Name: 단일 항체 표지를 이용한 막 단백질의 단분자 위치 현미경 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 학습하세요 단일 항체 표지를 이용한 단분자 위치 현미경으로 T 세포 막 단백질의 나노스케일 항원-항체 상호작용을 시각화하는 방법을. 이 기술은 치료용 항체 연구에 중요한 세포 내 환경에서 직접 관찰을 가능하게 합니다.

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<table><tbody><tr><td>항-CD81 알렉사 플루오르 488 항체</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>MA5-44132</td><td>영상 항체</td></tr><tr><td>벤치탑 원심분리기</td><td>에펜도르프</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>밀리포어 시그마</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>챔버드 커버 유리, 8웰</td><td>셀비스</td><td>C8-1-N</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 미디어</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11960069</td><td></td></tr><tr><td>둘벡코의 인산염 완축 식염수</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>밀리포어 시그마</td><td>F0926-500ML</td><td></td></tr><tr><td>글루타알데히드, 10%</td><td>전자현미경 과학</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>금 콜로이드, 100nm</td><td>테드 펠라</td><td>15711년과 이하; 20</td><td>피듀셜 마커</td></tr><tr><td>침수 오일 & nbsp;</td><td>카길 연구소</td><td>16245</td><td></td></tr><tr><td>역현미경 &nbsp; TIRF 모듈 장착</td><td>니콘 인스트루먼트</td><td>이클립스 Ti2-E</td><td>현미경</td></tr><tr><td>Jurkat E6.1 세포주</td><td>밀리포어 시그마</td><td>88042803-1VL</td><td>서스펜션 셀</td></tr><tr><td>레이저 런치, 6라인</td><td>옥시우스</td><td>L6CC-CS8-1511</td><td>여기 레이저</td></tr><tr><td>리포펙타민 2000</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11668019</td><td>트랜스펙션 시약</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리관, 1.5 mL &nbsp;</td><td>VWR</td><td>89000-028</td><td></td></tr><tr><td>현미경 영상 소프트웨어</td><td>니콘 인스트루먼트</td><td>NIS-엘리먼트 고급 연구</td><td>이미지 수집 소프트웨어</td></tr><tr><td>목표 기준, 100x/1.49 CFI APO TIRF&nbsp;</td><td>니콘 인스트루먼트</td><td>MRD01991</td><td>현미경 대물렌즈</td></tr><tr><td>파라포름알데히드, 16%</td><td>전자현미경 과학</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>15140-122</td><td>항생제</td></tr><tr><td>폴리-L-라이신 용액, 0.01% & nbsp;</td><td>밀리포어 시그마</td><td>P4707-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Prime 95B sCMOS 카메라</td><td>텔레다인 비전 솔루션</td><td>01-프라임-95B-R-M-16-C</td><td>카메라</td></tr><tr><td>RPMI 1640 미디어</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11875-093</td><td>현탁 셀용 매체</td></tr><tr><td>아자이드나트륨</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>19038-1000</td><td></td></tr><tr><td>붕소나트륨</td><td>밀리포어 시그마</td><td>213462-25G</td><td></td></tr><tr><td>T25 배양 플라스크</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>테트라스펙 마이크로스피어</td><td></td><td></td><td>피듀셜 마커</td></tr><tr><td>조직 배양 접시, 100 mm&nbsp;</td><td>코닝</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>U2OS 세포주</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>부착 세포</td></tr></tbody></table>

단일 항체 표지를 이용한 막 단백질의 단분자 위치 현미경

Single-Molecule Localization Microscopy of Membrane Proteins using Single-Antibody Labeling

The plasma membrane defines the cell shape and serves as the interface that governs intercellular communication. Membrane proteins constitute a major ...

single-molecule-localization-microscopy-membrane-proteins-using

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리는 형광 광 활성화 국소화 현미경(FPALM)을 사용하여 세포 내에서 여러 유형의 형광 표지 분자를 동시에 이미지화하는 방법을 보여줍니다. 설명된 기술은 단일 세포 내에서 수십 나노미터의 정밀도로 수천 개에서 수십만 개의 개별 형광 표지 단백질의 국소화를 산출합니다.

Simultaneous Multicolor Imaging of Biological Structures with Fluorescence Photoactivation Localization Microscopy(형광 광활성화 국소화 현미경을 사용한 생물학적 구조의 동시 다색 이미징)

이 프로토콜은 전반사 형광 현미경을 사용하여 살아있는 세포 표면의 단일 수용체를 시각화 및 추적하여 수용체 측면 이동성, 수용체 복합체의 크기를 분석하고 일시적인 수용체-수용체 상호 작용을 시각화하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 다른 막 단백질로 확장될 수 있습니다.

단일 분자 형광 현미경에 의한 수용체 역학의 고해상도 시공간 분석

단백질 기능화 평면 유리 지지 지질 이중층의 준비, 내 단백질 이동성 측정 및 단백질 밀도 측정이 여기에 나와 있습니다. 노이즈를 줄인 내부 전반사(Total Internal Reflection) 현미경을 구축하기 위한 로드맵이 요약되어 있으며, 이를 통해 높은 시공간 해상도로 단일 이중층 상주 형광 색소를 시각화할 수 있습니다.

평면에 단일 분자 형광 현미경은 이중층 지원

우리는 형광 표지 항체의 순차적 인 결합 및 용출을 사용하여 단일 분자 정밀도로 이질적인 나노 구조 내의 다중 분자를 이미지화하는 방법을 시연합니다.

madSTORM을 이용한 T 세포의 고해상도 이미징

여기, 우리 살아있는 세포의 세포에 단일 막 단백질의 다 색 지역화에 대 한 프로토콜을 제시. Fluorophores 연결할 자체 라벨 단백질 사용 됩니다. 단백질, 세포 기관이 동일한의 다른 막 구획에 있는 ~ 18의 정밀도로 지역화할 수 nm.

살아있는 포유류 세포의 세포에서 단일 막 단백질의 다 색 지역화 현미경

선물이 단일 레이블이 없는 단백질의 실시간 광학 탐지에 대 한 프로토콜으로 그들은 살아있는 세포에서 분 비 됩니다. 이 간섭 산란 (iSCAT) 현미경 검사 법, 다양 한 다른 생물 학적 시스템 및 구성에 적용 될 수 있는 기반으로 합니다.

레이블 무료 이미징의 단일 단백질 분 비 iSCAT 현미경 검사 법을 통해 살아있는 세포에서

여기, 선물이 단일 분자 수준에서 복잡 한 단백질 견본에서 각 단백질 종에 대 한 라벨 동질성을 평가 하는 프로토콜.

단일 분자 수준에서 동질성을 라벨의 프로테옴 와이드 정량화

3D 단일 분자 국소화 현미경 검사법은 살아있는 세균 세포에서 형광표지된 단백질의 공간 위치 및 운동 궤적을 조사하는 데 사용됩니다. 본원에 기재된 실험 및 데이터 분석 프로토콜은 풀화된 단일 분자 궤적에 기초하여 세포성 단백질의 널리 퍼진 확산 거동을 결정한다.

단일 분자 추적 현미경 검사법 - 세포화 분자의 확산 상태를 결정하는 도구

이 프로토콜은 분자 질량의 동시 조사 및 지질 막과 상호 작용하는 거대 분자의 확산 거동을 가능하게하는 iSCAT 기반 이미지 처리 및 단일 입자 추적 접근법을 설명합니다. 샘플 준비, 질량 대비 변환, 영화 수집 및 사후 처리에 대한 단계별 지침이 잠재적 인 함정을 방지하기위한 지침과 함께 제공됩니다.

막과 관련된 거대분자 역학을 특성화하기 위한 질량 민감성 입자 추적

여기에서는 단일 분자 전반사 형광(smTIRF) 현미경을 사용하여 인공 군집 지질 막에서 단일 분자의 결합, 이동성 및 조립을 수행하고 분석하는 프로토콜이 제시됩니다.

단일 분자 확산 및 폴리머가 밀집된 지질 막에서의 조립

이 글은 고체 지지 지질 이중층에서 단일 단백질 추적용 샘플을 만드는 방법에 대해 상세히 설명합니다. 또한 단일 분자 감도와 빠른 프레임 속도를 가진 단순한 형광 현미경을 설명해 줍니다. 마지막으로, 단일 단백질 궤적을 추출하는 절차를 개괄합니다.

형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적

학습하세요 단일 항체 표지를 이용한 단분자 위치 현미경으로 T 세포 막 단백질의 나노스케일 항원-항체 상호작용을 시각화하는 방법을. 이 기술은 치료용 항체 연구에 중요한 세포 내 환경에서 직접 관찰을 가능하게 합니다.

단일 항체 표지를 이용한 막 단백질의 단분자 위치 현미경

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