Name: 초파리 애벌레의 열 환경 설정을 결정 하는 온도 분석 결과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster 애벌레의 온도 선호도를 연속적 열 환경 설정을 통해 분석하는 방법을. 이 기법은 신경과학 및 행동학 연구에서 감각 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

입방 미터 여 NIDCD (DC007864, DC016278) (EY008117, EY010852) NEI에서 자금 지원 및 NIAID (1DP1AI124453).

<ol><li>Fowler, M. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRP+channels+and+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRP channels and animal behavior.</a> Life Sci. 92, 394-403 (2013).</li>
<li>Palkar, R., Lippoldt, E. K., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of thermosensation in mammals.</a> Curr Opin Neurobiol. 34, 14-19 (2015).</li>
<li>Vriens, J., Nilius, B., Voets, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Peripheral thermosensation in mammals.</a> Nat Rev Neurosci. 15 (9), 573-589 (2014).</li>
<li>Rosenzweig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+ortholog+of+vertebrate+TRPA1+regulates+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis.</a> Genes Dev. 19, 419-424 (2005).</li>
<li>Kwon, Y., Shim, H. S., Wang, X., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+thermotactic+behavior+via+coupling+of+a+TRP+channel+to+a+phospholipase+C+signaling+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Control of thermotactic behavior via coupling of a TRP channel to a phospholipase C signaling cascade.</a> Nat Neurosci. 11, 871-873 (2008).</li>
<li>Kwon, Y., Shen, W. L., Shim, H. S., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+thermotactic+discrimination+between+the+optimal+and+slightly+cooler+temperatures+via+a+TRPV+channel+in+chordotonal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fine thermotactic discrimination between the optimal and slightly cooler temperatures via a TRPV channel in chordotonal neurons.</a> J Neurosci. 30 (31), 10465-10471 (2010).</li>
<li>Shen, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+rhodopsin+in+temperature+discrimination+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Function of rhodopsin in temperature discrimination in Drosophila.</a> Science. 331 (6022), 1333-1336 (2011).</li>
<li>Sokabe, T., Chen, H. S., Luo, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+switch+in+thermal+preference+in+Drosophila+larvae+depends+on+multiple+rhodopsins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A switch in thermal preference in Drosophila larvae depends on multiple rhodopsins.</a> Cell Rep. 17, 336-344 (2016).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ionotropic+Receptors+IR21a+and+IR25a+mediate+cool+sensing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">The Ionotropic Receptors IR21a and IR25a mediate cool sensing in Drosophila.</a> Elife. 5, 13254(2016).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigational+decision+making+in+Drosophila+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Navigational decision making in Drosophila thermotaxis.</a> J Neurosci. 30 (12), 4261-4272 (2010).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+a+laboratory+handbook%22">Drosophila: a laboratory handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2005).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜의 성공을 위해 실험을 수행 하는 애벌레의 적절 한 숫자를 얻기 위해 조치를 취할 중요 하다. 전 달걀 누워 개선 하기 위해 2-3 d에 대 한 효 모 붙여넣기 포함 된 튜브에 파리를 먹이 포함 됩니다. 튜브 물 튜브를 포함 하는 쟁반에 배치 하는 식품의 수 분을 유지 하 고 촉진 효과 먹이 애벌레에 의해 정상적인 빛 어두운 주기에 노출을 허용 하는 동안 투명 한 플라스틱 가방에 포함 해야 합니다. 그러나, 누 룩 붙여 부드러운 파리 갇혀 될 수 없습니다. 유리병 당 여성의 수는 유전자 형에 따라 달라 집니다. W1118, 경우 일반적으로 12 ~ 여성 및 ~ 6 남성 3 h에 대 한 알 수 있도록 충분 한입니다. 두 개의 튜브는 일반적으로 단일 지향성 분석 결과 대 한 접시에 충분 한 애벌레 (유 충 100-200)를 제공 합니다. 비행 주식 야생-타입 보다 적은 알을 낳는 또는 부 화 애벌레의 비율 감소, 추가 (30-35/유리병)까지 추가 여성 및 남성.
<p class...

Thermotaxis는 모바일 동물 선택 가장 유리한 조건1,2,3환경 하에 고용 됩니다. 지나치게 뜨겁거나 차가운 기후 인 경우이 문제는 생존을 위해 생명 이다. 또한, 많은 동물 편안한 범위에서 온도에 아주 작은 차이에 민감한 고 이상적인 온도 환경. 이 같은 환경과 그들의 체온을 equilibrate 과일 파리 poikilothermic 유기 체에 대 한 특정 중요성 이다. 애벌레 thermotaxis 모니터링 분석 수단이 식별, Drosophila 일시적인 수용 체 잠재력 (TRP) 채널4,,56, 같은 분자 센서의 역할을 명확히 rhodopsins7,8와 ionotropic 수용 체 수용 체 (국세청)9, 다른 온도 범위와 온도 감도이 동물을 부여.
양방향 선택 테스트 애벌레6,7열 기본을 공부 하는 한 가지 방법은 제공 합니다. 분석 결과 수반 두 가지 온도 영역을 설정 하 고 다른 한쪽을 선택 하는 동물을 수 있습니다. 양방향 선택 테스트에서 결과 강력 하 고, 두 가지 옵션 사이의 온도 차이가 큰 경우 특히 수 있습니다. 또한, 각 분석 결과 두 그룹을 tabulating 포함, 데이터는 간단한 기본 색인으로 표현할 수 있습니다. 편리 하 고 양방향 선택 분석 실험의 단순 유전 스크린 의무가 있습니다. 그러나, 주요 한계는 많은 실험은 야생-타입 또는 돌연변이 동물의 원하는 온도 설정 하는 데 필요한입니다.
그라데이션 분석 결과 단일 분석 결과8원하는 온도 설정할 기회를 제공 합니다. 연속 범위의 온도 직면할 때 또한, 양방향 선택 테스트와는 달리 그것은 동물의 그룹의 분포의 평가 허용. 한 그라데이션 분석 결과 페 트리 접시를 사용 하 여 단일 동물 이며 개별 동물10의 상세한 동작을 특성화 하는 데 적합 합니다. 그러나, 접시 라운드 이기 때문에, 온도 영역의 크기 변화 하 고 중심 으로부터 거리에 따라 점차적으로 작은. 따라서,이 설정 온도 선택의 동물의 인구를 모니터링에 이상적입니다.
애벌레의 그룹의 온도 선호를 평가 하기 위해 적합 한 연속 열 그라데이션 기구 직사각형 경기장을 고용 하 고 여기 설명. 기구는 생성 하 고 조립 하기 쉽습니다. 또한, 그라데이션, 선형 이며 유연 하 고, 42 ° c에 10 ° C에서 큰 온도 범위 동안 thermotaxis를 평가 하는 데 사용할 수 있습니다. 분석 결과 신속 하 고 간단 하 게 수행 하 고 재현 가능한 데이터를 생성 합니다. 애벌레의 선호 온도 보고, 뿐만 아니라 그것은 하나의 실험에서 전체 선형 범위 동물의 인구의 환경 설정을 보여준다. 이러한 장점으로 인해 thermotaxis에 필요한 유전자를 식별 하는 데 탁월한 선택 이다.

<table><tbody><tr><td>Gradient assay apparatus</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PolyScience 9106, 냉장/가열식 6L 순환 수조</td><td>Thomas Scientific</td><td>9106</td><td>이 모델은 단종되었습니다. 업데이트된 교체 모델에는 120V, 60Hz용 1186R00 및 1197U04 또는 240V, 50Hz용 1184L08 및 1197U04가 포함됩니다.</td></tr><tr><td>알루미늄 분석 플레이트(단방향 구배용)</td><td></td><td></td><td>외부 크기: 14 x 10.1 x 0.9cm, 내부 크기: 12.9 x 8.7 x 0.8cm, 검은색 아노다이징 처리.</td></tr><tr><td>알루미늄 플레이트(양방향 그라디언트용)</td><td></td><td></td><td>25 x 22 x 0.2cm, 검은색 아노다이징 처리.</td></tr><tr><td>알루미늄 블록</td><td></td><td></td><td>외부 크기: 25.5 x 5 x 1.4cm, 내부 채널의 매개변수는 그림 1D에 나와 있습니다.</td></tr><tr><td>알루미늄 블록 및 튜빙용 커넥터</td><td>McMaster-Carr</td><td>91355K82</td><td></td></tr><tr><td>Tygon 위생 실리콘 튜빙</td><td>Tygon</td><td>57296</td><td>1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" 벽</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company<</td><td>strong>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Items 및 분석용 시약</강력></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유봉</td><td>USA Scientific</td><td>17361</td><td>1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브용 유봉</td></tr><tr><td>온도계</td><td>Fluke</td><td>51II</td><td></td></tr><tr><td>열전대</td><td></td><td>Fluke K형</td><td></td></tr><tr><td>범용 마이크로플레이트 뚜껑</td><td>Corning</td><td>6980A77</td><td></td></tr><tr><td>35mm 접시</td><td>Corning</td><td>9380D40</td><td></td></tr><tr><td>라벨링 테이프 (양방향 구배용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-951</td><td>Fisherbrand 라벨링 테이프 2 in x 14 yds</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>1% 용액 준비</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>분석 시작 직전 18% 용액 준비</td></tr><tr><td>페인트 브러시</td><td>Fisher Scientific</td><td>11860</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원심분리 튜브</td><td>Denville</td><td>C1062-P</td><td></td></tr><tr><td>Scoopula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td></td></tr><tr><td>500mL 원형 입이 넓은 병</td><td>Pyrex</td><td>1395-500</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기(300mm 기공)</td><td>PluriSelect</td><td>43-50300</td><td>유충 세척용 옵션 항목</td></tr><tr><td>판지 상자(바이알 트레이)</td><td>Genesee Scientific</td><td>FS32-124</td><td></td></tr><tr><td>이름</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</strong</td></tr><tr><td>>Drosophila 식품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>증류수</td><td></td><td></td><td>22,400 mL</td></tr><tr><td>옥수수 가루, 노란색 (극세 메쉬, 플록) 20 kg</td><td>LabScientific Inc.</td><td>NC0535320</td><td>1,609 g</td></tr><tr><td>맥주 효모 100 lbs</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td>379 g</td></tr><tr><td>NutriSoy&reg; 콩가루(10kg/단위)</td><td>Genesee Scientific</td><td>62-115</td><td>221g</td></tr><tr><td>초파리 한천, II형(5kg)</td><td>Genesee Scientific</td><td>66-103</td><td>190g</td></tr><tr><td>Karo light 옥수수 시럽</td><td>Karo</td><td></td><td>1,700mL</td></tr><tr><td>메틸 4-하이드록시벤조에이트(200프루프 에탄올에 현탁)Sigma</td> <td>Aldrich</td><td>H5501-5KG</td><td>72g/240mL</td></tr><tr><td>프로피온산 퓨리스. pa,>99.5%(GC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81910-1 L</td><td>108 mL</td></tr><tr><td>인산&nbsp; ACS 시약, &ge; 85 wt. H2O 시</td><td>그마 Aldrich</td><td>438081-500 mL</td><td>8.5 mL</td> 중 %</tr></tbody></table>

초파리 애벌레의 열 환경 설정을 결정 하는 온도 분석 결과

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

많은 동물, 과일 파리, 초파리 melanogaster를 포함 하 여 차별 분 차이 환경 온도를 선호 그들의 열 조를 찾아 그들을 가능 하 게 할 수 있다. 애벌레의 온도 환경 정의 된 선형 범위를 정의 하려면 우리는 온도 기울기를 사용 하 여 분석 결과 개발 했다. 단일 지향성 그라디언트를 설정 하려면 두 개의 알루미늄 블록 독립 물 탕, 각각의 개별 블록의 온도 제어에 연결 됩니다. 해당 하위 및 상위 제한을 설정 하는 두 개의 블록. 온도 기울기는 접시에 걸쳐 그들 사이의 거리는 두 물 제어 블록 위에 agarose 코팅 알루미늄 플레이트를 삽입 하 여 설정 됩니다. 끝 물 블록 위에 설정 된 알루미늄 플레이트의 최소 및 최대 온도 정의 하 고 지역 사이 선형 온도 기울기를 형성 하는 두 개의 블록. 그라데이션 분석 결과 다른 연령대의 애벌레에 적용할 수 있는 고 고기, 인코딩 TRP 채널 및 opsins, 온도 차별에 필요한 유전자에 영향을 미치는 돌연변이 등을 전시 하는 돌연변이 식별 하기 위해 사용할 수 있습니다.

18 °-28 ° C 단일 방향 설정 그라데이션, 우리 두 물 탕의 온도를 설정 16.8 ° C와 31 ° C 우리는 agarose 젤 표면 (그림 2C, 2E)의 극단적인 끝에 모든 6 영역, 영역 사이의 테두리 라인의 상단과 하단에서 26 위치에서 온도 측정 하 여 13 지점에서 온도 얻을. 그라데이션에 따라 온도 분포는 거의 선형 (Y = 0.9672 * X + 16.19, R2 = 0.9961) (그림 2E).
우리는 다양 한 연령대에서 제어 (w1118) 애벌레의 온도 선호를 분석. 1세인트 (24 ± 1.5 h AEL), 2nd</su...

여기, 우리는 연속 열 그라디언트를 사용 하 여 초파리 애벌레의 기본 환경 온도 결정 하는 프로토콜 제시.

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

이 방법은 초파리 멜라노가스터(drosophila melanogaster)와 같은 동물이 선호하는 환경 온도를 선택하는 메커니즘인 체성감각(somatosensation) 분야의 핵심 질문을 해결하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연속적인 온도 범위에 직면했을 때 단일 분석에서 유충 그룹의 선호하는 온도를 설정할 수 있다는 것입니다. 초파리 유충의 온도 선호도에 대한 통찰력을 제공하는 것 외에도 impress plate는 벌레, 예쁜꼬마선충과 같은 다른 모델 유기체와 함께 사용하도록 조정할 수도 있습니다.먼저 이스트 페이스트를 만들어 십자가용 바이알을 준비합니다. 증류수에 효모 알갱이를 섞어 유봉으로 반죽으로 갈아서 만듭니다. 그런 다음 음식 표면 바로 위에 있는 표준 초파리 바이알의 내벽 가까이에 효모 페이스트를 약간 추가합니다.유충을 생산하려면 12-35 마리의 암컷과 최대 절반의 수컷을 수집하지만 10 마리를 넘지 마십시오. 효모 페이스트가 함유된 바이알에 이러한 그룹을 결합합니다. 준비된 바이알을 100바이알 트레이에 넣습니다.습도를 제공하기 위해 트레이에 물이 담긴 열린 바이알 20개를 포함합니다. 그런 다음 트레이를 투명한 비닐 봉지에 밀봉하고 섭씨 25도에서 48시간 동안 배양합니다. 48시간 동안 먹이를 주고 짝짓기를 한 후 파리를 새 먹이 유리병으로 옮겨 알을 모으십시오.탭하세요. 이산화탄소를 사용하지 마십시오. 그런 다음 파리가 섭씨 25도에서 3시간 동안 알을 낳도록 합니다.나중에 성충을 제거하고 계란이 들어 있는 바이알을 물병과 함께 트레이에 다시 넣고 백을 닫습니다. 그런 다음 섭씨 25도에서 알을 원하는 유충 단계로 발달시킵니다. 단방향 그래디언트를 준비하려면 먼저 분석을 위한 인간 주변 환경을 만듭니다.별도의 수조에 연결된 두 개의 알루미늄 블록을 젖은 종이 타월 위에 10cm 간격으로 놓습니다. 수조는 미리 예열해야 합니다. 다음으로, 100ml의 1%아가로스를 만들고 평평한 표면의 각 분석 플레이트에 25ml를 추가합니다.아가로스가 굳으면 멜라민 스펀지로 표면을 부드럽게 문질러 표면을 약간 거칠게 만듭니다. 그런 다음 효율적인 온도 전달을 촉진하기 위해 분석 플레이트의 알루미늄 블록 사이의 틈을 스프레이 병에서 전달된 물로 채웁니다. 이제 알루미늄 블록에 분석 플레이트를 놓고 경계가 알루미늄 블록의 가장자리와 정확히 일치하도록 양쪽 가장자리에서 2cm인지 확인합니다.다음으로, 젤이 마르지 않도록 플레이트 표면에 물막을 뿌립니다. 다음으로, 증발을 줄이고 겔 표면의 온도를 안정화하는 데 도움이 되도록 판지 상자로 시스템을 덮습니다. 온도가 평형을 이룰 때까지 5분에서 10분 동안 기다립니다.그런 다음 최소 12개 위치에서 플레이트의 표면 온도를 확인하여 전체적으로 균일한 온도가 있는지 확인하고 섭씨 2도를 주거나 취합니다. 그런 다음 분석이 수행될 때까지 상자 덮개를 교체합니다. 깨끗한 유충을 분리하려면 먼저 50ml 시험관에 약 40ml의 18% 자당 용액을 추가합니다.그런 다음 스쿠퓰라를 사용하여 음식 더미의 유충을 용액으로 옮깁니다. 다음으로, 스쿠퓰라를 사용하여 용액에 유충을 철저히 섞습니다. 이제 유충이 튜브의 최상층으로 떠오를 때까지 30-60초 동안 기다립니다.그런 다음 유충과 함께 용액을 다른 50ml 튜브에 붓고 신선한 18% 자당으로 마무리합니다. 다시 말하지만, 유충이 떠오를 때까지 기다립니다. 음식의 존재는 결과에 영향을 미칠 수 있습니다.따라서 재현 가능한 결과를 얻으려면 유충을 철저히 청소하여 음식으로 인한 오염을 최소화하는 것이 중요합니다. 유충이 손상되지 않도록 부드럽게 하십시오. 다음으로, 50밀리리터 튜브 위에 300미크론 세포 여과기를 놓고 자당 용액 표면에서 성인 시체와 떠다니는 파편을 제거합니다.이제 여과기를 통해 유충을 부어 메쉬 스크린에 수집합니다. 그런 다음 여과기에 약 50ml의 물을 두 번 흘려보내 유충을 더 청소합니다. 그런 다음 빈 35mm 접시에 물을 사용하여 여과기에서 대부분의 유충을 헹굽니다.페인트 브러시를 사용하여 메쉬에 남아 있는 유충을 옮깁니다. 그런 다음 마이크로 피펫을 사용하여 접시에서 대부분의 물을 빨아들입니다. 그런 다음 유충이 탈출하지 못하도록 접시의 뚜껑을 거꾸로 놓습니다.이제 분석을 시작하기 전에 유충이 10-20분 동안 회복할 때까지 기다립니다. 먼저 젤 위의 판지 상자를 제거하고 젤 표면 온도를 빠르게 확인합니다. 표면이 건조하면 표면에 소량의 물을 분사하십시오.젤이 좋으면 작은 붓을 사용하여 각 판의 중앙에 100-200 마리의 유충을 넣으십시오. 그런 다음 각 분석 플레이트에 뚜껑을 덮어 유충을 가두고 판지 상자로 설정을 덮어 빛 노출을 방지합니다. 분석은 현재 진행 중입니다.10-30분 후 판지 상자와 마이크로플레이트 뚜껑을 제거합니다. 그런 다음 위에서 접시를 촬영하여 유충의 위치를 기록합니다. 젤 표면에 반사되지 않도록 상자를 카메라 위에 놓습니다.접시를 청소하려면 흩어졌을 수 있는 모든 유충을 흡인하십시오. 이제 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 각 구역에서 유충의 백분율 분포를 계산하십시오. 분석 플레이트의 경계에 따라 2cm마다 선을 만들고 각 구역의 유충 수를 계산합니다.계수할 때 젤 두께와 온도 조건이 가장자리 근처에서 균일하지 않으므로 각 가장자리에서 0.5cm 떨어진 능선에 분포된 유충은 무시합니다. 섭씨 18도에서 28도까지는 섭씨 16.8도와 섭씨 31도로 설정된 수조를 사용하여 단방향 구배를 만들었습니다. 구배를 따른 온도 분포는 거의 선형인 것으로 나타났습니다.대조군 유충은 다양한 연령에서 분석되었습니다. 첫 번째, 두 번째, 세 번째 초기의 인스타 유충은 섭씨 24도 영역에서 최고의 선호도를 보였습니다. 3 분 3 중반 동안 대부분의 유충은 섭씨 18도 영역에 축적되었습니다.돌아다니지 않는 후반 3분의 1 instar 유충은 섭씨 18도 영역에 빽빽하게 모여 있었습니다. 대조군 균주에서 섭씨 18도 구역에 축적되는 경향은 백색 1118이었는데, 이는 가장자리 효과 때문이 아니었는데, 이는 3분의 1 후반 인스타 유충이 여전히 양방향 구배를 사용하여 섭씨 18도 구역에 축적되었기 때문입니다. 3세 후반 instar 유충이 온도를 구별하는 데 필요한 돌연변이를 가지고 있는지 분석했을 때 결과가 바뀌었습니다.trpA1에서 null 돌연변이가 있는 유충은 섭씨 18도에서 섭씨 28도 구배 전체에 균등하게 분포했습니다. A와 B 이성질체 또는 trpA1의 C와 D 이성질만 없는 유충도 심각한 손상을 보였다. 포스포리파제 c 베타(phospholipase c beta)인 norpA를 암호화하는 두 유전자 중 하나에 돌연변이가 있는 유충도 파괴되었다.그러나 다른 포스포리파제 c 베타인 plc21c를 암호화하는 유전자에 돌연변이가 있는 유충은 정상적으로 행동했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 야생형 유충과 돌연변이 초파리 유충의 온도 선호도를 비교할 수 있는 연속 열 구배를 사용하여 재현 가능한 결과를 얻는 방법에 대해 명확하게 이해하게 될 것입니다. 이 기법을 완전히 익히면 단일 분석으로 30분 안에 완료할 수 있습니다.이 절차를 시도하는 동안 플라이 바이알의 상태에 주의를 기울이고 유충이 건조된 경우 사용하지 않는 것이 중요합니다. 이 기술은 초파리 유충이 편안한 범위에서 좋아하는 온도를 선택하는 데 필요한 새로운 유전자의 발견을 단순화합니다.

a-temperature-gradient-assay-to-determine-thermal-preferences

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 문서에서 우리는 assays가 열 nociception 공부를...

에서 열 Nociception를 평가 지역 및 글로벌 방법<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

이 비디오는 선호 물질을 섭취한 후 파리의 복부 착색을 평가하여 맛이 다른 착색 용액에 대한 매력 또는 회피를 측정하는 데 사용되는 행동 방법인 미각 선호도 분석에 대해 설명합니다. 주요 프로토콜은 다양한 자당 농도의 용액에 대한 파리의 선호도를 측정하는 데 사용되는 절차를 보여줍니다.

Taste Preference Assay: 초파리의 섭식 행동을 측정하는 방법

초파리 유충은 잠재적으로 해로운 열 자극에 대한 반응이 동물의 혐오적 또는 소위 "통각" 행동을 유발하는 전용 감각 뉴런(통각 수용기)을 가지고 있습니다. 이 비디오는 열 프로브를 큐티클에 국부적으로 적용한 것에 대한 반응으로 유충 행동을 기록하여 열 통각을 평가하는 방법을 설명합니다. 따라서 이 방법을 국소 열 프로브 분석이라고 합니다.

국소 열 프로브 분석: 초파리 유충의 고온 통각을 평가하는 방법

초파리 초파리는 작은 온도 변화를 구별할 수 있으므로 열 조건이 유리한 환경을 선택할 수 있습니다. 이 비디오는 선형 열 구배에서 초파리 유충의 온도 선호도를 테스트하는 행동 분석에 대해 설명합니다.

온도 구배 분석: 초파리 유충의 온도 선호도를 테스트하는 방법

우리는 최근에 새로운 Drosophila circadian 출력, 온도 선호 리듬 (TPR)을 확인, 있는 파리에서 선호 하는 온도 낮에는 상승 하 고 밤에 폭포. TPR은 다른 circadian 출력, 운동 활동과 독립적으로 규제됩니다. 여기에서 우리는 Drosophila에서TPR의 디자인 그리고 분석을 기술합니다.

드로소필라의 온도 선호도 행동과 Circadian 리듬의 설계 및 분석

이 보고서는 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 사용하여 초파리 유충 활동을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 장치는 적외선 빔을 사용하여 최대 16 마리의 개별 동물의 움직임을 감지합니다. 데이터를 분석하여 분석 챔버 내 동물의 비율 및 위치를 포함한 모션 매개변수를 나타낼 수 있습니다.

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

여기에서 우리는 초파리 유충의 차가운 통각을 연구하는 새로운 분석을 보여줍니다. 이 분석은 초점 유해 냉 자극을인가 할 수있는 맞춤식 펠티에 프로브를 이용하여 정량화하고 초기 특정 행동을 초래한다. 이 기술은 차가운 통각의 추가 세포 및 분자 해부를 허용합니다.

콜드 통각에 대한 소설 분석<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레

여기 우리는 자동으로 시간과 공간에 신속 하 고 정확한 온도 변화를 생성 하는 프로그래밍 가능 온도 제어 경기장을 사용 하 여 온도 변화에 초파리 의 운동 성능을 결정 하는 프로토콜을 제시.

시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

열 제한은 급속한 기후 변화에 직면하여 중요한 정보인 유기체가 견딜 수 있는 환경을 예측할 수 있습니다. 여기에 설명된 곤충의 중요한 열 미니마 및 열 녹다운 시간을 평가하는 고처리량 프로토콜이 있습니다. 두 프로토콜 모두 처리량을 최대화하고 분석 비용을 최소화합니다.

곤충의 중요한 열 한계에 대한 높은 처리량 해석

곤충은 내부에 머물기를 원하는 최적의 환경 온도 범위를 가지고 있으며 많은 외부 및 내부 요인이 이러한 선호도를 변경할 수 있습니다. 여기에서는 곤충이 자연스러운 행동을 자유롭게 나타낼 수 있도록 온도 선택을 연구하는 비용 효율적이고 간단한 방법을 설명합니다.

모기 및 기타 외온선의 온도 선호도 결정

이 보고서는 인큐베이터 챔버 내의 공기 전도 열 스트레스 요인에 대한 응답으로 DAM2(Drosophila Activity Monitor)를 사용하여 성체 Drosophila melanogaster 녹다운 시간을 측정하는 방법을 설명합니다. DAM2는 적외선 빔을 가로지르는 개별 파리의 움직임을 기록하여 활동을 측정합니다. 데이터 분석은 저자가 만든 새로운 실행 파일에 의해 촉진됩니다.

Drosophila Activity Monitor 시스템을 사용한 열 내성 분석: 데이터 분석을 위한 실행 가능한 응용 프로그램 가이드

학습하세요 Drosophila melanogaster 애벌레의 온도 선호도를 연속적 열 환경 설정을 통해 분석하는 방법을. 이 기법은 신경과학 및 행동학 연구에서 감각 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

초파리 애벌레의 열 환경 설정을 결정 하는 온도 분석 결과

더 많은 동영상 탐색