Name: 표적 약물 전달을 위해 독소루비신으로 로드된 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노 입자의 합성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 학습하세요 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노입자 합성법을 통한 독소루비신 표적 전달 방법을. 이 기법은 암세포 선택적 사멸을 유도하여 독성을 최소화하고 치료 효능을 높이는 새로운 암 치료 전략을 제시합니다.

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이 연구는 중국의 국립 자연 과학 재단에 의해 투자되었다 (31700840); 허난성의 주요 과학 연구 프로젝트 (18B430013, 18A150049). 이 연구는 XYNU의 젊은 학자를위한 난후 학자 프로그램에 의해 지원되었다. 저자는 그의 도움이 작품에 대한 XYNU생명과학대학의 학사 학생 제보 Qu에게 감사를 표하고 싶습니다. 저자는 장비 사용에 대한 XYNU의 분석 및 테스트 센터를 인정하고 싶습니다.

주의: 모든 화학 물질을 사용하기 전에 모든 관련 재료 안전 데이터 시트(MSDS)를 참조해야 합니다. 중합체 및 나노 입자를 준비하는 데 사용되는 화학 물질의 몇 가지는 급성 독성이 있습니다. 나노 입자는 또한 잠재적인 위험이 있습니다. 장갑, 실험실 코트, 후드, 전신 바지, 근접 신발 등 모든 적절한 안전 관행과 개인 보호 장비를 사용해야 합니다.
1. 이중 카복실 폴리에틸렌 글리콜 (CT-PEG)33의 합성
<ol><li>1.46 g (14.6 mmol) 수치 안 수 화물 (SA) 및 209 mg (1.71 mmol) 4-디메틸 아미노피리딘 (DMAP)의 100 mL 라운드 바닥 플라스크에 추가합니다.</li>
	<li>1.1단계에서 사용되는 플라스크에 15mL의 무수스테트라하이드로푸란(THF)을 추가하고 유리 스토퍼에 맞춥니다. 플라스크를 0°C에서 30분 동안 보관하십시오.</li>
	<li>폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 트리에틸라민(TEA)의 1.8mL(12.8mmol)을 새로운 플라스크에 4.28g(4.28mmol)을 추가한다.</li>
	<li>1.3 단계에서 사용되는 플라스크에 15mL의 무수THF를 추가하고 유리 스토퍼에 맞습니다. 질소 대기 하에서 주사기를 사용하여 1.2 단계에서 사용되는 플라스크로 천천히 용액을 전달합니다.</li>
	<li>용액을 0°C에서 2시간 동안 저은 다음 밤새 실온(RT)에서 반응을 계속합니다.</li>
	<li>회전 증발기(40°C, 0.1 MPa)를 사용하여 반응 용액을 농축하고 THF 용매를 제거한다.</li>
	<li>RT에서, 1.325 g/mL 디클로로메탄(DCM)의 15mL에서 1.6단계에서 반응 용액을 용해한 다음, 강수산물(폴리에틸렌 글리콜 디산)을 얻기 위해 15mL의 콜드 다이틸 에테르(Et2O)를 첨가한다. 필터 용지를 통해 용매를 제거합니다. 참고: 강수 단계는 3배 반복될 수 있습니다.</li>
	<li>48 시간 동안 RT에서 진공 상태에서 침전을 건조시.</li>
</ol>2. PEI-g-PEG 합합체 합성
<ol><li>305.47 단계에서 CT-PEG의 mg 1.8 과 5 mL 디메틸 설산화물 (DMSO) 플라스크에 하 고 CT-PEG가 DMSO에 완전히 용해 되도록 RT에서 저어.</li>
	<li>DMSO의 5mL에서 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디미드 염산염(EDC)의 49.46 mg을 녹인 다음, 2.1단계에서 사용되는 플라스크에 용액을 추가하고 RT에서 30분 동안 저어줍니다.</li>
	<li>DMSO의 5mL에 29.69 mg의 N-하이드록시시시니미드(NHS)를 용해하고 2.1단계에서 사용되는 플라스크에 용액을 추가한다. 3 시간 동안 RT에서 계속 저어주세요.</li>
	<li>DMSO의 10mL에 폴리에틸렌네이민(PEI)의 28.6 μL을 용해하고 2.1단계에서 사용되는 플라스크에 액액을 드롭방향으로 추가한다. 적어도 3 일 동안 저어주세요.</li>
	<li>반응형 용액을 2.4단계에서 투석 백(1,000개의 분자량 컷오프[MWCO]으로 전송합니다. 투석 가방을 투석물로 500mL초순수로 1L 비커에 넣습니다. 3 일 동안 12 시간마다 초순수를 변경합니다.</li>
	<li>다른 투석 가방 (10,000 MWCO)에 2.5 단계에서 솔루션을 전송합니다. 투석 가방을 투석물로 500mL초순수로 1L 비커에 넣습니다. 3 일 동안 12 시간마다 초순수를 변경합니다.</li>
	<li>회전 증발기(40°C, 0.1 MPa)를 이용하여 2.6단계에서 용액을 농축하고 시료를 동결건조하여 PEI-g-PEG 분말을 획득한다.</li>
</ol>3. PEI-g-PEG@AuNPs 합성
<ol><li>5 mg의 완고한 PEI-g-PEG(2.7단계)를 5mL의 초순수로 녹여 서 새로운 플라스크에 넣고 유리 스토퍼에 맞춥니다.</li>
	<li>플라스크에 0.3 mM HAuCl4 용액의 100 mL을 추가하고 RT에서 3 시간 용용액을 저어줍니다. 참고: 솔루션의 색상은 노란색에서 주황색으로 즉시 변경되어야 합니다.</li>
	<li>플라스크에 1 mg /mL NaBH4 용액의 1 mL을 추가하고 RT에서 3 시간 용용액을 저어줍니다. 참고: 반응 솔루션은 즉시 부르고뉴로 바꿔야 합니다.</li>
	<li>PEI-g-PEG@AuNPs 용액을 얻기 위해 2.5단계에서 설명된 바와 같이 3일간 투석백(1,000MWCO)을 이용하여 반응 제품을 투석한다.</li>
</ol>4. DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 합성
<ol><li>2.2 mg / mL DOX 솔루션의 1 mL과 새로운 플라스크에 PEI-g PEG@AuNPs 솔루션 20 mL을 추가하고 유리 스토퍼에 맞게.</li>
	<li>초순수 1mL에 EDC 0.727 mg을 용해하고 4.1 단계에서 사용되는 플라스크에 EDC 용액을 추가한다.</li>
	<li>초순수 1mL에 NHS 0.437 mg을 용해하십시오. FLASK에 NHS 솔루션을 추가하고 1 시간 동안 RT에서 저어.</li>
	<li>2.5단계에서 설명한 대로 3일간 투석백(1,000MWCO)을 사용하여 반응 제품을 투석하여 DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 솔루션을 획득하였다.</li>
</ol>5. AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 합성
<ol><li>새로운 플라스크에 DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 용액 20mL및 AS1411(OD = 광학 밀도; 1OD ≈ 33 μg)의 4OD를 추가합니다.</li>
	<li>초순수 1mL에 28.76 mg의 EDC를 녹이고 5.1단계에서 사용되는 플라스크에 EDC 용액을 추가한다.</li>
	<li>초순수 1mL에 NHS 17.27 mg을 녹입니다. 5.1 단계에서 사용되는 플라스크에 NHS 솔루션을 추가하고 RT에서 1h에 대한 반응을 저어줍니다.</li>
	<li>AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 획득하기 위해 2.5단계에서 설명된 바와 같이 3일간 투석백(1,000 MWCO)을 사용하여 반응 제품을 투석한다.</li>
</ol>6. 샘플 특성화
<ol><li>핵 자기 공명(NMR) 튜브에서 클로로폼-d에서 CT-PEG 폴리머(Step 1.8) 및 PEI-g-PEG 중합체(step 2.7)를 각각 용해한다. 14.09 T 초전도 자석과 5.0mm 600 MHz 광대역 Z 그라데이션 고해상도 프로브가 장착된 600 MHz NMR 분광계를 사용하여 샘플을 분석하여 화학구조(34)를확인한다.</li>
	<li>AuNPs, DOX 및 AS1411을 분산시키고, 울트라퓨어워터에서 각각 PEI-g-PEG@AuNPs(3.4단계), DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs(단계 4.4), 및 AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs(단계 5.4)를 제조하였다. 그런 다음 UV-vis 분광광계를 사용하여 큐벳으로 옮기고 자외선 가시성 (UV-vis) 스펙트럼을 기록하십시오.</li>
	<li>알루미늄 호일에 양면 접착제(~2mm x 2mm)를 부착하고 샘플 용액(PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs, AS1411 g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs)을 전체 테이프에 균일하게 찍어 보세요. X선 광전자 분광분석기를 사용하여 샘플을 분석합니다.</li>
	<li>PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs, AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 솔루션을 각각 초순수수에 분산시한다. 그런 다음, 큐벳으로 옮기고 동적 광 산란을 사용하여 크기 분포를 평가합니다.</li>
	<li>PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs, 및 AS1411 g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 용액을 초순수 수분(각 시료당 5mL당 1방울의 샘플). 2 시간 동안 초음파 처리합니다. 구리 그리드를 샘플 솔루션에 담그고 적외선 램프 아래에서 건조시하십시오. 변속기 현미경을 사용하여 형태학을 특성화한다.</li>
	<li>AS1411-g-DOX-g-PEI-g-g-PEG@AuNPs 20kDa MWCO 투석 카세트에 1 mg을 주입한 다음, 5% 소세럼 알부민(BSA)이 있는 인산완충식살린(PBS)의 80mL에 넣습니다. 37°C에서 저어줍니다.</li>
	<li>미리 정해진 시점에서 100μL 알리쿼트를 수집하고 신선한 PBS로 대체합니다. UV-vis 분광계를 사용하여 알리쿼트의 DOX 형광 강도를 측정합니다.</li>
</ol>7. AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 나노 입자의 CCK-8 분석
<ol><li>Dulbecco의 수정된 독수리 매체(DMEM)에서 A549 세포를 성장시키는 것은 10% 태아 소 혈청, 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 연쇄절제술로 37°C에서 95%의 공기와 5% CO2의 가습대기 하에서 보충됩니다. 배양 배지를 2일마다 교체합니다. 세포 증식 및 세포 독성 분석에 대해 5통로에서 세포를 사용하여 준비된 AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 나노입자의 세포 독성을 정량적으로 평가한다.</li>
	<li>각 우물에 1mL의 세포 배지를 함유하고 있는 나노입자 용액 100μL을 추가합니다. 24h 및 48h를 배양한 후, 세포 배양 판에서 배양 매체를 제거한 다음, 300 μL의 신선한 배양 배지와 30 μL의 세포 계수 키트-8(CCK-8) 키트 솔루션을 각 웰에 즉시 첨가한다. 37°C에서 CO2 인큐베이터에서 4시간 동안 배양한다.</li>
	<li>반응 솔루션 200 μL을 7.2 단계에서 96 웰 플레이트로 옮킨다. 마이크로 플레이트 판독기와 함께 570 nm에서 각 웰의 광학 밀도(OD)를 읽습니다.</li>
	<li>현미경으로 24 h 및 48 h에서 세포의 형태를 관찰하십시오.</li>
</ol>

<ol><li>Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-tasking+base+ligand%3A+a+new+concept+of+AuNPs+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2019%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2019.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li>
<li>Jang, B., Kwon, H., Katila, P., Lee, S. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+delivery+of+biological+therapeutics+for+multimodal+and+synergistic+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dual delivery of biological therapeutics for multimodal and synergistic cancer therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 98, 113-133 (2016).</li>
<li>Gansler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixty+years+of+CA%3A+a+cancer+journal+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Sixty years of CA: a cancer journal for clinicians.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 60 (6), 345-350 (2010).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanism+for+Selective+Cytotoxicity+towards+Cancer+Cells+of+Diselenide-Containing+Paclitaxel+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanism for Selective Cytotoxicity towards Cancer Cells of Diselenide-Containing Paclitaxel Nanoparticles.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (8), 1755-1770 (2019).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+ratiometric+loading+of+PTX+and+DOX+based+on+redox-sensitive+mixed+micelles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Precise ratiometric loading of PTX and DOX based on redox-sensitive mixed micelles for cancer therapy.</a> Colloids Surfaces B: Biointerfaces. 155, 51-60 (2017).</li>
<li>Blum, R. H., Carter, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin.+A+new+anticancer+drug+with+significant+clinical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adriamycin. A new anticancer drug with significant clinical activity.</a> Annals of Internal Medicine. 80 (2), 249-259 (1974).</li>
<li>de Lima, R. D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+alleviates+the+deleterious+effect+of+doxorubicin+on+rat+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+Photobiology+B%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy alleviates the deleterious effect of doxorubicin on rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Photochemistry Photobiology B. 196, 111512(2019).</li>
<li>Markowska, A., Kaysiewicz, J., Markowska, J., Huczynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline%2C+salinomycin%2C+monensin+and+ivermectin+repositioned+as+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Doxycycline, salinomycin, monensin and ivermectin repositioned as cancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 29 (13), 1549-1554 (2019).</li>
<li>Songbo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+injury+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Toxicology Letters. 307, 41-48 (2019).</li>
<li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Gabizon, A., Shmeeda, H., Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+pegylated+liposomal+Doxorubicin%3A+review+of+animal+and+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin: review of animal and human studies.</a> Clinical Pharmacokinetics. 42 (5), 419-436 (2003).</li>
<li>Xu, X., Ho, W., Zhang, X., Bertrand, N., Farokhzad, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicine%3A+from+targeted+delivery+to+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicine: from targeted delivery to combination therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (4), 223-232 (2015).</li>
<li>Feng, S., Nie, L., Zou, P., Suo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+drug+and+polymer+molecular+weight+on+drug+release+from+PLGA-mPEG+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of drug and polymer molecular weight on drug release from PLGA-mPEG microspheres.</a> Journal of Applied Polymer Science. 132 (6), 41431(2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Temperature-sensitive+Hydrogel+with+VEGF+Loaded+Microspheres+for+Vascularization+and+Bone+Regeneration+of+Femoral+Head+Necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Letters%22%5BJournal%5D)">Injectable Temperature-sensitive Hydrogel with VEGF Loaded Microspheres for Vascularization and Bone Regeneration of Femoral Head Necrosis.</a> Materials Letters. 229, 138-141 (2018).</li>
<li>Abadeer, N. S., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Cancer+Thermal+Therapy+Using+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Cancer Thermal Therapy Using Gold Nanoparticles.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 120 (9), 4691-4716 (2016).</li>
<li>Riley, R. S., Day, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-mediated+photothermal+therapy%3A+applications+and+opportunities+for+multimodal+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-mediated photothermal therapy: applications and opportunities for multimodal cancer treatment.</a> WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (4), 1449(2017).</li>
<li>Fratoddi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Hydrophilic+Gold+Nanoparticles+as+Carrier+for+Anticancer+Copper%28I%29+Complexes%3A+Loading+and+Release+Studies+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly Hydrophilic Gold Nanoparticles as Carrier for Anticancer Copper(I) Complexes: Loading and Release Studies for Biomedical Applications.</a> Nanomaterials (Basel). 9 (5), 772(2019).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-loaded+gold+plasmonic+nanoparticles+for+treatment+of+multidrug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Drug-loaded gold plasmonic nanoparticles for treatment of multidrug resistance in cancer.</a> Biomaterials. 35 (7), 2272-2282 (2014).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2740-2779 (2012).</li>
<li>Wei, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+drug+nanomicelles+formed+by+self-assembling+amphiphilic+dendrimer+to+combat+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anticancer drug nanomicelles formed by self-assembling amphiphilic dendrimer to combat cancer drug resistance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (10), 2978-2983 (2015).</li>
<li>Galluzzi, L., Buque, A., Kepp, O., Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Effects+of+Conventional+Chemotherapy+and+Targeted+Anticancer+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunological Effects of Conventional Chemotherapy and Targeted Anticancer Agents.</a> Cancer Cell. 28 (6), 690-714 (2015).</li>
<li>Muddineti, O. S., Ghosh, B., Biswas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+trends+in+using+polymer+coated+gold+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Current trends in using polymer coated gold nanoparticles for cancer therapy.</a> International Journal of Pharmaceutics. 484 (1-2), 252-267 (2015).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+Orange+removal+by+a+novel+PEI-AuNPs-hemin+nanocomposite%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methyl Orange removal by a novel PEI-AuNPs-hemin nanocomposite.</a> Journal of Environmental Sciences. 53, 278-283 (2017).</li>
<li>Gu, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticles for cancer therapy.</a> Nano Today. 2 (3), 14-21 (2007).</li>
<li>Srinivasarao, M., Galliford, C. V., Low, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+the+design+of+ligand-targeted+cancer+therapeutics+and+imaging+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Principles in the design of ligand-targeted cancer therapeutics and imaging agents.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (3), 203-219 (2015).</li>
<li>Liu, Z., Shi, Y., Chen, Z., Duan, L., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+towards+the+use+of+aptamers+in+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Science+Bulletin+%28Chinese+Version%29%22%5BJournal%5D)">Current progress towards the use of aptamers in targeted cancer therapy.</a> Chinese Science Bulletin (Chinese Version). 59 (14), 1267(2014).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Vandghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+LNA-loaded+nanoparticles+of+star-shaped+glucose-core+PCL-PEG+copolymer+for+enhanced+inhibition+of+oncomiR-214+and+nucleolin-mediated+therapy+of+cisplatin-resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Antisense LNA-loaded nanoparticles of star-shaped glucose-core PCL-PEG copolymer for enhanced inhibition of oncomiR-214 and nucleolin-mediated therapy of cisplatin-resistant ovarian cancer cells.</a> International Journal of Pharmaceutics. 573, 118729(2020).</li>
<li>Andghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AS1411+aptamer-decorated+cisplatin-loaded+poly%28lactic-co-glycolic+acid%29+nanoparticles+for+targeted+therapy+of+miR-21-inhibited+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">AS1411 aptamer-decorated cisplatin-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles for targeted therapy of miR-21-inhibited ovarian cancer cells.</a> Nanomedicine. 13 (21), 2729-2758 (2018).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+anti-nucleolin+recombinant+immunoagent+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human anti-nucleolin recombinant immunoagent for cancer therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (30), 9418-9423 (2015).</li>
<li>Pichiorri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+NCL+targeting+affects+breast+cancer+aggressiveness+through+miRNA+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo NCL targeting affects breast cancer aggressiveness through miRNA regulation.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (5), 951-968 (2013).</li>
<li>Hou, S., McCauley, L. K., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+erosion+properties+of+PEG-containing+polyanhydrides%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Synthesis and erosion properties of PEG-containing polyanhydrides.</a> Macromolecular Bioscience. 7 (5), 620-628 (2007).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Vaginal+Hydrogels+as+a+Multi-Drug+Carrier+for+Contraception%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injectable Vaginal Hydrogels as a Multi-Drug Carrier for Contraception.</a> Applied Sciences. 9 (8), 1638(2019).</li>
<li>Zou, P., Suo, J., Nie, L., Feng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-responsive+biodegradable+star-shaped+block+copolymers+for+vaginal+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Temperature-responsive biodegradable star-shaped block copolymers for vaginal gels.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (13), 6316-6326 (2012).</li>
<li>Etrych, T., Šubr, V., Laga, R., Říhová, B., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+conjugates+of+doxorubicin+bound+through+an+amide+and+hydrazone+bond%3A+Impact+of+the+carrier+structure+onto+synergistic+action+in+the+treatment+of+solid+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 58, 1-12 (2014).</li>
<li>Safari, F., Tamaddon, A. M., Zarghami, N., Abolmali, S., Akbarzadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyelectrolyte+complexes+of+hTERT+siRNA+and+polyethyleneimine%3A+Effect+of+degree+of+PEG+grafting+on+biological+and+cellular+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyelectrolyte complexes of hTERT siRNA and polyethyleneimine: Effect of degree of PEG grafting on biological and cellular activity.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 44 (6), 1561-1568 (2016).</li>
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1H NMR스펙트럼(도 2)은CT-PEG 중합체 및 PEI-g-PEG 중합체의 성공적인 합성을 확인합니다. PEG와 PEI의 분자량은 각각 1,000및 1,200이었습니다. 또한, EDC/NHS 촉매 시스템은 아미드 반응을 통해 PEI-g-PEG 합합체를 합성하는 데 사용되었습니다. PEG와 PEI의 분자량이 PEI-g-PEG 합합체를 합성하기 위해 변경되면 반응 시간과 촉매 시스템을 재평가해야 합니다. 또한, AUNPs에 대한 PEI-g-PEG 공중합체 코팅에 대한 반응 조건은 주로 PEG-g-PEI 공중합체의 분자 중량 및 구조가 AuNPs의 코팅 효율 및 직경에 영향을 미칠 수 있기 때문에 더욱 조정될 필요가 있다. 그 후, 기능성 AuNPs의 형태도 변경될 수 있다. PEI 폴리머로부터의 아미노산그룹의 수는 최종 PEI-g-PEG 중합체 합성의 구조에 영향을 미칠 수 있으며, PEI와 CT-PEG 사이의 크로스링크 작용은 필연적으로 발생할 것이다. ...

전 세계적으로 주요 공중 보건 문제이기 때문에 암은 치료율이 낮고 재발률이 높고 사망률이 높은 것으로 널리 특징지으며사망률은 1,2. 현재 종래의 항암 방법은 수술, 화학요법 및 방사선 요법3을포함하며, 그 중 화학요법은 클리닉4에서암 환자를 위한 1차 치료법이다. 임상중항암제는 주로 파클리탁셀(PTX)5 및 독소루비신(DOX)6,7을포함한다. 항신성형치료제인 DOX는 암 세포독성 및 암세포 증식 억제의 장점으로 임상화학요법에 광범위하게 적용되어왔다8,9. 그러나 DOX는 심장독성을 10,11로유발하며, DOX의 짧은 반감기는클리닉(12)에서의적용을 제한한다. 따라서, 분해가능한 약물 운반체는 DOX를 적재하고 통제된 방식으로 표적 영역으로 안전하게 방출하기 위해 필요합니다.
나노 입자는 표적 약물 전달 시스템에 널리 사용되어 왔으며 암 치료에 몇 가지 장점이 있습니다 (즉, 크기가 큰 표면 대 부피 비율, 작은 크기, 다양한 약물을 캡슐화하는 능력 및 튜닝 표면 화학 등). 13,14,15. 특히, 금 나노입자(AuNPs)는 광열암치료제(16,17)와같은 생물학적 및 생체 의학 응용 분야에서 널리 사용되고 있다. 촉진 합성 및 일반 표면 기능화와 같은 AuNPs의 독특한 특성은 암치료(18)의임상 분야에서 우수한 전망을 가지고 있다. 또한, AuNPs는 약물 전달 전략을 식별하고, 종양을 진단하고, 많은 연구에서 저항을 극복하기 위해 사용되어 왔다19,20.
하지만, AuNPs는 표적화 및 접근성 특성과 같은 향상된 투과 및 보존(EPR)을 통해 종양 병변에서 높은 국소 방출을 통해 약물 내성을 극복하기 위해 더욱 맞춤화되어야 합니다. 중합체 기능성 AuNPs는 소수성 항암제의 용용성 향상 및 장기간 순환시간(21,22)과같은 독특한 장점을 나타내었다. 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리에틸렌리민(PEI), 히알루론산, 헤파린, 크산탄껌 등 다양한 생체적합성 폴리머가 AuNP 코팅에 사용되어 왔다. 그런 다음 AuNP의 페이로드뿐만 아니라 안정성이 잘향상됩니다(23). 구체적으로, PEI는 1차, 이차 및 고등아민(24)의많은 반복 단위로 구성된 고도로 분진된 중합체이다. PEI는 우수한 용해도, 낮은 점도 및 높은 수준의 기능을 가지고 있으며, 이는 AuNPs코팅에 적합합니다.
한편, 항암제는 하중 효율이 향상되어 암세포에 직접 전달되어야 하며, 1차 및 첨단 전이성 종양 을 치료하기 위한 독성이 낮을 수있다(25). 표적 리간드항은 항암제 표적 전달시스템(26)에큰 잠재력을 가지고 있다. 표적 분자 결합에 대한 선택성은 특이성을 표적으로 하는 항암제를 부여하고 병성 조직에 있는 약 농축을 증가합니다(27). 더 많은 리간드는 항체, 폴리펩티드 및 소분자를 포함한다. 다른 리간드에 비해, 핵산 aptamers는 체외에서 합성될 수 있고 수정하기 쉽습니다. AS1411은 암세포28,29,30에과발현 표적 핵단백질 수용체에 구체적으로 결합하기 위해 안정된 조광 G-테트라머 구조를 형성하는 수정되지 않은 26bp 인포디스터 올리고뉴클레오티드이다. AS1411은 많은 암세포의 증식을 억제하지만 건강한세포(31,32)의성장에영향을 미치지 않는다. 그 결과, AS1411은 이상적인 표적 약물 전달 시스템을 제조하는 데 사용되어 왔다.
본 연구에서는, PEI-g-PEG 공중합체는 아마이드 반응을 통해 합성되고, PEI-g-PEG 공합체 코팅된 금 나노입자(PEI-g-PEG@AuNPs)가 제조된다. 또한 DOX 및 AS1411은 도 1에도시된 바와 같이 준비된 PEI-g-PEG@AuNPs 순차적으로 연결된다. 이 상세한 프로토콜은 연구원이 DOX 및 AS1411로로드된 새로운 PEI-g-PEG@AuNPs 제조와 관련된 많은 일반적인 함정을 피할 수 있도록 돕기 위한 것입니다.

<table><tbody><tr><td>4-디메틸아미노피리딘</td><td>맥클린</td><td>D807273</td><td></td></tr><tr><td>A549 세포</td><td></td><td>ATCC CCL-185TM</td><td></td></tr><tr><td>AS1411</td><td>BBI Life Sciences Corporation</td><td></td><td>5'-d (TTTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGG) FL-AS1411 (형광단 표지 AS1411)</td></tr><tr><td>무수 테트라하이드로푸란(THF)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>세포 계수 키트-8 ( CCK-8)</td><td>시그마 알드리치</td><td>96992-500TESTS-F</td><td></td></tr><tr><td>디클로로메탄</td><td>중국 전통 의학</td><td>80047318</td><td></td></tr><tr><td>디에틸 에테르(Et2O)</td><td>SinoPharm 화학 시약 Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>맥클린</td><td>D806645</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 변형 독수리 매체(DMEM)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>독소루비신 염산염</td><td>Rhawn</td><td>R017518</td><td></td></tr><tr><td>Ether 절대</td><td>중국 전통 의학</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>전계 방출 투과 전자 현미경</td><td>FEI Company</td><td>Tecnai G2 F 20</td><td></td></tr><tr><td>Gold(III) chloride trihydrate</td><td>Rhawn</td><td>R016035</td><td></td></tr><tr><td>Laser Particle-size Instrument</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>ZetasizerNanoZS/ Masterszer3000E</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더</td><td>분자 장치</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 염산염</td><td>맥클린</td><td>N808856</td><td></td></tr><tr><td>N-하이드록시숙신이미드</td><td>맥클린</td><td>H6231</td><td></td></tr><tr><td>NMR 소프트웨어</td><td>Delta 5.2.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>핵 자기 공명 분광계</td><td>JEOL</td><td>JNM-ECZ600R/S3</td><td></td></tr><tr><td>Origin 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페니실린</td><td>시그마 알드리치</td><td>V900929-100ML</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>시그마 알드리치</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>폴리(에틸렌 글리콜)</td><td>시그마 알드리치</td><td>81188</td><td>BioUltra, 평균 Mn ~ 1000</td></tr><tr><td>폴리(에틸렌이민) 용액</td><td>시그마 알드리치</td><td>482595</td><td>평균 Mn ~ 1200, H2O</td></tr><tr><td>나트륨 수소화물, 분말</td><td>Acros</td><td>C18930</td><td></td></tr><tr><td>스트렙토마이신</td><td>시그마 Aldrich</td><td>85886-10ML</td><td></td></tr><tr><td>숙신산 무수물</td><td>전통 중국 의학</td><td>30171826</td><td></td></tr><tr><td>테트라히드로푸란</td><td>전통 중국 의학</td><td>40058161</td><td></td></tr><tr><td>트리에틸아민</td><td>중국 전통 의학</td><td>80134318</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS/NIR 분광계</td><td>Lambda950</td><td>Lambda950</td><td></td></tr><tr><td>X선 광전자 분광계</td><td>Thermo&ensp; 어부&ensp; 사이언티픽</td><td>K-ALPHA 0.5EV</td><td></td></tr></tbody></table>

표적 약물 전달을 위해 독소루비신으로 로드된 압타머-pei-g-peg 수정 금 나노 입자의 합성

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

건강한 세포에서 약물 내성 및 독성으로 인해 독소루비신(DOX)의 사용은 임상 암 요법에서 제한적입니다. 이 프로토콜은 아미드 반응을 통해 로드된 aptamer(AS1411) 및 DOX를 탑재한 폴리에틸렌 글리콜(PEI-g-PEG) 중합체 기능성 금 나노입자(AuNPs)로 이식된 폴리(에틸레니민)의 설계를 설명한다. AS1411은 특히 DOX가 건강한 세포 대신 암세포를 표적으로 할 수 있도록 암세포에 표적 뉴클레놀린 수용체와 결합된다. 첫째, PEG는 카박스화되어 1HNMR 분석에 의해 확인된 PEI-g-PEG 중합체를 얻기 위해 분기된 PEI에 이식된다. 다음으로, PEI-g-PEG 공합체 코팅 금 나노입자(PEI-g-PEG@AuNPs)가 합성되고, DOX 및 AS1411은 아마드 반응을 통해 점차적으로 AuNPs에 공유결합된다. 준비된 AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs 의 직경은 ~39.9nm이며, 제타 전위 -29.3mV로, 나노입자가 물과 세포 배지에서 안정되어 있음을 나타낸다. 세포 세포 독성 연구는 새로 설계된 DOX로드 AuNPs가 암세포 (A549)를 죽일 수 있음을 보여줍니다. 이 합성은 순차적 인 아미데 반응에 의해 달성되는 AuNPs에 PEI-g-PEG 공중 합합체, aptamers 및 DOX의 섬세한 배열을 보여줍니다. 이러한 aptamer-PEI-g-PEG 기능화된 AuNPs는 암 치료에서 표적 약물 전달을 위한 유망한 플랫폼을 제공합니다.

1 H NMR 분광법은 CT-PEG 중합체 및 PEI-g-PEG 중합체(도2)의성공적인 합성을 확인하기 위해 사용되었다. 도 2a는 δ = 3.61 ppm 및 carboxyl 양성자 신호에서 메틸렌 양성자 신호가 δ = 2.57 ppm에서 CT-PEG 폴리머의 성공적인 합성을 확인함을 나타낸다. 도 2b는 δ = 2.6 ppm 및 peI의 양성자 신호에서 PEG의 메틸렌 양성자 신호가 δ = 1.66 ppm에서 PEI-g-PEG 합체의 합성을 확인한다는 것을 보여준다.
UV-비스 분광법은 AuNPs(도3)에제조된 중합체의 성공적인 기능화를 결정하기 위해 수행되었다. UV-vis 스펙트럼...

이 프로토콜에서, 독소루비신로드 AS1411-g-PEI-g-PEG 변형 금 나노 입자는 3 단계 아마이드 반응을 통해 합성된다. 이어서, 독소루비신은 암 치료를 위한 암세포를 표적으로 하기 위하여 장전되고 전달된다.

표적 약물 전달을 위해 독소루비신으로 로드된 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노 입자의 합성

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

약물 내성 및 독성으로 인해 독소루비신의 사용은 클리닉에서 제한됩니다. 이 프로토콜은 이 치료제의 방출을 유지하기 위한 분해성 운반체를 제공합니다. 이 방법의 장점은 합성된 담체를 사용하여 약물을 암세포에 직접 전달하여 암세포에서만 세포 사멸을 유도할 수 있다는 것입니다.CT-PEG 합성을 위해 먼저 100ml의 둥근 바닥 플라스크에 숙신산 무수물 1.46g과 4-디메틸아미노피리딘 209mg을 추가합니다. 다음으로, 플라스크에 15ml의 무수 테트라하이드로푸란을 넣고 유리 마개를 플라스크에 끼운 후 섭씨 0도에서 30분 동안 반응을 배양합니다. 배양하는 동안 PEG 4.208g, 트리에틸아민 1.8ml, 무수 테트라하이드로푸란 15ml를 새 플라스크에 넣고 유리 마개로 플라스크를 닫습니다.배양이 끝나면 질소 분위기에서 주사기를 사용하여 두 번째 용액을 첫 번째 플라스크로 천천히 옮깁니다. 새 용액을 섭씨 0도에서 2시간 동안 저어준 후 밤새 실온에서 반응을 계속합니다. 다음날 아침, 섭씨 40도 및 0.1메가파스칼에서 회전 증발기를 사용하여 반응 용액을 농축하고 테트라하이드로푸란 용매를 제거합니다.한 시간 후, 반응 용액을 실온에서 디클로로 메탄 1 밀리리터 당 1.325 그램 15 밀리리터에 용해시킨 후, 15 밀리리터의 차가운 디 에틸 에테르를 첨가하여 PEG 이산 침전 생성물을 얻는다. 그런 다음 여과지를 통해 용매를 제거하고 실온에서 48시간 동안 진공 상태에서 침전물을 건조시킵니다. PEI-g-PEG 공중합체 합성을 위해 새 플라스크에 CT-PEG 침전물 305.47mg과 DMSO 5ml를 추가하고 CT-PEG가 완전히 용해될 때까지 실온에서 반응을 교반합니다.다음으로, 49.46mg의 EDC를 5ml의 DMSO에 용해시키고 용액을 플라스크에 첨가합니다. 실온에서 30분 동안 반응을 교반한 후 N-하이드록시숙신이미드 29.69mg과 DMSO 5밀리리터를 용해시키고 생성된 용액을 플라스크에 첨가합니다. 실온에서 3시간 동안 반응을 계속 저어줍니다.배양이 끝날 무렵 28.6 마이크로 리터의 PEI를 10 밀리리터의 DMSO에 용해시키고 용액을 플라스크에 적어 넣으십시오. 적어도 3일 동안 실온에서 반응을 교반합니다. 배양이 끝나면 반응된 용액을 분자량 1000 컷오프가 있는 투석 백으로 옮기고 투석액으로 500ml의 초순수가 들어 있는 1리터 비이커에 백을 넣습니다.투석의 끝에, 10, 000의 분자량 커트오프를 가진 투석 부대로 해결책을 옮기고 투석액으로 매우 순수한 물의 500 밀리리터를 가진 1개의 리터 비커로 부대를 두었다. 두 번째 투석이 끝나면 섭씨 40도 및 0.1메가파스칼에서 회전 증발기를 사용하여 용액을 농축하고 샘플을 동결 건조하여 PEI-g-PEG 분말을 얻습니다. PEI-g-PEG 제품으로 금 나노 입자를 코팅하려면 준비된 PEI-g-PEG 5mg을 새 플라스크에 5ml의 초순수에 녹이고 플라스크에 유리 마개를 끼웁니다.플라스크에 0.3 밀리몰 오라 염화물 용액 100 밀리리터를 넣고 실온에서 3 시간 동안 용액을 저어줍니다. 색상은 밝은 노란색에서 짙은 노란색으로 즉시 변경되어야 합니다. 배양이 끝나면 플라스크에 수소화붕소나트륨 용액 1밀리리터당 1밀리리터를 추가합니다.색상은 즉시 짙은 노란색에서 황금색으로 변해야 하며 실온에서 3시간 더 용액을 저어줍니다. 그런 다음 PEI-g-PEG 코팅된 금 나노 입자 용액을 얻기 위해 입증된 바와 같이 1000 분자량 차단 투석 백으로 반응 생성물을 3일 동안 투석합니다. PEI-g-PEG 코팅 금 나노 입자에 독소루비신을 접목합니다.새 플라스크에 2.2밀리리터의 독소루비신 용액 1ml와 PEI-g-PEG 코팅된 금 나노입자 용액 20ml를 넣고 플라스크에 유리 마개를 끼웁니다. 다음으로, 초순수 1ml에 EDC 0.727mg을 용해시키고 EDC 용액을 플라스크에 첨가합니다. 초순수 1ml에 N-Hydroxysoxynimide 0.437mg을 녹이고 N-Hydroxysuccinimide 용액을 플라스크에 첨가하여 실온에서 교반하면서 1시간 동안 배양합니다.배양 종료 시 1000 분자량 차단 투석 백에 반응 생성물을 3일 동안 투석하여 독소루비신 g-PEI-g-PEG 코팅된 금 나노입자 용액을 얻습니다. AS1411 압타머를 DOX-g-PEI-g-PEG에 접목합니다. 독소루비신 DOX-g-PEI-g-PEG 코팅된 금 나노입자 용액 20ml를 AS1411의 약 4 광학 밀도 농도에 첨가합니다.초순수 1ml에 EDC 28.76mg을 녹이고 EDC 용액을 플라스크에 넣습니다. 초순수 1ml에 N-Hydroxysuccinimide 17.27mg을 녹이고 N-Hydroxysuccinimide 용액을 플라스크에 첨가하여 실온에서 교반하면서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 AS1411-g-Doxorubicin-g-PEI-g-PEG 코팅된 금 나노 입자를 얻기 위해 입증된 바와 같이 1000 분자량 차단 투석 백에 반응 생성물을 3일 동안 투석합니다.양성자 NMR 분광법은 CT-PEG 폴리머와 PIE-g-PEG 공중 합체의 성공적인 합성을 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 자외선 분광법을 수행하여 금 나노 입자에 대한 준비된 공중 합체의 성공적인 기능화와 점진적인 로딩을 결정할 수 있습니다. X선 광전자 분광법은 금 나노 입자에 대한 공중 합체의 화학 결합을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.동적 광 산란을 수행하여 준비된 나노 입자의 크기 분포를 결정할 수 있습니다. 이 분석에서 투과 전자 현미경은 균일한 형태를 가진 비클러스터 나노 입자를 밝혀냈습니다. 세포 생존율 분석은 시간이 지남에 따라 그리고 나노 입자의 농도 증가에 대한 반응으로 A549 세포 수가 감소하는 것을 밝혔습니다.그러나 유리 독소루비신 그룹과 비교하면 세포 수가 증가하여 독성이 감소했음을 나타냅니다. 또한, 독소루비신 방출 프로파일을 분석한 결과, 기능화된 나노입자에서 독소루비신이 지속적으로 방출되면 A549 세포가 감소하는 것으로 나타났습니다. PEI-g-PEG 공중합체 준비 및 AS1411 이식 단계는 절차의 성공적인 구현에 중요합니다.약물을 이식하기 전에 AS1411을 이식하여 동일한 약물 전달체를 얻을 수 있지만 약물 로딩 효율이 감소합니다.

synthesis-aptamer-pei-g-peg-modified-gold-nanoparticles-loaded-with

Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

B 타입 젤라틴 기반 공학 nanovectors 시스템 (GENS)은 췌장암의 치료 체계 유전자 전달 및 transfection을 위해 개발되었습니다. 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) nanparticles의 표면에 특정 펩타이드와 수정함으로써, 그들은 EGFR 수용체에서 대상 수와 같은 높은 세포내 글루타티온의 농도로, 환경을 감소 밑에 플라스미드 놓습니다.

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액정 나노 입자 (LCNP) nanocarrier는 살아있는 세포의 세포막에 소수성화물의 제어 전달을위한 수단으로 이용된다.

액정 나노 입자 캐리어의 소수성화물 캡슐화의 대상 플라즈마 멤브레인 배달

이 프로토콜에 설명 합니다 샘플 추출의 효율적이 고 편리한 분석 프로세스와 여러 약물, 독 소 루비 (DOX), 미토마이신 C (MMC) 및 심장 독성 DOX 대사 산물, doxorubicinol (DOXol), 생물학에서의 동시 결정 전 임상 유 방 종양 모델에서 샘플 시너지 약물 조합의 나노 제형으로 치료.

샘플 추출 및 독 소 루비와 미토마이신 C 다음 약물 조합을 전달 나노 입자에 종양 방위 쥐의 동시 크로마 정량

우리 생체 10 nm 금 나노 입자, 표면에 폴 리 에틸렌 글리콜을 코팅 하 여 공업화를 합성 하는 방법을 설명 합니다. 이러한 입자 사용 생체 외에서 수 있으며 vivo에서 나노 세포와 세포 외 공간에 치료제를 제공에 대 한 기존의 나노 크기와 접근 하기 어려운.

기능성된 10 nm 폴리머-코팅 된 금 입자 피 대상에 대 한 및 약물 전달의 합성

정 맥 합성 펩 티 드, 단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제, 국 소 빈 혈 reperfusion 유발 급성 폐 상해 감소를 제공 하는 골드 나노 펩 티 드 하이브리드를 사용 이전 했습니다. 여기 우리가 약물 배합의 상세한 프로토콜을 보여줍니다. 다른 세포내 펩 티 드 유사 하 게 공식화 될 수 있습니다.

단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 펩 티 드 배합 금 나노 입자를 사용 하 여

학습하세요 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노입자 합성법을 통한 독소루비신 표적 전달 방법을. 이 기법은 암세포 선택적 사멸을 유도하여 독성을 최소화하고 치료 효능을 높이는 새로운 암 치료 전략을 제시합니다.

표적 약물 전달을 위해 독소루비신으로 로드된 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노 입자의 합성

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