각막 상피 영상 촬영에서 Z-step 크기가 왜 중요한가요?

Z 스텝을 1 µm로 설정하면 각막 상피의 표층 날개 세포와 기저 세포의 정밀한 광학 절편화(optical sectioning)가 가능해져, 층 간 단일 세포의 매핑과 육각형 세포 형태의 시각화가 가능합니다. 이러한 해상도는 살아있는 조직 내 상피 역동성과 구조적 무결성의 정량적 분석을 지원합니다.

이중 여기 파장 선택은 어떻게 특정 신호 검출을 가능하게 합니까?

SHG EGFP에는 880 nm 여기광을, tdTomato에는 940 nm 여기광을 사용하면 제2고조파 발생(SHG) 신호와 형광 신호를 분광학적으로 분리할 수 있어, 무표지 기질 이미징과 막 단백질 시각화를 동시에 수행할 수 있습니다. 이러한 접근 방식은 신호 간의 간섭(bleed-through)을 방지하며 세포 및 구조 신호의 정확한 할당을 보장합니다.

후처리 과정에서 중앙값 3D 필터링(median 3D filtering)을 통해 무엇을 수행할 수 있습니까?

Fiji의 Median 3D 필터 플러그인을 적용하면 각막 기질, 신경 섬유 및 모세혈관 네트워크의 구조적 세부 사항을 유지하면서 Z-스택의 배경 노이즈를 제거할 수 있습니다. 이 단계는 대비 최적화 및 3D 재구성 전에 신호 대 잡음비를 향상시킵니다.

안구 표면 안정화가 영상 품질에 영향을 미치는 이유는 무엇입니까?

전용 홀더와 포셉을 통해 적절한 압력으로 안구를 고정하면 각막 및 결막 표면의 Z-시리얼 이미징 동안 발생하는 움직임 아티팩트를 방지할 수 있습니다. 압력이 부족하거나 과도하면 조직 변형 또는 허혈을 유발하여 이미지 품질을 저하시키며, 이는 데이터 신뢰성에 직접적인 영향을 미칩니다.

SHG와 tdTomato 신호를 분리하는 데 어떤 스펙트럼 필터가 필요한가요?

434-17 nm, 510-84 nm, 585-40 nm 밴드 패스 필터를 사용하면 SHG EGFP, EGFP, tdTomato 신호를 분광학적으로 분리할 수 있어, 콜라겐성 기질, 핵 및 막 신호를 명확하게 검출할 수 있습니다. 이 필터 세트는 검출 경로에서 분광 중첩 없이 다중 이미징을 수행하는 데 필수적입니다.

마우스 각막과 결막의 라이브 이미징을 위한 맞춤형 다광현미경 플랫폼

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2020년 5월 17일

10.3791/60944-v

2020년 5월 17일

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Yueh-Feng Wu¹ , Rai-Teng Ye¹ , Ming-Kai Pan²^,³ , Sung-Jan Lin^*¹^,³^,⁴^,⁵ , Hsin-Yuan Tan^*⁶^,⁷

¹Department of Biomedical Engineering, National Taiwan University, ²Institute of Pharmacology, College of Medicine, National Taiwan University, ³Molecular Imaging Center, National Taiwan University, ⁴Department of Dermatology, National Taiwan University Hospital, and College of Medicine, ⁵Research Center for Developmental Biology and Regenerative Medicine, National Taiwan University, ⁶Department of Ophthalmology, Chang Gung Memorial Hospital, ⁷College of Medicine, Chang Gung University

^* These authors contributed equally

여기에 제시 라이브 마우스 안구 표면 이미징을위한 다광 현미경 플랫폼입니다. 형광 형질 전환 마우스는 안구 표면 내의 세포 핵, 세포 막, 신경 섬유 및 모세 혈관의 시각화를 가능하게합니다. 콜라주 구조에서 파생된 비선형 제2 고조파 생성 신호는 기질 아키텍처에 대한 라벨없는 이미징을 제공합니다.

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