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DOI: 10.3791/64268-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study describes a method for measuring absolute DNA densities within adherent cell nuclei, utilizing Voronoi tessellation of single-molecule localization microscopy (SMLM) data. This approach enables the investigation of spatial constraints in chromatin structures, linking genetic information with cell cycle stages.
본 프로토콜은 단일 분자 국소화 현미경 데이터, 알려진 부피, 게놈 크기 및 세포 주기 단계의 보로노이 테셀레이션을 사용하여 부착 세포 핵 내의 절대 DNA 밀도를 측정하는 방법을 설명합니다.
본 방법을 사용하면 세포 핵의 절대 DNA 밀도 측정을 통해 번역 후 히스톤 변형으로만 특성화되는 염색질 구조의 공간적 제약을 조사할 수 있습니다. SMLM과 결합된 Voronoi 테셀레이션을 사용하면 제곱 마이크로미터당 염기쌍 측면에서 DNA의 절대 밀도 추정이 가능합니다. 필요한 유일한 선험적 지식은 측정된 세포핵의 총 DNA 함량입니다.
향후 실험에서는 절대 밀도 차이가 후성유전학적 변형의 면역형광 또는 Hi-C 데이터와 같은 다른 방법의 생물학적 정보와 상관관계가 있는지 조사하는 것이 흥미로울 것입니다. 미리 기록된 단일 이미지를 함께 타일링하여 스캔한 영역을 재구성하는 것부터 시작합니다. CellProfiler를 연 다음 파이프라인 cellcycleanalysis.cpproj를 로드합니다.
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