인간 신장 동맥 가지의 다단계 미세해부 및 기능-구조 프로파일링

우리의 연구는 인간의 신장 동맥 가지를 분리하고 기능적으로 평가하여 혈관 기능 장애의 메커니즘을 밝히고 표적 치료를 안내하는 표준화된 방법을 확립하는 것을 목표로 합니다. 이전 연구는 동물 모델 또는 간접 이미징에 의존했으며, 여기서 와이어 근 조영술은 시험관 내에서 인간의 신장 동맥 기능을 직접 반영합니다. 우리의 방법은 정밀한 인간 특이적 혈관 분석을 가능하게 하여 종의 한계를 극복하고 중개 약물 개발을 개선합니다.

시작하려면 조직 생존력과 구조적 무결성을 유지하기 위해 운송 중에 신장 조직이 액체에 완전히 잠겨 있는지 확인하십시오. 신문 위치를 찾고 신우와 측면 볼록 경계를 모두 통과하도록 절단을 정렬하여 관상면을 육안으로 식별합니다. 멸균 메스를 사용하여 이 관상면을 따라 신장을 양분하여 대칭적인 두 개의 반쪽을 만들고 신장 피라미드 및 기둥과 같은 내부 구조를 노출시킵니다.

실체 현미경으로 미세해부 가위와 겸자를 사용하여 10cm 높이의 검은색 바닥 배양 접시에서 엽간, 아치형 및 소엽간 동맥을 꼼꼼하게 분리합니다. 그런 다음 동일한 10cm 검은색 바닥 배양 접시에서 해부된 동맥에서 주변 조직과 지방을 부드럽게 제거하여 철저히 청소합니다. 미세해부 가위를 사용하여 혈관 기능 연구를 위해 세척된 동맥을 약 2mm 길이의 고리로 절편합니다.

첫 번째 가이드 와이어를 접시의 동맥 링에 조심스럽게 삽입합니다. 가이드 와이어의 한쪽을 90도 각도로 구부리고 와이어가 있는 동맥 링을 챔버로 옮깁니다. 동맥 링을 샘플 홀더에 고정하기 전에 혈관 길이를 기록하십시오.

두 홀더 사이에 링을 놓고 마이크로미터 눈금을 읽는데, 여기서 하나의 눈금 구분은 10마이크로미터와 같습니다. 홀더가 서로 닿았을 때 측정된 초기 스케일 값을 빼서 동맥 링의 길이와 너비를 계산합니다. 그런 다음 기기에서 제공하는 나사를 사용하여 동맥 링을 조개형 샘플 홀더에 고정하고 시계 방향으로 조입니다.

그런 다음 동맥 링을 통해 두 번째 가이드 와이어를 끼웁니다. 양쪽 끝의 고정 나사 주위에 와이어를 시계 방향으로 감아 샘플 홀더 표면에 단단히 고정합니다. DMT 메뉴에서 정규화 설정을 선택하고 접안렌즈 보정을 분할당 1밀리미터, 목표 압력을 13.3킬로파스칼, IC1/IC100을 0.9, 온라인 평균 시간을 3초, 지연 시간을 60초로 설정합니다.

표적 동맥에 해당하는 채널을 선택하고 DMT 메뉴에서 정규화 화면을 엽니다. 적절한 필드에 a1이 0이고 a2가 측정된 혈관 길이(밀리미터)와 같으므로 조직 종점을 입력합니다. 와이어 직경을 40마이크로미터로 입력하고 눈금에서 마이크로미터 판독값을 입력합니다.

포인트 추가를 클릭하여 데이터를 저장합니다. 이제 패시브 스트레칭을 적용하고 3분 동안 기다리십시오. 새 마이크로미터 판독값을 다음 포인트로 입력하고 포인트 추가를 클릭합니다.

60칼륨 이온 용액 5밀리리터를 챔버에 첨가하여 칼륨 매개 혈관 수축을 유도합니다. 60칼륨 이온 용액을 씻어내려면 5밀리리터의 크렙스 용액을 세 번 첨가하십시오. 페닐에프린 유발, 농도 의존적 수축을 평가하려면 10에서 음의 9승에서 10의 음의 4대금까지 반 로그 증분으로 누적 페닐에프린을 적용합니다.

추가 약물 테스트를 위해 장력이 기준선으로 돌아가고 최소 10분 동안 안정적으로 유지될 때까지 따뜻한 5밀리리터의 크렙스 용액으로 챔버를 최소 5회 세척합니다. 엽간 동맥은 신장 수질에서 성공적으로 해부되었으며, 구조적 무결성을 보존하기 위해 조심스럽게 제거해야 하는 두꺼운 혈관벽과 주변 지방 조직을 보여주었습니다. 아치형 동맥은 피질 수질 접합부에서 분리되어 더 얇은 혈관벽과 아치형 궤적을 나타냅니다.

소엽간 동맥은 매우 얇은 벽을 가진 신장 피질을 통해 선형으로 흐르고 피질 조직과 밀접하게 통합되는 것으로 확인되었습니다. 조직학적 분석 결과 엽간 동맥은 뚜렷한 외막이 있는 혈관벽이 가장 두친 반면, 아치형 동맥과 소엽간 동맥은 벽이 점진적으로 얇아지고 평활근층이 적은 것으로 나타났습니다. 동맥 정상화에는 반복적인 기계적 스트레칭과 칼륨 유도 자극이 포함되어 샘플 전반에 걸쳐 안정적인 기본 장력 조건을 설정했습니다.

페닐에프린의 누적 첨가는 10에서 음의 9승에서 음의 4몰 농도의 거듭제곱으로 10의 거듭제곱으로 용량 의존적 방식으로 동맥 고리에서 점진적으로 더 강한 수축을 유도했습니다. 페닐에프린 사전 수축 동맥에서 아세틸콜린의 농도를 10에서 음의 8승에서 음의 5몰의 3배 10으로 증가시키면 농도 의존적 혈관 확장이 생성되었습니다.