실험의 SEM. 통계 분석 수행된 (C, D) 단방향 분산 분석 비교는 개별 컨트롤에 대 한 건조 또는 습 한 피드 가스 조건 전체 그룹 수단을 사용 했다 (* * p &lt; 0.01; * * * p &lt; 0.001). 또한, 아르곤 가스 전용 플라즈마 조건 그룹 전체와 t-검정을 사용 하 여 비교 했다 (# p &lt; 0.001). 통계 분석 (F) 각 플라즈마 처리 및 중간 조건 없이 FCS FCS와 샘플에서의 값을 비교 하는 t-테스트를 사용 하 여 수행한 추가 (* p &lt; 0.05; * * p &lt; 0.01); 또한, FCS 또는 비 FCS 포함 솔루션 내에서 t-검정을 사용 하 여 각 플라즈마 처리 시간 비교 했다 (# p &lt; 0.05; # # p &lt; 0.001). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56331/56331fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56331/56331fig4.jpg"> 그림 4 : 플라즈마 치료 및 세포에 미치는 영향. (A) 세포 플라스마에 노출 되었다과 resazurin 신진 대사 활동을 평가 하기 위해 20 h 후 추가 되었습니다. (B) 활동 plasmatreated 샘플 가스 컨트롤에 비해 크게 감소 했다. 표시 된 감소 산소 및 질소의 추가 모두 건조 하 고 습 한 아르곤 가스 조건에서 독성을 리드 하는 반면 공급된 가스의 습기와 보였다. (C) 매체 propidium 요오드 화물 (PI)를 포함 하는 추가 되었습니다. (D) 개요 (녹색) 죽은 세포를 식별 하기 위해 디지털 위상 대비 (오렌지) 각 셀의 PI cytosolic 분수를 나타내는 격판덮개의 우물의 표시 됩니다. 이미징 도구는 각 세포로 덮여 잘의 시야 내에서 전체 면적의 측정 허용입니다. (F) 셀 이후에 씻어 고 항 체와 다른 세포 마커 생물 플라즈마 효과 cytometry 사용 하는 인 큐베이 팅. (G) Gating 전략 고용 및 마커 분석 수행 되었고 샘플 사이 비교. (B, E, H)를 표시 하는 데이터는 평균 + 3 개의 독립적인 실험에의 한 대표자의 SEM를 나타냅니다. 눈금 막대 = 200 µ m (D). 통계 비교 차이 (B, H) 비교, 각 가스 상태에 대 한 각 가스 컨트롤에 각 플라즈마 처리의 양방향 분석을 사용 하 여 수행 했다 (* p &lt; 0.05; * * p &lt; 0.01; * * * p &lt; 0.001). 또한, 질소 및 산소 혼합의 각 상태에 대 한 값 값 건조에 대 한 아르곤 가스 플라즈마의 비교 되었다 하 고 별도로 습 한 조건 (분산;의 양방향 분석 # p &lt; 0.001). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56331/56331fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

액체 및 셀의 높은 처리량 차가운 실제 플라즈마 치료 프로토콜 표시 됩니다. 플라즈마 처리 후 플라즈마의 방출 스펙트럼, 액체 및 세포 활동의 후속 분석 측정 다른 피드 가스 플라즈마 점화에 대 한 구성 설정 포함 됩니다.

In plasma medicine, ionized gases with temperatures close to that of vertebrate systems are applied to cells and tissues. Cold plasmas generate reactive ...

이러한 다중 웰 기반 염기서열 분석의 전반적인 목표는 광학 방출 분광법, 액체 분석 및 세포 활성, 현미경 및 유세포 분석 분석을 사용하여 체외에서 생물학적 반응에 대한 산화제에 대한 저온 물리적 플라즈마의 영향을 더 잘 이해하는 것입니다. 이 방법은 혈장 의학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 특히 면역원성 암세포 사멸 유도에 중요한 혈장 유래 지시 종과 관련하여 답변하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 반자동 접근 방식이라는 것입니다.96개의 웰 플레이트를 사용하여 연구 속도와 생산성을 높입니다. 이 기술의 의미는 피부과 또는 종양학과와 같은 미래의 혈장 요법으로 확장됩니다. 그리고 생물학적 반응과 관련된 혈장 유래 지시 종을 식별할 수 있는 수단을 제공하기 때문입니다.이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 기술자인 Felix Niessner가 맡을 것입니다. 플라즈마 종 모니터링을 위해 기둥 축에 수직인 광학 방출 분광 광도계 앞에 대기 플라즈마 제트를 배치하고 전용 소프트웨어를 사용하여 분당 2개의 표준 리터 공급 가스 플럭스에서 각 가스 상태의 광방출 및 파장을 기록합니다. 플라즈마 처리된 과산화물 분석의 경우, 적절한 처리 시간 및 웰 위치와 함께 XYZ 테이블에 대한 최종 프로토콜을 설정합니다.그런 다음 갓 준비한 마스터 믹스 100마이크로리터를 바닥이 평평한 투명한 96웰 플레이트의 웰에 3회씩 추가하고 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 550나노미터에서 흡광도를 측정합니다. 세포 대사 반응에 대한 혈장 처리의 효과를 분석하기 위해 층류 후드에서 평평한 바닥 96 웰 플레이트에서 웰당 완전히 보충된 세포 배양 배지 100마이크로리터에 있는 4개의 관심 세포에 10배를 1회 파종하고 밤새 배양합니다. 세포 배양 인큐베이터에서 하룻밤 배양 후 실험 분석에 따라 XYZ 테이블을 사용하여 웰을 플라즈마 또는 가스만으로 처리하고 세포를 다시 20시간 동안 인큐베이터로 되돌립니다.두 번째 배양이 끝나면 500마이크로몰 Resazurin이 보충된 25마이크로리터의 신선한 세포 배양 배지를 세포와 3개의 백그라운드 컨트롤 Resazurin 전용 웰에 추가합니다. 세포를 인큐베이터로 되돌려 3시간 동안 배양합니다. 그런 다음 마이크로 플레이트 리더에서 형광을 측정합니다.혈장 처리된 세포의 이미징을 위해 형광을 판독한 후 상층액을 100마이크로리터의 신선한 세포 배양 배지로 교체하고 1밀리리터당 1마이크로그램의 프로피듐 요오드화물을 보충합니다. 플레이트를 전동 현미경 스테이지에 놓고 20x 대물렌즈를 선택하여 세포를 이미지화합니다. 그런 다음 적절한 정량적 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 각 웰에서 이미징된 모든 시야의 디지털 위상차 이미지에서 총 세포질 면적을 결정합니다.혈장 처리된 세포의 유세포 분석을 위해 이미징 후 각 웰의 세포를 200마이크로리터의 PBS로 2회 세척하고 세척당 칼슘과 마그네슘을 보충한 다음, 50마이크로리터의 PBS에 항마우스 칼레티큘린 단클론 항체 밀리리터당 15 애너그램과 웰당 칼슘 및 마그네슘을 라벨링합니다. 세포 배양 인큐베이터에서 15분 후 200마이크로리터의 완전한 세포 배양 배지로 세포를 두 번 세척하고 섭씨 37도에서 20분 동안 각 웰에 100마이크로리터의 세포 분리 용액을 추가합니다. 세포가 분리될 때, 유세포 분석기에 플레이트를 로드하고 일반적으로 생존 가능한 세포와 관련된 전방 및 측면 산란 집단에서 최소 1, 000 이벤트를 획득합니다.그런 다음 적절한 유세포 분석 소프트웨어를 사용하여 관심 모집단을 게이트하고 칼레티큘린 발현의 평균 형광 강도를 측정합니다. 광학 방출 분광법은 다양한 공급 가스 조건에서 반응성 플라즈마 성분과 연결된 뚜렷한 피크를 추적하는 데 사용할 수 있습니다. 액체의 플라즈마 처리의 경우, 아르곤 가스와 아르곤 플라즈마로 인한 증발이 먼저 결정되며, 플라즈마가 온도에도 영향을 미치기 때문에 조건에 따라 다른 증발 결과가 생성됩니다.하이드록실 라디칼에 대한 광학 방출 분광법 결과와 유사하게, 과산화수소 증착은 산소 또는 질소 혼합물에서 크게 감소하지만 가습 공급 가스에서는 증가합니다. 또한, 공급 가스에 질소를 첨가하면 아르곤 플라즈마 처리된 액체에 비해 질산염 농도가 크게 높아집니다. 대부분의 초산화물은 건조 아르곤 가스 조건에서 생성되며, 가습된 아르곤 산소 플라즈마가 있는 경우를 제외하고는 산소 및/또는 질소 혼합물이 초산화물 생성을 크게 냉각시킵니다.레사주린(Resazurin)과 플라즈마(plasma) 처리된 세포의 형광 강도는 세포 배양의 상층액에 대해 육안으로 관찰된 물리적 변화와 유사하며, 이는 장기간의 플라즈마 처리에 따른 세포독성 효과를 확인한다. 총 세포 면적의 감소는 플라즈마 처리에 대한 노출 감소에 대한 반응으로 특히 가습된 공급 가스 조건 하에서 관찰되며, 미렌 흑색종 세포에서 칼레티큘린 염색의 전반적인 상향 조절이 관찰됩니다. 적절하게 수행되면 mytoplex 세포 분석 및 판독을 단 몇 시간 만에 완료할 수 있습니다.이 절차에 따라 면역 세포와의 공동 배양 또는 세포 배양 상층액 분석과 같은 다른 방법도 수행할 수 있습니다. 이는 댐(dams), 사이토 클라이언트(cyto client) 또는 리덕스(redux) 단백질의 방출과 혈장 처리된 흑색종 세포의 면역 인식에 대한 추가 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 개발 후 이 기술은 예를 들어 3D 종양 스페로이드와 같은 흑색종 주기에 대한 추가 연구를 위한 길을 열었습니다.이 동영상을 시청한 후에는 플라즈마 기체 상태, 반응성 분자 및 액체에 대한 연구, 흑색종 세포의 생물학적 반응에 이르기까지 혈장 의학에서 기본 연구를 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

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Environment

환경

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마이크로 혈액 흐름의 속도 분포 측정을위한 마이크로 입자 이미지 유속계

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