Name: 효모 전체 세포의 미토콘드리아 호흡 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 배우세요 효모 전체 세포의 미토콘드리아 호흡 정량화 기법을 통해 세포 생체에너지학을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 폴리페놀의 생체에너지학적 메커니즘을 규명하는 데 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>Measuring Yeast Mitochondrial Respiration while Maintaining Cellular Context(세포 맥락을 유지하는 동안 효모 미토콘드리아 호흡 측정)

<ol><li>Jang, D. H., Seeger, S. C., Grady, M. E., Shofer, F. S., Eckmann, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+and+respiration+within+cells+with+increased+open+pore+cytoskeletal+meshes%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics and respiration within cells with increased open pore cytoskeletal meshes.</a> Biol Open. 6 (12), 1831-1839 (2017).</li>
<li>Duvezin-Caubet, S., Caron, M., Giraud, M. F., Velours, J., di Rago, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+rotor+components+of+yeast+mitochondrial+ATP+synthase+are+mechanically+coupled+by+subunit+delta%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The two rotor components of yeast mitochondrial ATP synthase are mechanically coupled by subunit delta.</a> Proc Natl Acad Sci. 100 (23), 13235-13240 (2003).</li>
<li>Vakifahmetoglu-Norberg, H., Ouchida, A. T., Norberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondria+in+metabolism+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Comm%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondria in metabolism and cell death.</a> Biochem Biophys Res Comm. 482 (3), 426-431 (2017).</li>
<li>Matus-Ortega, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+complexes+containing+the+internal+alternative+NADH+dehydrogenase+%28Ndi1%29+in+mitochondria+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">New complexes containing the internal alternative NADH dehydrogenase (Ndi1) in mitochondria of Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 32 (10), 629-641 (2015).</li>
<li>Avéret, N., Jobin, M. L., Devin, A., Rigoulet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proton+pumping+complex+I+increases+growth+yield+in+Candida+utilis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys%22%5BJournal%5D)">Proton pumping complex I increases growth yield in Candida utilis.</a> Biochim Biophys. 1847 (10), 1320-1326 (2015).</li>
<li>Schägger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+chain+supercomplexes%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+Life%22%5BJournal%5D)">Respiratory chain supercomplexes.</a> IUBMB Life. 52 (3-5), 119-128 (2001).</li>
<li>Lasserre, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+as+a+system+for+modeling+mitochondrial+disease+mechanisms+and+discovering+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Yeast as a system for modeling mitochondrial disease mechanisms and discovering therapies.</a> Dis Model Mech. 8 (6), 509-526 (2015).</li>
<li>Turina, P., Samoray, D., Gräber, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H%2B%2FATP+ratio+of+proton+transport-coupled+ATP+synthesis+and+hydrolysis+catalysed+by+CF0F1-liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">H+/ATP ratio of proton transport-coupled ATP synthesis and hydrolysis catalysed by CF0F1-liposomes.</a> EMBO J. 22 (3), 418-426 (2003).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+energy+metabolism+in+cultured+cells%2C+including+human+pluripotent+stem+cells+and+differentiated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Prot%22%5BJournal%5D)">Measuring energy metabolism in cultured cells, including human pluripotent stem cells and differentiated cells.</a> Nat Prot. 7 (6), 1068-1085 (2012).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Javadov, S., Margreiter, R., Hagenbuchner, J., Ausserlechner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function%2C+structure%2C+and+intracellular+organization+in+situ+in+cardiomyocytes+and+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function, structure, and intracellular organization in situ in cardiomyocytes and skeletal muscles.</a> Int J Mol Sci. 23 (4), 2252(2022).</li>
<li>Divakaruni, A. S., Jastroch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+for+the+analysis%2C+standardization+and+interpretation+of+oxygen+consumption+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Metab%22%5BJournal%5D)">A practical guide for the analysis, standardization and interpretation of oxygen consumption measurements.</a> Nat Metab. 4 (8), 978-994 (2022).</li>
<li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochem J. 435 (2), 297-312 (2011).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+intracellular+rates+of+glycolytic+and+oxidative+ATP+production+and+consumption+using+extracellular+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantifying intracellular rates of glycolytic and oxidative ATP production and consumption using extracellular flux measurements.</a> J Biol Chem. 292 (17), 7189-7207 (2017).</li>
<li>Rosenfeld, E., Beauvoit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+non-respiratory+pathways+in+the+utilization+of+molecular+oxygen+by+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">Role of the non-respiratory pathways in the utilization of molecular oxygen by Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 20 (13), 1115-1144 (2003).</li>
<li>Granados-Arvizu, J. A., Canizal-García, M., Madrigal-Pérez, L. A., González-Hernández, J. C., Regalado-González, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+alternative+respiration+system+of+Scheffersomyces+stipitis+and+effect+on+glucose+or+xylose+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Yeast+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of alternative respiration system of Scheffersomyces stipitis and effect on glucose or xylose fermentation.</a> FEMS Yeast Res. 21 (2), foab005(2021).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Snf1p%2FHxk2p%2FMig1p+pathway+regulates+hexose+transporters+transcript+levels%2C+affecting+the+exponential+growth+and+mitochondrial+respiration+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Genet+Biol%22%5BJournal%5D)">Snf1p/Hxk2p/Mig1p pathway regulates hexose transporters transcript levels, affecting the exponential growth and mitochondrial respiration of Saccharomyces cerevisiae.</a> Fungal Genet Biol. 161, 103701(2022).</li>
<li>Maslanka, R., Zadrag-Tecza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+potential+of+yeast+cells+depends+on+overall+action+of+interconnected+changes+in+central+carbon+metabolism%2C+cellular+biosynthetic+capacity%2C+and+proteostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Reproductive potential of yeast cells depends on overall action of interconnected changes in central carbon metabolism, cellular biosynthetic capacity, and proteostasis.</a> Int J Mol Sci. 21 (19), 7313(2020).</li>
<li>Olivares-Marin, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+carbon+and+nitrogen+sources+depend+on+RIM15+and+determine+fermentative+or+respiratory+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Interactions between carbon and nitrogen sources depend on RIM15 and determine fermentative or respiratory growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 102 (10), 4535-4548 (2018).</li>
<li>Malecki, M., Kamrad, S., Ralser, M., Bähler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+respiration+is+required+to+provide+amino+acids+during+fermentative+proliferation+of+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial respiration is required to provide amino acids during fermentative proliferation of fission yeast.</a> EMBO Rep. 21 (11), e50845(2020).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxicity+of+quercetin+is+related+to+mitochondrial+respiration+impairment+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">Cytotoxicity of quercetin is related to mitochondrial respiration impairment in Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 39 (11-12), 617-628 (2022).</li>
<li>Hagman, A., Sall, T., Piskur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+yeast+short-term+Crabtree+effect+and+its+origin%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Analysis of the yeast short-term Crabtree effect and its origin.</a> FEBS J. 281 (21), 4805-4814 (2014).</li>
<li>Gancedo, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+carbon+catabolite+repression%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Mol+Biol+Rev%22%5BJournal%5D)">Yeast carbon catabolite repression.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 62 (2), 334-361 (1998).</li>
<li>Katzmann, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+an+ATP-binding+cassette+transporter-encoding+gene+%28YOR1%29+is+required+for+oligomycin+resistance+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of an ATP-binding cassette transporter-encoding gene (YOR1) is required for oligomycin resistance in Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Cell Biol. 15 (12), 6875-6883 (1995).</li>
<li>Madrigal-Perez, L. A., Nava, G. M., Gonzalez-Hernandez, J. C., Ramos-Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+increases+glycolytic+flux+in+Saccharomyces+cerevisiae+via+a+SNF1-dependet+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerr+Biomemb%22%5BJournal%5D)">Resveratrol increases glycolytic flux in Saccharomyces cerevisiae via a SNF1-dependet mechanism.</a> J Bioenerr Biomemb. 47 (4), 331-336 (2015).</li>
<li>Gueguen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+directly+binds+to+mitochondrial+complex+I+and+increases+oxidative+stress+in+brain+mitochondria+of+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Resveratrol directly binds to mitochondrial complex I and increases oxidative stress in brain mitochondria of aged mice.</a> PloS One. 10 (12), e0144290(2015).</li>
<li>Lagoa, R., Graziani, I., Lopez-Sanchez, C., Garcia-Martinez, V., Gutierrez-Merino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+I+and+cytochrome+c+are+molecular+targets+of+flavonoids+that+inhibit+hydrogen+peroxide+production+by+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Complex I and cytochrome c are molecular targets of flavonoids that inhibit hydrogen peroxide production by mitochondria.</a> Biochim Biophys Acta. 1807 (12), 1562-1572 (2011).</li>
<li>de Oliveira, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+and+the+mitochondria%3A+A+mechanistic+view%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Quercetin and the mitochondria: A mechanistic view.</a> Biotechnol Adv. 34 (5), 532-549 (2016).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., Madrigal-Perez, L. A., Regalado-Gonzalez, C. The multifaceted role of quercetin derived from its mitochondrial mechanism. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarrillo-Garmendia%2C+A+%22Mol+Cell+Biochem%22">Mol Cell Biochem</a>. , (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2- 테노일트리플루오로아세톤 (TTFA)</td><td>Merck</td><td>T27006</td><td>억제제 복합체 II</td></tr><tr><td>3-클로로페닐히드라존 카르보닐 시안화물 (CCCP)</td><td>Merck</td><td>C2759</td><td>미토콘드리아 호흡 해제기&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Absolut 에탄올</td><td>Merck</td><td>107017</td><td>퀘르세틴 용해용&nbsp;</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Merck</td><td>A1296</td><td>YPD 아가 준비</td></tr><tr><td>암모늄 황산염 과립 (NH4)2SO4</td><td>J.T. Baker</td><td>0792-05</td><td>SC 육수 준비</td></tr><tr><td>Antimycin A (AA)</td><td>Merck</td><td>A8674</td><td>억제제 복합체 III</td></tr><tr><td>aYSI5300A</td><td>----</td><td>----</td><td>Monitor&nbsp;</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Hermle</td><td>Z 206 A</td><td>세포 원심분리용</td></tr><tr><td>Clark-type 산소</td><td>----</td><td>----</td><td>전극&nbsp;</td></tr><tr><td>컴퓨터</td><td>----</td><td>----</td><td>데이터 수집용&nbsp;</td></tr><tr><td>디포타슘 포스페이트 K2HPO4</td><td>J.T. 베이커</td><td>3252-05</td><td>SC 육수 준비</td></tr><tr><td>포도당</td><td>머크</td><td>G7021</td><td>YPD 육수 준비</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>머크</td><td>G5516</td><td>기질 매체 보충제&nbsp;</td></tr><tr><td>젖산</td><td>Merck</td><td>L1250</td><td>기판 배지 보충제&nbsp;</td></tr><tr><td>Streptomyces diastatochromogenes</td><td>Merck</td><td>O4876</td>에서 유래한 올리고마이신은 <td>미토콘드리아 ATP 합성효소</td></tr><tr><td>오비탈 쉐이커</td><td>Thermo Fisher</td><td>SHKE6000</td><td>접종 배양 유리관 및 플라스크</td></tr>의 억제;<tr><td>카제인에서 추출한 펩톤, 효소 분해</td><td>Merck</td><td>82303</td><td>YPD 육수 준비</td></tr><tr><td>케르세틴&nbsp;</td><td>Merck</td><td>337951</td><td>미토콘드리아 호흡 감소를 위해</td></tr><tr><td>Uracil&nbsp;</td><td>Merck</td><td>U0750</td><td>SC 국물 준비</td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>Merck</td><td>Y1625</td><td>YPD 국물 준비</td></tr><tr><td>아미노산 및 황산 암모늄이없는 효모 질소 기반</td><td>Merck</td><td>Y1251</td><td>SC 국물 준비</td></tr><tr><td>효모 합성 드롭 아웃 매체 보충제 우라실이없는</td><td>Merck</td><td>Y1501</td><td>SC 국물 준비</td></tr></tbody></table>

효모 전체 세포의 미토콘드리아 호흡 정량화

Mitochondrial Respiration Quantification in Yeast Whole Cells

이 미토콘드리아 호흡 기법은 Scheffersomyces stipitis15 및 K. marxianus16과 같은 S. cerevisiae 이외의 효모 종에 사용할 수 있습니다. 그러나 대표적인 목적으로 S. cerevisiae의 결과만 제시합니다. S. cerevisiae는 낮은 포도당 농도 (0.8 mM 미만)에서 우세한 호흡기 대사를 나타낸다는 것은 잘 알려져 있습니다 17 , 18 . 따라서, S. cerevisiae의 호흡기 표현형을 확증하기 위해, 미토콘드리아 호흡을 자극 (0.5 % 포도당) 및 제한 (5 % 포도당) 위해 두 가지 포도당 농도로 성장시켰다18 , 19. 예상대로, 기저 호흡(산화성 기질), ATP 결합 호흡(올리고마이신) 및 최대 호흡 용량(CCCP)에서 얻은 결과는 S. cerevisiae의 특징적인 에너지 대사를 입증합니다(그림 2). 포도당 5%로 성장한 세포에서 얻은 값보다 포도당 0.5%로 성장한 세포에서 산소 소비량(기저 호흡, ATP 연계 호흡 및 최대 호흡 용량)이 더 높은 값을 관찰했습니다(그림 2).
또한 분석은 포도당, 글리세롤 및 L-젖산의 세 가지 기질을 사용했습니다. 다양한 기질을 사용하는 목적은 미토콘드리아 호흡 사슬의 다른 부분을 평가하는 것입니다. 이러한 조건에서 미토콘드리아 호흡은 호흡 사슬을 방해하는 치료가 추가되지 않았기 때문에 유의한 기질 의존적 변화를 보이지 않았습니다(그림 2).
우리는 케르세틴(quercetin)을 사용하여 미토콘드리아 호흡에 부정적인 영향을 미치는 화합물인 이 기술의 용량을 평가했다20. 얻은 데이터에 따르면 케르세틴은 0.5% 포도당이 보충된 배지에서 성장한 세포의 미토콘드리아 호흡을 유의하게 감소시켰습니다(그림 3). 반면, 5% 포도당이 보충된 배지에서 성장한 세포는 케르세틴으로부터 유의한 부정적인 영향을 나타내지 않았습니다(그림 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig01.jpg"> 
그림 1: 대표적인 산소 소비량 곡선. SC 배지에서 성장한 S. cerevisiae 세포에서 얻은 산소 소비량 곡선(0.5% 포도당). 색상은 기질, 언커플러 및 억제제 보충에서 얻은 다양한 기울기를 나타냅니다. 녹색: 기질은 포도당과 경사에 해당하는 기저 호흡을 활용했습니다. 파란색: 올리고마이신, ATP 합성효소 억제제, ATP 관련 호흡 측정에 사용되는 슬로프. 노란색: CCCP, 언커플러, 최대 호흡을 평가하는 데 사용되는 기울기. 회색 및 빨간색: 각각 억제제 복합체 II 및 III; 미토콘드리아에 의존하지 않는 산소 소비량을 결정하기 위해 사용되는 기울기. 약어 : CCCP = 3- 클로로 페닐 히드라 존 카르 보닐 시안화물; TTFA = 2- 테노일 트리 플루오로 아세톤; AA = antimycin A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig02.jpg"> 
그림 2: 0.5% 및 5% 포도당에서 성장한 S. cerevisiae 세포의 산소 소비량 분석. 미토콘드리아 호흡은 0.5% 및 5% 포도당이 보충된 SC에서 성장한 S. cerevisiae 세포에서 기저 호흡, 최대 호흡 용량 및 ATP 결합 호흡에서 측정된 산소 소비량을 통해 평가됩니다. 전자 전달 사슬에 대한 특정 영향을 평가하기 위해 포도당(NADH 탈수소효소), 글리세롤(유비퀴논 풀) 및 L-젖산염(시토크롬 c)의 세 가지 기질을 사용했습니다. (A) 포도당, 글리세롤 및 L-젖산을 기질로 하는 5% 및 0.5% 포도당의 기저 호흡; (B) 포도당, 글리세롤 및 L-젖산을 기질로 하는 5% 및 0.5% 포도당에서 최대 호흡; (C) 포도당, 글리세롤 및 L-젖산을 기질로 하는 5% 및 0.5% 포도당에서 ATP 결합 호흡. 결과는 3개의 독립적인 실험에서 평균 ± S.D.로 표시되며, 각 실험은 두 번의 기술적 반복을 갖습니다. 통계 분석을 위해 일원 분산 분석에 이어 Tukey 검정(p ≤ 0.05; 다른 문자: 유의한 차이, 동일한 문자: 유의한 차이 없음)을 수행합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig03_.jpg"> 
그림 3: 케르세틴은 성장한 S. cerevisiae 세포에서 낮은 포도당 농도에서 미토콘드리아 호흡을 제한했습니다. 산소 소비량 측정은 SC 배지(0.5% 포도당) 케르세틴 보충(100μM)에서 성장한 S. cerevisiae 세포에서 기저 호흡, 최대 호흡 용량 및 ATP 관련 호흡에서 수행되었습니다. 케르세틴 용액을 용해시키기 위해 에탄올을 사용했습니다. 결과는 3개의 독립적인 실험에서 평균 ± S.D.로 표시되며, 각 실험은 두 번의 기술적 반복을 갖습니다. 통계 분석은 학생 t-test 쌍(*, ** p ≤ 0.05)을 사용하여 수행되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig03_large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig04_.jpg"> 
그림 4: 케르세틴은 S. cerevisiae의 높은 포도당 농도에서 미토콘드리아 호흡에 영향을 미치지 않습니다. 산소 소비량은 SC 배지(5% 포도당) 케르세틴 보충(100μM)에서 성장한 S. cerevisiae 세포에서 기저 호흡, 최대 호흡 용량 및 ATP 관련 호흡에서 측정되었습니다. 에탄올은 퀘르세틴 용액을 용해시키는 데 사용됩니다. 결과는 각각 두 번의 기술적 반복이 있는 세 가지 독립적인 실험에서 평균 ± S.D.를 보여줍니다. 통계 분석은 학생 t-검정 쌍을 사용하여 수행되었습니다(p ≤ 0.05; ns: 유의하지 않음). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig04_large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Metabolism is mainly coordinated by cellular energy availability and environmental conditions. Assays for knowing how cells adapt energetic metabolism to ...

mitochondrial-respiration-quantification-in-yeast-whole-cells

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

우리는 살아있는 효모 세포에서 세포 내 해상도에서 미토콘드리아의 산화 환원 상태와 ATP 수준을 모니터링하기 위해, GFP를 기반으로하는 두 개의 비례, 유전자 인코딩 바이오 센서의 사용을 설명합니다.

생활 효모 세포에서 미토콘드리아 산화 환원 상태와 ATP를 측정 비례 바이오 센서

광근의 lateralis의 조직 검사, 정제 미토콘드리아의 준비, 호흡계 프로파일 링하는 방법이 설명되어 있습니다. 작은 부피의 근육 사용은 임상 연구 애플리케이션이 기술에 적합하다.

경피적 바늘 생검에 의해 획득 골격근 조직에서 고립 된 미토콘드리아의 준비 및 호흡계 평가

제시된 방법은 최소한의 마우스 골격근에서 분리된 미토콘드리아를 사용하여 마이크로플레이트 기반 호흡 측정 분석 모음의 수행을 위한 단계별 지침을 제공합니다. 이러한 분석은 일반적으로 사용되는 동물 모델에서 미토콘드리아 산소 소비량의 기계론적 변화/적응을 측정할 수 있습니다.

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아 격리 사용

고해상도 호흡율은 미토콘드리아의 산소 소비를 결정하는 데 사용된다. 이것은 미토콘드리아 호흡 사슬 복합체 '(I-IV) 호흡 속도, 최대 미토콘드리아 전자 전달계 용량 및 미토콘드리아 외막 무결성을 결정하기위한 간단한 기술이다.

고해상도 호흡율은 투과성이 그대로 세포에서 미토콘드리아 기능을 평가하는

베이커의 효모 미토콘드리아 게놈은 8개의 폴리펩티드를 인코딩합니다. 현재 프로토콜의 목표는 모든 프로토콜에 레이블을 지정한 다음 별도의 대역으로 시각화하는 것입니다.

베이커효모사카로미세스 세레비시아에 미토콘드리아 게놈 발현 제품의 라벨링 및 시각화

이 작품에서는, 우리는 마이크로 플레이트 기지를 둔 호흡측정과 조합하여 재조합 퍼프렌고리신 O를 사용하여 미토콘드리아 호흡 기질 플럭스를 시험하기 위하여 수정된 프로토콜을 기술합니다. 이 프로토콜을 통해 메트포르민이 두 개의 다른 종양 세포주의 미토콘드리아 호흡에 어떻게 영향을 미치는지 보여줍니다.

재조합 퍼프렌고리신 O-퍼메아빌화 세포에서 미토콘드리아 기질 플럭스 측정

고분해능 호흡계를 사용하여 산화 인산화를 평가하는 것은 미토콘드리아와 세포 에너지 대사의 기능 분석의 필수적인 부분이되었습니다. 여기에서는 챔버 및 마이크로 플레이트 기반 고해상도 호흡계를 사용하여 세포 에너지 대사를 분석하기위한 프로토콜을 제시하고 각 장치의 주요 이점에 대해 논의합니다.

챔버 및 플레이트 기반 호흡계를 사용하여 세포 및 조직의 생물 에너지를 평가하기위한 고해상도 호흡 측정법

여기에서는 마우스 골격근으로부터의 미토콘드리아를 분리하는 상세한 방법과 마이크로플레이트 기반 호흡 측정법을 사용하여 산소 소모율(OCR)에 의한 호흡의 후속 분석을 설명한다. 이 파이프 라인은 미토콘드리아 대사에 대한 여러 환경 또는 유전 적 개입의 효과를 연구하는 데 적용될 수 있습니다.

호흡 측정을 위한 마우스 골격근으로부터 미토콘드리아의 분리

여기에서는 인간 또는 생쥐 근육의 신선한 투과화된 골격근 섬유에서 미토콘드리아 산화 인산화를 측정하는 포괄적인 방법을 설명합니다. 이 방법을 사용하면 미토콘드리아 호흡을 실시간으로 정량화하고 연료 선호도 및 대사 유연성을 평가하는 동시에 기존 미토콘드리아 네트워크와 멤브레인 무결성을 유지할 수 있습니다.

고분해능 호흡 측정법을 통한 인간 및 생쥐 골격근 섬유의 미토콘드리아 호흡 측정

이 논문은 지질-근위 환경에서 다양한 파트너 인자와 함께 in vitro에서 일체형 막 단백질의 상호 작용 및 어셈블리를 평가하는 방법을 설명합니다.

비계 리포좀을 사용하여 근위 지질 단백질 - 단백질 상호 작용을 재구성 체외

배우세요 효모 전체 세포의 미토콘드리아 호흡 정량화 기법을 통해 세포 생체에너지학을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 폴리페놀의 생체에너지학적 메커니즘을 규명하는 데 활용됩니다.

효모 전체 세포의 미토콘드리아 호흡 정량화

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