Name: 측 두 엽 간 질 및 뇌 파 마우스에 Radiotelemetry 시스템을 사용 하 여 모니터링 Pilocarpine 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: 배우세요 필로카핀을 이용해 마우스에서 간질 지속 상태를 유도하고 무선 원격측정 시스템으로 자발적 재발 발작을 모니터링하는 방법을. 이 기술은 만성 간질의 병태생리 메커니즘 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 작품은 한국 정부 (NRF-2014R1A1A3049456)에 의해 투자 하는 한국 국립 연구 재단 (NRF) 그랜트와 한국 건강 기술 R & D 프로젝트 통해는 한국 보건 산업 개발 연구소 (진흥원), 부여에 의해 지원 되었다 보건 복지, 한국 공화국 (HI15C2854)에 의해 자금.

모든 실험 절차 가톨릭 대학교의 윤리 위원회에 의해 승인 및 관리 및 실험 동물 사용 (NIH 간행물 번호 80-23)에 대 한 국가 학회 건강 가이드에 따라 실시 했다.
1. SE 유도
<ol><li>8 주 오래 된 남성 C57BL/6NHsd 마우스를 구입 하 고 각 마우스 무게. 그런 다음 마커 펜을 사용 하 여 SE 유도 하는 동안 그들의 쉬운 id에 대 한 모든 쥐의 꼬리를 표시.</li>
	<li>마우스 무게에 따라 scopolamine 메 틸 브 로마 이드 (scopolamine; 2 mg/kg), terbutaline hemisulfate (terbutaline; 2 mg/kg), 및 pilocarpine 염 (pilocarpine; 280 mg/kg)의 양을 계산 하 고 식 염 수 (0.9 %NaCl, 10 mL/kg) 솔루션에 추가 합니다. 참고: 예를 들어 마우스의 무게는 25 g, 다음 금액 적용 됩니다: Scopolamine와 terbutaline: 2 mg/kg * (25 g/1000 g) = 0.05 mg, 염 분: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) = 0.25 mL, Pilocarpine: 280 mg/kg * (25 g/1000 g) = 7 mg 염 분: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) = 0.25 mL.</li>
	<li>30g 바늘 1 mL 주사기에 scopolamine와 terbutaline 혼합물을 로드 합니다. 각 마우스에 intraperitoneally 솔루션을 주입 하 고 그들의 감 금 소에는 마우스를 반환 합니다. Scopolamine와 terbutaline 관리 후 30 분 pilocarpine 솔루션 (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘) 각 마우스에 주사. Pilocarpine 주입 후 즉시 관찰에 대 한 인큐베이터 (28-30 ° C)에 쥐를 놓습니다.</li>
	<li>SE 유도 될 때까지 조심 스럽게 쥐의 동작을 모니터링 합니다. 변 모터 발작 무대 라신의 규모에 따라 3 이상에 해당 하는 검색 되 면 시간을 기록 하 고 발작이 더 자주 발생 하는지를 확인 하려면 마우스를 모니터링 합니다. 지속적인 모터 발작 2 분 이상 지속, 일단 마우스 실내 온도에 새로운 장에 놓고 그들의 경련 발작 계속 SE 유발 여부를 결정 하는 3 h에 대 한 모니터링을 계속 합니다. 마우스 입력 하지 못한 안락사 pilocarpine 주입 후 약 2 시간에 SE. 참고: 라신의 규모; 1 단계, 입, 얼굴 운동; 단계 2, 머리 끄 덕; 단계 3, forelimb clonus; 단계 4, forelimb clonus;와 양육 단계 5, 양육 및 forelimb clonus16. 마우스 SE 유도 후 실 온에서 감 금 소에 전송 되지 않습니다, 마우스는 고 열으로 인해 죽을 수 있다.</li>
	<li>다이아 제 팜 솔루션 (i.p., 10 mg/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G)를 주입 하 여 SE 발병 후 3 h 행동 급성 발작을 종료 합니다. 염 분 (i.p., 10 mL/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G)를 추가 하 여 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름에 다이아 제 팜 5 mg/mL를 diluting 하 여 다이아 제 팜 솔루션을 확인 합니다. 참고: 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션: 1 mL polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션 + 9 mL 염 분. 실 온에서 솔루션을 저장 합니다. 예를 들어 마우스 몸 무게 25 g 인 경우에, 주입의 다이아 제 팜 솔루션 250 µ L: 50 µ L 5 mg/mL 다이아 제 팜 + 200 µ L 10% polyoxyl 35 수 소화한 아주까리 기름 솔루션 = 250 µ L 1 mg/mL 다이아 제 팜.</li>
	<li>가짜 쥐에 대 한 수행 scopolamine 메 틸 브 로마 이드와 terbutaline hemisulfate 혼합물의 i.p. 주사 (i.p.; 두 2 mg/kg, 10 mL/kg; 1 mL 주사기 30 G 바늘). 30 분 나중에, intraperitoneally는 식 염 수를 주사 (i.p., 10 mL/kg, 1 mL 주사기, 바늘 30 G). 참고: 경우 마우스 몸 무게는 25 g, 250 µ L pilocarpine 대신 식 염 수의 주입.</li>
	<li>다이아 제 팜 주사 (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘), 후 개별 마우스 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘) 당 5% 포도 당 1 mL를 관리 합니다. 참고: 5% 포도 당 주사의 1 mL 에너지 소스 및 생존 율을 증가 시킬 수 있는 수 분을 제공 합니다.</li>
	<li>인큐베이터 (28-30 ° C)에서 사후 관리 하는 동안 타 액, 눈물, 배설물 등 과도 한 분 비 물을 닦아.</li>
	<li>SE 유도 후 1 일에서 쥐 무게 하 고 여분의 하루 동안 인큐베이터 (28-30 ° C)에서 그들을 유지. 하루 2, SE 유도 후, 무게를 쥐 고 케이지 그들의 가정 그들이 돌아갑니다. 그들의 회복을 촉진 하기 위하여 습 한 차를 제공 합니다. 참고: 이 실험에서 SE 종단 후 C57BL/6NHsd에 대 한 사망 율 평균 (35 마우스 테스트의 개 3) 8.57% 이었다.</li>
	<li>7 일 후 pilocarpine까지 동물의 체중을 매일 측정 하 고 5% 포도 당 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘)와 쥐를 주사 때 몸 무게 증가 하지. 몸 무게 모니터링 쥐 몸 무게를 회복 하 고 pilocarpine 주사 후 2 일에서 어려움 없이 촉촉한 차 소비를 시작할 때 중지 합니다. 참고: 마우스의 몸 무게는 7 일 게시물 SE까지 증가 하지 않았다, 실험에서 마우스를 제외 하 고 이산화탄소로 안락사. 마우스의 배경에 따라 죽음 때때로 발생할 수 있습니다; 그러나, C57BL/6NHsd의 경우 쥐의 1% 미만이 실험에서 사망 했다. SE 유도 후 7 일 이상 생존, 생쥐는 거의 잠 기간 동안 죽을.</li>
</ol>2. 이식 수술 비디오-뇌 파 모니터링
<ol><li>뇌 파 모니터링을 위한 원격 주입을 수행 하기 위해 12 주 된 쥐 SE 유도 후 (4 주)을 준비 합니다. 참고: 이식의 타이밍은 실험적인 목적 및 마우스 긴장에 따라 수정할 수 있습니다.</li>
	<li>수술 전에 마 취 제 (50 mg/mL) 및 xylazine (23.3 mg/mL) 솔루션 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘) 2.5 µ L/g 몸 무게의 복용량에 식 염 수에 용 해의 혼합물 (4:0.5)로 마우스를 anesthetize. 정기적으로 (최대 15 분 간격) 호흡 속도 마우스의 호흡 노력을 모니터링 하 고 페달 철수 반사에 의해 마 취의 깊이 평가.</li>
	<li>귀 바와 물린 접시 stereotaxic 프레임에 마우스를 놓고 두 눈을 실명을 피하기 위해 수 의사 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>수술 하는 동안 멸 균 상태를 유지, 면도날을 사용 하 여 외과 사이트를 면도. 외과 분야의 모피 오염을 방지 하기 위해 주의 해야 합니다. 면도 후, 70% 에탄올과 요오드 솔루션으로 피부 소독. 참고: 수술은 무 균 방식으로 입고 멸 균 장갑, 마스크, 소독된 장비 및 무 균 기술을 사용 하 여 수행 되어야 한다.</li>
	<li>마 취의 깊이 확인 한 후 두개골을 노출에 피부 절 개를 중간 확인 합니다. Anteroposterior 축 (AP)에 Bregma에서 좌표 stereotaxic 장치에 연결 된와 함께 두 개의 버 구멍 만들기: 0.1 m m, 입장 축 (ML): 0.1 m m (참조), 그리고 AP: −0.2 m m, ML: +0.22 mm (왼쪽된 정수 리 피 질)13.<ol>
<li>PBS-젖은 면 스왑, 70% 에탄올과 요오드 솔루션 다음으로 피부를 닦아냅니다. 람다 (은 화살 및 lambdoid 봉합이 만나는 지점), Bregma (화살 봉합 하 여 코로나 봉합의 교차 시점) 및 대상 위치를 폭로 위로 머리 중간 종 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>람다 및 Bregma 같은 해부학 적 랜드마크를 식별 합니다. 드릴 비트 위치 Bregma와 메모는 X, Y 좌표이 포인트.</li>
		<li>뇌 아틀라스도 서를 사용 하 여 또는 뇌 파 기록에 대 한 뇌 영역의 적절 한 좌표 결정에 대 한 참조를 출판. 그런 다음, 나사 (참조 및 기록)에 대 한 좌표 계산 단계 2.5.2에서 측정 Bregma 좌표를 사용 하 여.</li>
		<li>천천히 낮은 두개골 얇은 되는 지점에서 너무 멀리 드릴 비트를 삽입 되지 않도록 주의 하면서 버 구멍을 드릴 비트.</li>
	</ol>
</li>
	<li>단일 채널의 몸을 피하는 목의 목 덜 미 뒤에 뇌 파 송신기 무선 및 유연한 배치 삽입 두개골 근처 리드.</li>
	<li>스테인리스 스틸 스크류 (길이 2mm) 각 버 구멍에 핀셋으로 놓고 시계 방향으로 회전 하 여 나사 드라이버를 사용 하 여 그것을 강화 합니다. 나사 경질 또는 뇌 조직에 손상을 방지 하기 위해 나사 회전의 정도 조정 하 여 멀리 너무 깊이 삽입 되지 않도록 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>단 열 코트 리드의 끝에서 2mm를 벗기십시오 고 철사와 나사 사이 좋은 연결을 위한 스크류 샤프트를 철사를 충분히 스트레칭. 전면 나사와 정수 리 피 질에 나사를 녹음 리드를 참조 리드를 연결 합니다. 그런 다음, 치과 시멘트 금속 부분을 노출 하지 않고 장소에 전체 어셈블리를 보안에 적용 됩니다.</li>
	<li>치과 시멘트는 완전히 육안 검사에 의해 건조를 확인 한 후 피부를 봉합 하 고 시사 mupirocin 연 고를 적용 합니다. 장소는 마우스는 30 ° C 배양 기에서 혼자 수술 (약 30 분)에서 복구 될 때까지. 그런 다음, 지속적인 비디오-뇌 파 모니터링 시작 될 때까지 마우스 홈 케이지에 반환 합니다. 참고: 수술 후, 각 마우스 gentamicin (항생제)의 5 밀리 그램/kg과 ketoprofen (진통제)의 5 mg/kg (i.p.; 1 mL 주사기 30 G 바늘) 주입 됩니다. Ambulant 완전히 될 때까지 동물을 모니터링 해야 합니다. 송신기-이식 마우스 1 주 약의 복구 기간을가지고.</li>
</ol>3. 비디오 및 뇌 파 모니터링 및 분석
<ol><li>개별 장에 마우스를 놓고 패러데이 케이지 전기 신호는 컴퓨터, AC 라인, 및 인접 한 수신기를 포함 하 여 모든 소스에서 중단 되지 않도록 하려면 설치 되어 무선 수신기 접시 위에 케이지를 놓습니다. 참고: 제조업체에서 제공한 설명서를 참조 하십시오. 맹점을 피하기 위해 주의 해야 합니다.</li>
	<li>무선 비디오-뇌 파 원격 측정 시스템을 사용 하 여 전기 활동을 기록 합니다.<ol>
<li>비디오-뇌 파 기록 위한 소프트웨어를 엽니다. "하드웨어"를 클릭 하 고 "구성 편집"을 선택 합니다. 수신기와 송신기 각 마우스에 이식 일치. "채널 구성" 클릭 하 고 모든 채널은 활성 확인. 클릭 "비디오 구성" 뇌 파 데이터 (30.00의 40 x 480 및 프레임 속도의 해상도)와 비디오를 동기화 할. 참고: 밤에는 쥐의 미묘한 행동 변화를 식별할 수 있는 좋은 이미지 품질을 수집 하는 것이 중요 하는 경우에 높은 감도와 IP 카메라를 설치 합니다.</li>
		<li>"설치"를 클릭 하 여 "P3 설치" 입력된 개별 동물 정보, 일치 카메라, 그리고 그래프 설정.</li>
		<li>설치 샘플링 속도를 "수집", "A/D 샘플링 속도"를 클릭 하십시오. "데이터 집합 이름"을 클릭 하 여 각 실험을 지정. 참고: 뇌 파에 대 한 샘플링 속도 높은 500 Hz. 보다 큰 비디오 및 뇌 파 데이터 크기를 해야 것이 좋습니다만 세션 당 처리 되는 데이터의 24 시간 연속 2 주 녹화를 사용 하 여 하나의 파일로 보다. RAM 메모리 부족의 경우 h 8 또는 12 h 간격 데이터를 별도로 저장할 수 있습니다.</li>
		<li>"수집 시작"을 클릭 하 여 자석 바 송신기 비디오-뇌 파 기록 수집 하. 적어도 2 주 동안 마우스 비디오-뇌 파 시스템에 의해 지속적으로 모니터링 합니다. 참고: C57BL/6 마우스 SRS 마지막 약 5.2 일 및 발작-무료 기간의 기간 그건 약 6.7 일17클러스터에서 발생 하는 경향이 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수동 검사 분석 소프트웨어를 사용 하 여 발작 빈도 기간을 결정 합니다.<ol>
<li>SRS를 보여주는 영역을 표시 하 고 통계 분석을 위해 데이터를 내보냅니다. 머리를 긁 적 또는 씹는;에 의해 생성 될 수 있는 뇌 파 유물 제외 주의 이들은 비디오 데이터를 확인 하 여 제거할 수 있습니다. 참고: SRS는 반복적인 epileptiform 급상승 하는 활동의 갑작스런 발병으로 정의 (≥ 3 Hz)는 이상 10 미 경련 동작 활동 급상승의 버스트 자주 동반 될 수에 대 한 지속. 비 경련 발작 또한 경련 동작 없이 electrographic 스파이크 활동을 설명할 수 있다. 압류 해지는 때 발사 스파이크 초기 활동에 돌려보낼 때 발생로 정의 됩니다.</li>
		<li>발작 빈도의 분석에 대 한 각 개별 동물에 대 한 일의 총 수로 2 주 동안 탐지 SRS 경우의 총 수를 나눕니다.</li>
		<li>발작 기간의 분석을 위해 활동 급상승 하는 epileptiform의 끝에 발병에서 시간을 측정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>비디오-뇌 파 기록의 완성 후 transcardial 관류 하 여 두뇌 4 %paraformaldehyde 해결. 마우스를 anesthetize, 솔루션 (4:0.5) 케 타 민 (50 mg/mL) 및 xylazine (23.3 mg/mL)의 주입에 10 μ/g 몸 무게 (i.p.; 1 mL 주사기 26 G 바늘)의 복용량에 식 염 수에 녹. 마우스 깊은 취를 확인 transcardial 관류를 수행 합니다.</li>
	<li>쥐의 뇌를 분리 하기 전에 세 안 후 다시 마우스에서 송신기를 검색 합니다.<ol>
<li>집게를 사용 하 여 리드 주위 치과 시멘트를 제거 합니다.</li>
		<li>치과 시멘트 해산 될 때까지 100% 아세톤에 치과 시멘트와 리드의 끝에 담근 다.</li>
		<li>증류수로 헹 궈 서 송신기 주위 조직 오염 물질을 제거 합니다.</li>
		<li>린스 3 h 및 어 70% 에탄올과 송신기 스토리지에 대 한 그것을 건조. 다음 사용 직전 나사와 70% 에탄올, 증류수, 다음 송신기 린스 하 고 식 염 수에 넣어. 참고: 유연한 리드 너무 짧은 경우, 마우스를 목이, 다음 주입 고 비디오-뇌 파 기록에서 노이즈를 증가 시킬 수 있습니다 때 유연한 와이어를 절단 하지 않도록 주의 해야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chang, B. S., Lowenstein, D. H. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMra022308">Epilepsy.</a> N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).</li>
<li>Scharfman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Neurol+Neurosci+Rep%22%5BJournal%5D)">The neurobiology of epilepsy.</a> Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).</li>
<li>Rakhade, S. N., Jensen, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptogenesis+in+the+immature+brain%3A+emerging+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epileptogenesis in the immature brain: emerging mechanisms.</a> Nat Rev Neurol. 5 (7), 380-391 (2009).</li>
<li>Cavalheiro, E. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF02229072">The pilocarpine model of epilepsy.</a> Ital J Neurol Sci. 16 (1-2), 33-37 (1995).</li>
<li>Curia, G., Longo, D., Biagini, G., Jones, R. S., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pilocarpine+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">The pilocarpine model of temporal lobe epilepsy.</a> J Neurosci Methods. 172 (2), 143-157 (2008).</li>
<li>Morimoto, K., Fahnestock, M., Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kindling+and+status+epilepticus+models+of+epilepsy%3A+rewiring+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Kindling and status epilepticus models of epilepsy: rewiring the brain.</a> Prog Neurobiol. 73 (1), 1-60 (2004).</li>
<li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 37 (10), 2887-2899 (2013).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesial+temporal+lobe+epilepsy%3A+pathogenesis%2C+induced+rodent+models+and+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mesial temporal lobe epilepsy: pathogenesis, induced rodent models and lesions.</a> Toxicol Pathol. 35 (7), 984-999 (2007).</li>
<li>Hellier, J. L., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoconvulsant+model+of+chronic+spontaneous+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Chemoconvulsant model of chronic spontaneous seizures.</a> Curr Protoc Neurosci. 9, Chapter 9 Unit 9 19(2005).</li>
<li>Pitkanen, A., Lukasiuk, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+basis+of+epileptogenesis+in+symptomatic+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Behav%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular basis of epileptogenesis in symptomatic epilepsy.</a> Epilepsy Behav. 14, Suppl 1 16-25 (2009).</li>
<li>Mathern, G. W., Adelson, P. D., Cahan, L. D., Leite, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+neuron+damage+in+human+epilepsy%3A+Meyer%27s+hypothesis+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Hippocampal neuron damage in human epilepsy: Meyer's hypothesis revisited.</a> Prog Brain Res. 135, 237-251 (2002).</li>
<li>Turski, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbic+seizures+produced+by+pilocarpine+in+rats%3A+behavioural%2C+electroencephalographic+and+neuropathological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Limbic seizures produced by pilocarpine in rats: behavioural, electroencephalographic and neuropathological study.</a> Behav Brain Res. 9 (3), 315-335 (1983).</li>
<li>Brulet, R., Zhu, J., Aktar, M., Hsieh, J., Cho, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+with+conditional+NeuroD1+knockout+display+reduced+aberrant+hippocampal+neurogenesis+but+no+change+in+epileptic+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Mice with conditional NeuroD1 knockout display reduced aberrant hippocampal neurogenesis but no change in epileptic seizures.</a> Exp Neurol. 293, 190-198 (2017).</li>
<li>Cho, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+hippocampal+neurogenesis+contributes+to+epilepsy+and+associated+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Aberrant hippocampal neurogenesis contributes to epilepsy and associated cognitive decline.</a> Nat Commun. 6, 6606(2015).</li>
<li>Cavalheiro, E. A., Santos, N. F., Priel, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pilocarpine+model+of+epilepsy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">The pilocarpine model of epilepsy in mice.</a> Epilepsia. 37 (10), 1015-1019 (1996).</li>
<li>Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+seizure+activity+by+electrical+stimulation.+II.+Motor+seizure%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Modification of seizure activity by electrical stimulation. II. Motor seizure.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 32 (3), 281-294 (1972).</li>
<li>Hester, M. S., Danzer, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+abnormal+adult-generated+hippocampal+granule+cells+predicts+seizure+frequency+and+severity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Accumulation of abnormal adult-generated hippocampal granule cells predicts seizure frequency and severity.</a> J Neurosci. 33 (21), 8926-8936 (2013).</li>
<li>Shibley, H., Smith, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pilocarpine-induced+status+epilepticus+results+in+mossy+fiber+sprouting+and+spontaneous+seizures+in+C57BL%2F6+and+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Research%22%5BJournal%5D)">Pilocarpine-induced status epilepticus results in mossy fiber sprouting and spontaneous seizures in C57BL/6 and CD-1 mice.</a> Epilepsy Research. 49 (2), 109-120 (2002).</li>
<li>Borges, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+and+glial+pathological+changes+during+epileptogenesis+in+the+mouse+pilocarpine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuronal and glial pathological changes during epileptogenesis in the mouse pilocarpine model.</a> Exp Neurol. 182 (1), 21-34 (2003).</li>
<li>Pavlova, M. K., Shea, S. A., Bromfield, E. B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14751206">Day/night patterns of focal seizures.</a> Epilepsy Behav. 5 (1), 44-49 (2004).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 작품에서는 SE 유도 및 만성 발작의 평가 대 한 실험 절차를 설명합니다.
여러 가지 요인 성공적인 SE 유도 영향을 수 있습니다. 라신 규모에 따라 정확한 행동 모니터링 하는 것이 SRS의 개발에 대 한 중요 합니다. 머리를 끄 덕, forelimb clonus, 양육, 그리고 떨어지는 하는 행동의 SE 단계4,16으로 급성 발작. 일단 첫 번째 모터 발작 감지 후 경련 발작 사이의 간격의 길이 들어가기 전에 감소 세. 또한, SE 행동 발작 다이아 제 팜5종료 하지 않는 한 적어도 6 h에 대 한 메시지를 지속 한다. 지적 연구원은 행동 발작 다이아 제 팜 주사로 가시고 것 비록 발작 활동 electrocorticograms를 통해 검출 될 수 있다 지속 가능성의 알고 있어야 가치가 있다. SE 유도 SE와 동물의 수를 크게 ...

TLE 가장 일반적인 획득된 epilepsies1중 하나입니다. 간 질을 가진 사람들 뇌2,3에 비정상적인 신경 활동의 결과로 재발 성 발작을 경험합니다. TLE 자주 세공는, 간 질의 개발 기본 기본 메커니즘을 이해 하기 결정적 이다.
인간의 TLE의 주요 특징을 정리 할 수 있는 동물 모델의 TLE 이상, 우리가 쉽게 모니터링 하 고 epileptogenesis에 중요 한 요소를 조작 수 있도록 더 나은 감사를 제공할 수 있습니다. 그 중, chemoconvulsants 유도 SE 널리4,5되었습니다. 다른 간 질 모델을 보여주는 hippocampal sclerosis 없고 강력한 SRS6,7,의8, 전기 자극과 달리 chemoconvulsants의 조직의 주입 인간의 TLE의 임상 병을 모방 수 있습니다. 즉, 초기 뇌 손상, 잠재성 기간, 그리고 만성 간 질 무대 만들어 낸 SRS5,,910. 따라서,이 기술은 급성 뇌 손상, epileptogenesis, 또는 발작 억제의 메커니즘을 설명 하는 다양 한 연구에 활용할 수 있습니다. 또한, histopathological 변경 chemoconvulsants에 의해 유도 된 인간의 TLE, TLE 설치류 모델10,,1112의 사용에 대 한 추가 논리를 제공 본 그와 유사 하다. 특히, 해 마와 관련 된 구조적 손상 모두 kainic 산 및 pilocarpine-유도 SE 모델에 일관 되 게 재현 되어 있다. 그러나, kainic 산 주입에 비해 pilocarpine 모델 생산할 수 있는 쥐 유전자 변형 마우스 라인5, 의 넓은 가용성을 고려할 때 만성 간 질을 공부에 대 한 상당한 이점을 제공할 수 있는 보다 강력한 SRS 13 , 14 , 15. 게다가, 발작 진행 후 pilocarpine 주입은 일반적으로 보다 빠른 kainic 산 모델에서 간 질의 pilocarpine 모델의 효과적인 사용에 대 한 추가 증거를 제공 하.
여기, pilocarpine의 i.p. 주입 및 비디오 및 만성 간 질에서 뇌 파 모니터링을 수행 하 여 SE 유도 하는 방법을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6</td><td>Envigo</td><td>C57BL/6NHsd</td><td></td></tr><tr><td>스코폴라민 메틸 질산</td><td>염 시그마</td><td>S2250</td><td>제조사 10X</td></tr><tr><td>재고 테르부탈린 헤미설페이트 소금</td><td>시그마</td><td>T2528</td><td>제조사 10X 주식</td></tr><tr><td>필로카르핀 염</td>산염 <td>시그마</td><td>P6503</td><td></td></tr><tr><td>케타민 염산염</td><td>유한공사</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자일라진 염산염</td>, <td>바이엘, 한국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 디아제팜</td>, <td>삼진,</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피마자유(콜리포, EL)</td><td>시그마</td>, <td>C5135</td>, <td>폴리옥실, 35, 수소첨가피마자유</td></tr><tr><td>, 식염수</td>, <td>대한제약(주</td>)<td></td><td></td></tr><tr><td>5% 포도당</td><td>Daihan pharm. Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>요오드 용액 (포비딘)</td><td>Firson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수의사 연고 (테라마이신)</td><td>화이자</td><td></td><td></td></tr><tr><td>블루 나일론</td><td>AILEE</td><td>NB617</td><td></td></tr><tr><td>무피로신 (베아로반)</td><td>대웅제약(주)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>케토프로펜</td><td>삼춘당 제약 Co., Ltd</td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Huons, Ltd. </td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 게이지 바늘</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>26 G * 13 mm (1/2")</td></tr> <tr><td>30 게이지 바늘</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>30 G * 13 mm (1/2")</td></tr> <tr><td>면도날</td><td>Dorco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>드릴</td><td>Saeshin 정밀 주식회사</td><td></td><td>207A, 35K (속도)</td></tr><tr><td>텔레메트리 비디오/EEG 시스템</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>버전 5.20-SP6</td><td></td></tr><tr><td>이식형 송신기</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>ETA-F10</td><td></td></tr><tr><td>나사</td><td>성호 스틸</td><td></td><td>M1.4, 2mm 길이 스테인리스 스틸</td></tr><tr><td>버텍스 치과 재료&nbsp;</td><td>Dentimex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>Duksan 순수한 화학물질 Co., 주식 회사.</td><td></td><td>CAS 67-64-1</td></tr><tr><td>파라포름알데히드 (PFA)</td><td>밀리포어</td><td>1.04005.1000</td><td>4 %&nbsp;</td></tr><tr><td>설탕</td><td>시그마</td><td>S9378</td><td>0.01 M PBS</td></tr><tr><td>크레실 바이올렛 아세테이</td>트의 30 % 용액 <td>시그마</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>EMD Millipore Co.</td><td>UN1170</td><td></td></tr><tr><td>크실렌</td><td>덕산 퓨어케미칼 주식회사</td><td>UN1307</td><td></td></tr><tr><td>아세트산 빙하</td><td>준세이 화학</td><td>31010-0350</td><td></td></tr><tr><td>FSC33 클리어&nbsp;</td><td>조직 동결을 위한</td> <td>Leica biosystems</td><td></td> OCT 화합물</tr><tr><td>조직학을 위한 DPX 마운팅</td><td>Sigma</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>집게</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>Solco biomedical</td><td>02-2445</td><td></td></tr><tr><td>입체 프레임</td><td>David Kopf Instruments</td><td>E51070012</td><td></td></tr></tbody></table>

측 두 엽 간 질 및 뇌 파 마우스에 radiotelemetry 시스템을 사용 하 여 모니터링 pilocarpine 모델

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

측 두 엽 간 질 (TLE) 성인에서 일반적인 신경학 적인 장애입니다. 만성 간 질의 변환 연구, pilocarpine 유도 상태 epilepticus (SE) 자발적인 재발 성 발작 (SRS) 정리를 자주 선택 됩니다. 여기 우리 pilocarpine의 복 (i.p.) 주입 및 무선 원격 비디오 및 뇌 파 (EEG) 시스템을 사용 하 여 라이브 동물에서 만성 반복 발작의 모니터링에 의해 SE 유도의 프로토콜을 제시. 우리 pilocarpine 주입 후에 7 일 그리고 6 주 후 pilocarpine hippocampal 신경 손실 그들의 상관 관계 주의 필요로 하는 주목할 만한 행동 변화를 설명 했다. 우리는 또한 비디오 및 뇌 파 기록을 위한 전극 이식의 실험 절차 및 주파수의 분석 및 만성 재발 성 발작의 기간을 설명합니다. 마지막으로, 우리는 가능한 이유 왜 예상된 결과 각 경우에 달성 하지 논의. 이 마우스 및 문제 해결에 대 한 지침에 만성 간 질 모델링의 기본적인 개요를 제공 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질 및 epileptogenesis의 적합 한 모델에 대 한 초기 계획으로 사용할 수 있습니다 생각 합니다.

성공적인 SE hippocampal 세포 죽음과 SRS (그림 1 및 그림 2)을 유도할 수 있다. 우리는 SE 발병 후 3 h에 다이아 제 팜 주사에 의해 행동 급성 발작을 종료 하 고 7 일 또는 6 주 후 쥐를 희생.
비디오-뇌 파 모니터링, 받은 쥐 SE, 후 4 주에 수술 임 플 란 트 및 SRS의 경우 SE 발병 후 5-7 주에서 2 주 동안 평가 했다.
그림 1 cresyl 보라색 얼룩에 의해 평가 하는 해 마에서 세포 죽음을 보여준다. SE 후 7 일, pyknotic 세포에서에서 발...

이 원고 조직의 pilocarpine 주입 상태 epilepticus를 유도 및 무선 원격 비디오 및 뇌 파 시스템을 사용 하 여 라이브 동물에 자발적인 재발 성 발작을 모니터링 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 만성 간 질, epileptogenesis, 그리고 급성 발작의 pathophysiologic 메커니즘을 공부에 대 한 이용하실 수 있습니다.

측 두 엽 간 질 및 뇌 파 마우스에 Radiotelemetry 시스템을 사용 하 여 모니터링 Pilocarpine 모델

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

이 절차의 전반적인 목표는 필로카르핀을 사용하여 간질 상태를 유도하고 마우스에서 방사선 원격 측정 시스템을 사용하여 자연 재발성 발작을 모니터링하는 것입니다. 이 프로토콜은 급성 발작, 간질 형성 및 만성 간질의 병태 생리학 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 급성 발작 후 높은 생존율과 함께 자발적 재발성 발작을 보여주는 만성 간질의 마우스 모델을 제공하는 것입니다.시연은 저희 연구실의 박사후 연구원인 김지은 박사님께서 시연하실 예정입니다. 8주 된 수컷 쥐 각각의 무게를 잰 것으로 시작합니다. 스코폴라민과 테르부탈린 1kg당 2mg, 필로카르핀 용액 1kg당 280mg을 만듭니다.그런 다음 용액을 각 마우스에 복강내 주입하고 마우스를 케이지로 되돌립니다.스코폴라민과 테르부탈린 투여 30분 후 각 마우스에 필로카르핀 용액을 주입합니다. 필로카르핀 주사 직후, 관찰을 위해 마우스를 섭씨 28-30도의 인큐베이터에 넣습니다.다음으로, 간질 상태(status epilepticus, SE)가 유발될 때까지 마우스의 행동을 모니터링합니다. 라신의 척도에 따라 3단계 이상에 해당하는 변연계 운동 발작이 감지되면 시간을 기록하고 마우스를 모니터링합니다. 지속적인 운동 발작이 2분 이상 지속되면 마우스를 실온의 새 케이지에 넣고 3시간 동안 계속 모니터링하여 경련 발작이 계속되고 SE가 유발되는지 확인합니다.그런 다음 SE 발병 후 3시간 후에 디아제팜 용액 1kg당 10mg을 주사하여 행동성 급성 발작을 종결시킵니다. 디아제팜 주사 후, 회복을 돕기 위해 개별 마우스 1마리당 5%포도당 1ml를 투여합니다. SE 유도 후 1일차에 마우스의 무게를 측정하고 하루 더 인큐베이터에 보관합니다.SE 유도 후 2일차에 생쥐의 무게를 측정하고 집 케이지로 되돌립니다. 회복을 돕기 위해 촉촉한 음식을 제공하십시오. 마지막으로, 필로카르핀 투여 후 7일까지 동물의 일일 체중을 측정합니다.그리고 체중이 증가하지 않으면 마우스에 5%포도당을 주입합니다. SE 유도 후 4주 후에 12주 된 생쥐를 준비하여 EEG 모니터링을 위한 원격 측정 이식을 수행합니다. 이어바와 바이트 플레이트가 있는 입체 프레임에 마우스를 놓고 실명을 방지하기 위해 양쪽 눈에 수의사 연고를 바르십시오.그런 다음 수술 중 무균 상태를 유지하기 위해 면도날을 사용하여 수술 부위를 면도하고 수술 부위의 털이 오염되지 않도록 주의하십시오. 면

the-pilocarpine-model-temporal-lobe-epilepsy-eeg-monitoring-using

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 측두엽 간질을 모델링하기 위해 필로카르핀의 전신 투여를 통해 마우스에서 간질(SE) 상태를 유도하는 절차를 제시합니다.

전신 필로카르핀 치료: 측두엽 간질의 마우스 모델

이 비디오는 무선 송신기 시스템을 사용하여 설치류 새끼의 장기 연속 뇌파검사(EEG) 모니터링을 보여줍니다. 송신기에는 두 개의 기록 전극과 뇌 표면까지 확장되는 하나의 기준 전극이 포함되어 있습니다. 강아지를 기록실에 넣으면 강아지가 성인으로 발달하는 동안 EEG를 지속적으로 모니터링할 수 있습니다.

설치류 새끼의 장기 연속 뇌파 모니터링

여기에서는 인간 질병의 신생아 설치류 모델에서 뇌파(EEG)를 위한 무선 지원 기술의 사용을 보여줍니다. 원격 측정을 사용하면 번거로운 연결이 없으므로 자연스러운 동작이 가능합니다.

신기원 무선 송신기 시스템을 사용하여 인간의 질병의 작은 설치류 모델에서 장기 연속 뇌파 모니터링

비 구속 된 EEG radiotelemetry 자유롭게 이동 설치류에서 생체 장기 뇌파를 기록하기위한 유용한 방법 론적 접근이다. 상세한 프로토콜은 CNS의 리듬 성 CNS와 관련된 행동 단계 안정적인 기록을 얻기 위해 다양한 뇌 영역에 정위 경막 깊은 뇌내 전극 배치를 설명한다.

비 금지 EEG Radiotelemetry : 경막 외 및 깊은 뇌내 정위 EEG 전극 위치

이 논문은 침술, 간질 모델 및 설치류의 수면 분석의 성능을 보여줍니다. 침술 절차와 경혈의 식별에 대해 설명합니다. 필로카르핀 또는 펜틸레네테트라졸(PTZ)은 간질을 유발하는 데 사용됩니다. 피질전도(ECoG), 근전도(EMG), 뇌 온도 및 운동 활동 기록이 수면 분석에 사용됩니다.

침술에 의해 쥐와 마우스에서 간질 Electrocorticograms (ECoGs)의 조작 및 절전

여기, 선물이 두뇌를 기록 하 고 동시 비디오를 사용 하 여 마우스에 바이오 신호를 심장에 프로토콜 electroencephalography (뇌 파), 그리고 심전도 (ECG). 우리는 또한 발작, 뇌 파 스펙트럼 전력, 심장 기능, 그리고 심장 박동의 변화에 대 한 결과 뇌 파 ECG 기록 분석 하는 방법을 설명 합니다.

동시 비디오-뇌 파-ECG 모니터링 Neurocardiac 부전 간 질 마우스 모델에서을 식별 하

여기서 우리는 성인, 수컷 위스타 래트에서 측면 유체 타악기 손상(FPI) 모델을 사용하여 심한 TBI를 유도하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 또한 연속적인 비디오 EEG 기록을 수집하고 외상 후 간질 발생과 일치하는 간질 방전을 모니터링하기 위해 무선 원격 측정 시스템의 사용을 입증합니다.

무선 비디오-EEG 시스템 사용으로 측면 유체-타악기 유도 외상성 뇌 손상 다음 간질 방전 모니터링

이 문서는 필로카핀 유도 간질 마우스에 있는 기억 손상을 평가하기 위한 실험적인 절차를 제출합니다. 이 프로토콜은 간질에 있는 일반적인 comorbidities의 한개인 간질 관련한 인식 쇠퇴의 병리생리학 기계장치를 공부하기 위하여 이용될 수 있습니다.

필로카핀 유도 간질 마우스에 있는 기억 기능의 평가

이 보고서는 형질전환 VGAT-Cre 마우스의 전기적 점화를 기반으로 측두엽 간질 모델을 생성하는 방법을 설명합니다. 점화된 VGAT-Cre 마우스는 간질의 원인을 파악하고 새로운 치료법을 스크리닝하는 데 유용할 수 있습니다.

측두엽 간질에 대한 모델을 생성하기 위해 전기적으로 점화되는 VGAT-Cre 마우스를 위한 전극의 준비 및 이식

편도체는 측두엽 간질에서 중요한 역할을 하며, 이 간질은 이 구조에서 유래하고 전파됩니다. 이 기사는 기록 및 자극 기능을 모두 갖춘 심부 뇌 전극의 제조에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 편도체에서 유래하는 내측 측두엽 간질 모델을 소개합니다.

양극성 전극을 사용하여 편도체의 전기적 점화에 의한 측두엽 간질 마우스 모델 생성

이 프로토콜은 자유롭게 움직이는 설치류 EEG를 기록하기 위한 안정적이고 쉽게 접근할 수 있는 시스템을 만들기 위해 개발되었습니다.

자유롭게 움직이는 마우스의 만성 다중 사이트 뇌파 기록을 위한 비용 효율적이고 최소 침습적 프로토콜

배우세요 필로카핀을 이용해 마우스에서 간질 지속 상태를 유도하고 무선 원격측정 시스템으로 자발적 재발 발작을 모니터링하는 방법을. 이 기술은 만성 간질의 병태생리 메커니즘 연구에 활용됩니다.

측 두 엽 간 질 및 뇌 파 마우스에 Radiotelemetry 시스템을 사용 하 여 모니터링 Pilocarpine 모델

더 많은 동영상 탐색