Name: 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에서 운동성 표현형을 관찰하기 위한 고처리량 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 배우세요 Pseudomonas aeruginosa 운동성 유전자를 고처리량으로 분석하는 방법을. 전체 게놈 변이체 라이브러리를 활용하여 군집 및 트위칭 행동을 정량화하고, 생물막 형성과 병원성 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Burrows, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+twitching+motility%3A+type+IV+pili+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa twitching motility: type IV pili in action.</a> Annu Rev Microbiol. 66, 493-520 (2012).</li>
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<li>Rasmussen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screening+assay+for+inhibitors+of+bacterial+motility+identifies+a+novel+inhibitor+of+the+Na%2B-driven+flagellar+motor+and+virulence+gene+expression+in+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screening assay for inhibitors of bacterial motility identifies a novel inhibitor of the Na+-driven flagellar motor and virulence gene expression in Vibrio cholerae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (9), 4134-4143 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96개의 웰플레이트 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>코닝&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>3701 & nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>아가&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>BP1423-2&nbsp;</td><td>최종 농도는 군집 운동성에 대해 각각 0.5%, 운동성 운동성은 1%입니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>카사미노산&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>223050&nbsp;</td><td>물 20% 스톡을 준비하세요. 필터는 0.22 & mu로 멸균합니다; m 여과후 4 & 도C로 저장. 최종 농도는 M9 최소 매질에서 0.5%로 설정;</td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛&nbsp;</td><td>바이오 베이시널&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>CB0331</td><td>1% 용액을 물에 준비하세요.</td></tr><tr><td>D-포도당&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>바이오 베이시널&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>GB0219&nbsp;</td><td>20% 스톡(1.1 M)을 물에 담근 후 오토클레이빙으로 멸균하세요. 최종 농도는 M9 최소 매질에서 0.2% 및 nbsp;</td></tr><tr><td>필트로푸르 S 0.2 & nbsp;</td><td>사르스테트&nbsp;</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신 설페이트&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>바이오 베이시널&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>GB0217&nbsp;</td><td>30mg/ml 육수를 물에 담아 준비하세요. 필터는 0.22 & mu로 멸균합니다; 4 & 도(4 & 도)로 필터 및 저장 C & ndash; 최종 농도는 플레이트 15 및 마이크로; g/mL.. 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;</td></tr><tr><td>예방접종 루프와 주사기...</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>22363597</td><td></td></tr><tr><td>M9 최소 염, 5X&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>248510</td><td>1M 스톡을 물에 담근 후 오토클레이브로 멸균하세요. 최종 농도는 M9 최소 매질에 1 mM. 그리고 nbsp;</td></tr><tr><td>황산마그네슘(MgSO4)과 nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>M63-500</td><td>그리고 nbsp; 1M MgSO4 스톡을 물에 준비하세요. 필터는 0.22 & mu로 멸균합니다; 여과해서 실온에 보관하세요. 최종 농도&nbsp;</td></tr><tr><td>PA14 트랜스포존 삽입 돌연변이 라이브러리 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td></td><td>Liberati 외, 2006 (참고문헌 29 참조)</td><td>전체 컬렉션을 위한 59장의 96웰 판. 각 웰에는 25% 글리세롤을 가진 단일 돌연변이체가 LB에 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>페트리 접시 92x16mm&nbsp;</td><td>사르스테트&nbsp;</td><td>82.1473.001</td><td></td></tr><tr><td>페노부스+&nbsp;</td><td>싱어 악기 &nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/solution/phenobooth/specification/&nbsp;</td><td>분말 11.3g을 정제수 200mL에 녹입니다. 오토클레이브를 121도에서 사용하세요; C는 15분간 그리고 nbsp;</td></tr><tr><td>플라스틱 주사기 10 mL &nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>14955459</td><td></td></tr><tr><td>로터+&nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>싱어 악기 &nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/resource/rotor-had/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>짧은 핀 리패드 384 밀도 &nbsp;</td><td>싱어 악기 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>REP-004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>짧은 핀 리패드 96 밀도 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>싱어 악기 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>REP-002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨(NaCl)과 nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>BP358-212&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>스프링 장착 96핀 복제기</td><td>EnzyScreen&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>CR1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>수술용 블레이드 스테인리스 번호 25&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>08-918-5F</td><td></td></tr><tr><td>트립톤&nbsp;</td><td>옥소이드&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>LP0042B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>유니웰 플레이트</td><td>싱어 악기 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>플러스플레이트: PLU-003 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>판 크기: 54 & 배; 34 & times; 38cm - 내부 벽이 없어 내부 치수가 더 큽니다.</td></tr><tr><td>유니웰 플레이트</td><td>VWR</td><td>단일 웰 조직 배양 플레이트: 75780-348</td><td>플러스플레이트와 크기가 같아요.</td></tr><tr><td>효모 추출물&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>248510&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

녹농균(pseudomonas aeruginosa)에서 운동성 표현형을 관찰하기 위한 고처리량 방법

High-throughput Method for Observing Motility Phenotypes in Pseudomonas aeruginosa

녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에서 운동성 표현형을 관찰하기 위한 고처리량 방법

Motility behaviors often play a significant role in the ability of a bacterium to exploit the resources available in its environment. This is particularly ...

high-throughput-method-for-observing-motility-phenotypes-pseudomonas

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 프로토콜은 chemoeffectors의 안정적인 농도 기울기에 박테리아 chemotaxis 조사를위한 microfluidic 장치의 개발을 설명합니다.

안정적인 농도 기울기에 박테리아 Chemotaxis을 Quantifying위한 Microfluidic 장치

출처: Morales-Soto, N. et. al., 박테리아 표면 운동성 분석의 준비, 이미징 및 정량화. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 연질 한천의 표면 운동성을 관찰하기 위해 녹색 형광 단백질을 발현하는 박테리아를 사용하는 군집 분석을 보여줍니다. 타임랩스 이미징은 조정된 팽창과 덩굴손 형성을 포착하여 박테리아 표면 운동성을 강조합니다.

박테리아 표면 운동성을 시각화하기 위한 군집 분석

출처: Chu, W. 및 Zhuang, X. 색상 반응을 기반으로 박테리아 운동성 시각화. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 운동성 균주와 비운동성 균주를 시각적으로 구별하여 박테리아 운동성을 평가하기 위한 산화환원 염료 기반 반고체 한천 분석을 보여줍니다.

산화환원 염료 보충 반고체 배지를 사용한 박테리아 운동성 시각화

출처: Scheidweiler, D. 외. 유체 장치와 현미경 및 유동 세포분석을 결합하여 공간적 규모를 넘어 다공성 배지 내 미생물 수송을 연구합니다. J. Vis. 경험 (2020).이 영상은 무작위로 배열된 기둥들로 구성된 다공성 매트릭스를 통해 박테리아의 운동성을 정량화하기 위해 마이크로플루이딕 장치를 사용하는 방법을 시연합니다. 형광 표지된 박테리아를 장치에 투입하고, 다공성 매트릭스를 통과해 관찰 채널로 이동하는 동안 현미경으로 영상화한 후 분석하여 돌파 곡선(BTC)을 생성합니다.

마이크로플루이딕 장치를 이용한 박테리아 운동성 평가

군집 운동성은 물리적, 환경적 요인의 영향을 받습니다. 우리는 군집 분석 준비 및 데이터 수집과 일반적으로 관련된 문제를 우회하기 위한 2단계 프로토콜과 지침을 설명합니다. 현재의 분석 기술로는 제공되지 않는 떼 행동에 대한 자세한 정보를 얻기 위해 거시적 이미징 기술이 사용됩니다.

세균 표면 운동성 분석의 준비, 이미징 및 정량화

본 연구에서는 나노 미세 유체 흐름 챔버는 시각화 기능 Xylella fastidiosa, 포도 나무에 피어스의 질병을 일으키는 세균의 꿈틀 운동의 특성을 사용 하였다.

의 역할의 꿈틀 운동성의 시각화 및 특성<em&gt; PilG</em&gt;에서<em&gt; Xylella의 fastidiosa</em

이 문서에서는 성공적으로 항균 약물 발견 및 화합물 테스트를위한 새로운 강력한 도구를 제공, 녹농균에 순환 디 GMP의 세포 수준을 조작 할 수있는 잠재적 능력을 작은 분자의 큰 라이브러리를 스크리닝하기 위해 설립 된 높은 처리량 분석에 대해 설명합니다.

변조 C 디 GMP가에서 시그널링 그건 작은 분자를 스크리닝하기위한 높은 처리량 설정 구축<em&gt; 녹농균</em

많은 박테리아는 자신의 환경을 탐색하고 개별적으로 및 집단으로 모두 유리한 환경을 식민지화하기 위해 플래그텔라 구동 운동성을 사용합니다. 여기에 수영과 모성에 기여하는 구성 요소 / 경로를 식별하기 위해 선택 도구로 운동성을 활용하는 세 가지 확립 된 방법의 사용이 입증된다.

에슈리치아 대장균에서 모토렐라 구동 운동성 조사

여기에서, 우리는 글리코실트랜스퍼라제를 함유하는 특정 글리코실트랜스퍼라제 또는 영역에서 에어로모나 스의 널 돌연변이체의 구축, 글리칸의 생합성에서 그들의 암호화된 효소의 관여 및 기능을 확립하기 위해 수행된 운동성 분석, 및 편모 정제, 뿐만 아니라 박테리아 병인에서 이러한 글리칸의 역할을 기술한다.

박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 Null 돌연변이체의 생성

여기에서는 색상 반응을 기반으로 박테리아 운동성을 감지하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법의 주요 장점은 평가하기 쉽고 정확하며 특수 장비가 필요하지 않다는 것입니다.

색상 반응을 기반으로 한 박테리아 운동성 시각화

이 원고에서는 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ) 및 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)의 항생제 생존을 평가하고, 플라스미드를 녹농균(P. aeruginosa) 및 S. 아우레우스(S. aureus )로 변환하여 리포터 균주를 생성하고, 타임랩스 형광 현미경 검사로 지속형(persister)와 같은 표현형 변이를 시각화하기 위한 포괄적인 프로토콜을 제공합니다.

Time-Lapse Epifluorescence Microscopy Imaging of Pseudomonas aeruginosa 및 Staphylococcus aureus 이종 표현형

배우세요 Pseudomonas aeruginosa 운동성 유전자를 고처리량으로 분석하는 방법을. 전체 게놈 변이체 라이브러리를 활용하여 군집 및 트위칭 행동을 정량화하고, 생물막 형성과 병원성 연구에 활용할 수 있습니다.

녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에서 운동성 표현형을 관찰하기 위한 고처리량 방법

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