Name: 박테리아, 장 및 면역 세포의 독성 및 면역 조절 요법을 위한 비동기 시스템 개발을 위한 3D 플립웰 엔지니어링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: 배우세요 장 점막 환경을 모방한 3D 공배양 시스템을 이용하여 장내 세균, 상피 세포 및 대식세포 간 상호작용을 연구하고 약물 반응을 평가하는 방법을. 이 시스템은 면역 조절 요법 개발에 활용됩니다.

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<ol><li>Goldsmith, J. R., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+diet+on+intestinal+microbiota+metabolism%3A+downstream+impacts+on+host+immune+function+and+health%2C+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The role of diet on intestinal microbiota metabolism: downstream impacts on host immune function and health, and therapeutic implications.</a> J Gastroenterol. 49 (5), 785-798 (2014).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.4% PFA (시약 및 용액 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10ml 혈청학적 피펫</td><td>코 닝</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>12 웰 TC 플레이트, 그리고 nbsp; 코스타</td><td>코 닝</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>15ml 원뿔 튜브, 스펙트라튜브</td><td>알칼리 사이언티픽</td><td>C2715</td><td></td></tr><tr><td>200 & 마이크로; l 팁&nbsp;</td><td>USA 사이언티픽</td><td>1111-1700</td><td></td></tr><tr><td>24웰 인서트 - 24웰 플레이트, PET 0.4 및 마이크로용 배양 인서트; m&nbsp;</td><td>브랜드테크 사이언티브</td><td>782710</td><td></td></tr><tr><td>3D 플립웰은 미리 만들어졌고, UV 멸균 처리되었으며;</td><td>실험실에서 만들어</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% PFA (시약 및 용액 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM 세피아프테린 스톡 (SEP, 시약 및 용액 조리법 참조)</td><td>경력 허난화학 주식회사</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>50ml 원뿔관</td><td>그레이너 바이오-원</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>5ml 혈청학적 피펫</td><td>코 닝</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>70-95% 에탄올(에틸 알코올)</td><td>디콘 랩스</td><td>04-355-151</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>피셔 사이언티브</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>동물 먹이 주사기, 20게이지 1.5인치 길이, 단회용&nbsp;</td><td>피셔 사이언티브</td><td>01-208-87</td><td></td></tr><tr><td>항체 희석 버퍼 (시약 및 용액의 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>아토플루어 세포 챔버&nbsp;</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>A7816</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브 테이프</td><td>피셔 사이언티브</td><td>15-901-111</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤 스톡 내 바실루스 서브틸리스 wt (3A1T) 균주</td><td>박균 유전 자원 센터 (https:// bgsc. org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>바이오그립 핑크 니트릴 파우더 프리 라텍스 프리 장갑</td><td>최고 품질 제조</td><td>P2810</td><td></td></tr><tr><td>차단 버퍼 (시약과 용액 - PBS의 10% 정상 염소 혈청 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>차단 버퍼 (Reagents and Solutions의 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>브라이트필드 현미경(니콘 또는 동등) 이클립스 Ts2</td><td>니콘</td><td>TS2</td><td></td></tr><tr><td>카코-2 세포</td><td>ATCC</td><td>HTB-37</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 인큐베이터, 37&deg; C, 5% CO2 (Eppendorf CellXpert)</td><td>에펜도르프</td><td>6734010015</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 (에펜도르프, 원심분리기 5804/5804 R 또는 동등한 제품</td><td>에펜도르프</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>원심분리관 50ml 스펙트러튜브</td><td>알칼리 사이언티픽</td><td>C2750</td><td></td></tr><tr><td>12웰 플레이트, PET, 0.4 및 마이크로용 배양 인서트; M, 불임</td><td>브랜드텍 사이언티픽, BRAND 인서트 2in1, 바이오 인증</td><td>782730</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 벡타쉴드 장착 매체</td><td>벡터 연구소</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>깊은 페트리 접시 바닥, 100 x 25mm 딥 폴리스티렌 쌓을 수 있는 페트리 접시, 멸균 &nbsp;</td><td>USA 사이언티픽</td><td>8609-0625</td><td></td></tr><tr><td>드럼몬드 피펫 에이드 XP</td><td>드럼몬드와 nbsp;</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>50ml 원뿔 튜브용 스윙 버킷 로터가 장착된 Eppendorf 5804 원심분리기</td><td>에펜도르프</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>핀셋, 스테인리스 스틸, 멸균 고용멸균, 2세트</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>겸자, 스테인리스 스틸, 멸균 고용멸균, 2세트, 검체 겸자</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>유리병 500ml</td><td>코닝&nbsp;</td><td>4980-500</td><td></td></tr><tr><td>헤마세포계 (커버 슬립이 있는 노이바우어)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>50-312-90</td><td></td></tr><tr><td>HT-29-MTX-E12 세포</td><td>밀리포어 시그마</td><td>12040401</td><td></td></tr><tr><td>면역펜 (선택 사항)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>4021761EA</td><td></td></tr><tr><td>케블라 기반 또는 기타 자르기 방지 장갑 (선택 사항)</td><td>철물점 또는 아마존</td><td></td><td></td></tr><tr><td>실험실 테이프 또는 배송 테이프</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>159015R</td><td></td></tr><tr><td>층류 후드 1300 시리즈 A2 BSC 클래스 II</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>1375</td><td></td></tr><tr><td>UV 라이트가 있는 층류 후드 SterilGARD</td><td>베이커 컴퍼니</td><td>SG403A-HE</td><td></td></tr><tr><td>마커 용매 방지</td><td>VWR</td><td>52877-310 또는 95042-566</td><td></td></tr><tr><td>Caco-2 세포용 배지(DMEM 고포당 기반, Reagents and Solutions의 레시피 참조)</td><td>in&nbsp에서 설명; 문자 메시지</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HT-29 세포용 배지(DMEM 고포도당, Reagents and Solutions의 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>THP-1 세포용 배지(RPMI, Reagents and Solutions의 레시피 참조)</td><td>본문에 설명되어 있습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브, 1.7 ml, 멸균 &nbsp;</td><td>알칼리 사이언티픽</td><td>C3017-ST</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브</td><td>써모피셔</td><td>3451</td><td></td></tr><tr><td>밀러 LB 매체 (시약 및 용액의 레시피 참조)</td><td>시그마-올드리치</td><td>그리고 nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>니들 노즈 플라이어, 2세트</td><td>철물점 또는 아마존</td><td></td><td></td></tr><tr><td>니트릴 파우더 프리 라텍스 프리 장갑 Aurelia Amazing</td><td>중과학</td><td>92885</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 뚜껑, 멸균 팔콘 페트리 접시 멸균 100x15 mm 스타일</td><td>코닝 주식회사</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>포르볼 미리스테이트 아세테이트 (PMA) (100 ng/&mu; l, Reagents and Solutions의 레시피 참조)&nbsp;</td><td>인비보젠</td><td>TLRL-pma</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 (10 & 마이크로; l, 200 & micro; l, 1000 & micro; l) PurePoint 또는 이에 상응하는 기관</td><td>알칼리 과학 &nbsp;</td><td>ST1010-CS, ST1200-CS, ST1000-CS</td><td></td></tr><tr><td>비닐 랩</td><td>식료품점</td><td></td><td></td></tr><tr><td>순수성 작업 콜라겐제 용액(100 및 마이크로; g/mL)</td><td>고급 바이오매트릭스</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>라운드 커버 슬립 #1 1온스 (코닝 플로트 글라스 또는 피셔브랜드)</td><td>코닝 또는 피셔브랜드</td><td>50143822 또는 12-546-2 25CIR-2</td><td></td></tr><tr><td>메스 칼날, 멸균, 일회용&nbsp;</td><td>모펙 또는 깃털 #10</td><td>AJ136 또는 2975#10</td><td></td></tr><tr><td>세피아프테린 (SEP, 100 및 마이크로; M, Reagents and Solution의 레시피 참조)</td><td>경력 허난화학 주식회사</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>진동 인큐베이터는 220rpm 37&deg로 설정되었습니다; C</td><td>에펜도르프 뉴브런즈윅 사이언티픽</td><td>M12990080</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 접착제 록타이트 클리어 실리콘 IDH 또는 3M 마린 등급 실리콘 밀봉제, 코끝이 있는 클리어</td><td>록타이트 또는 3M</td><td>1745658 아니면 PN08019</td><td></td></tr><tr><td>싱글 채널 피펫 Eppendorf Research Plus, 200 및 마이크로; l</td><td>에펜도르프</td><td></td><td></td></tr><tr><td>단일 채널 피펫(10 및 마이크로; l, 200 & micro; l, 1000 & micro; l)</td><td>에펜도르프</td><td>2231001122</td><td></td></tr><tr><td>분광광도계 나노드롭원C</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>13-400-519</td><td></td></tr><tr><td>멸균된 탈이온수 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>칼슘이나 마그네슘이 없는 멸균 인산염 완충 세린(PBS)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>그리고 nbsp; BSS-PBS-1X6</td><td></td></tr><tr><td>주사기 3ml 또는 루어록 팁 5ml</td><td>BD</td><td>309585 아니면 309603</td><td></td></tr><tr><td>THP-1 세포</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>전송 피펫, 멸균</td><td>피셔브랜드</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>밀리포어 시그마</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 용액</td><td>VWR</td><td>97063-702</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA 0.25%</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>LintGuard 안티-스탯 폴리쉴드로 Kimwipes Professional을 닦아줍니다</td><td>킴벌리-클라크</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td><강>1차 항체:&nbsp; </강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>반인간 CD163</td><td>앱캠</td><td>156769</td><td></td></tr><tr><td>반인간 CD68</td><td>노부스 바이오로지컬스</td><td>NB100-683-0.1 mg</td><td></td></tr><tr><td>반인간 CD80, E3Q9V</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>15416</td><td></td></tr><tr><td>반인간 CK20&nbsp;</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>PA5-82875</td><td></td></tr><tr><td>반인간 MUC2 (996/1)</td><td>서모피셔</td><td>MA5-12345</td><td></td></tr><tr><td><강>2차 항체: </강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 염소 항토끼 IgG (CD80 및 CK20용)</td><td>서모피셔</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 염소 항생쥐 IgG (MUC2 및 CD68 또는 CD163용)</td><td>서모피셔</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td><강>시약 및 용액:&nbsp; 그리고 nbsp; </강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강>카코-2 중형:</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM 혈당 고(4.5g/L)과 1% (v:v) GlutaMax&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) 열 비활성화</td><td>시그마</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>비필수 아미노산 1% 카코-2 매개체</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11140076</td><td></td></tr><tr><td>펜 연쇄상구균 1% (v:v)</td><td>시그마</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><스트롱>HT-29-MTX 미디엄</스트롱></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM 혈당 고(4.5g/L)과 1% (v:v) GlutaMax&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) 열 비활성화</td><td>시그마</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (최종 농도 10 mM)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>펜 연쇄상구균 1% (v:v)</td><td>시그마</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><강>THP-1 중간: </강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS (10% v:v) 열로 불활성화된 태아 소 혈청</td><td>시그마&nbsp;</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>포도당 (최종 농도 4.5 g/L)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>A249001</td><td></td></tr><tr><td>글루타맥스 1% (v:v)&nbsp; 최종 농도 2 mM</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (최종 농도 10 mM)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>펜 연쇄상구균 1% (v:v)</td><td>시그마</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>로즈웰 파크 메모리얼 인스티튜트(RPMI)-1640 중형</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>피루브산나트륨 (최종 농도 1 mM)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td><강>순수 콜라게나제 작용 용액 (1:30 100 및 마이크로 희석; g/ml): </강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>퓨레콜 3 mg/ml 1:30에서 100 및 미세 용량; g/ml&nbsp;</td><td>고급 바이오매트릭스</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>멸균된 탈이온수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강>L-세피아프테린 스톡 용액 (50 mM): </강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-세피아프테린 (SEP)</td><td>경력 허난화학 주식회사</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td><스트롱>포르볼-마이리스테이트 아세테이트 스톡 용액(PMA, 5 mg/mL)</스트렝스></td><td>인비보젠</td><td>TLRL-pma</td><td></td></tr><tr><td>BSA 1% 소 혈청 알부민&nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>시그마&nbsp;</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>밀러 라인배커</td><td>시그마-올드리치</td><td>그리고 nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체와 같은 종의 정상 혈청</td><td>시그마&nbsp;</td><td>NS02L-1ML</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마-올드리치</td><td>441244</td><td></td></tr></tbody></table>

박테리아, 장 및 면역 세포의 독성 및 면역 조절 요법을 위한 비동기 시스템 개발을 위한 3d 플립웰 엔지니어링

3D Flipwell Engineering for Developing Asynchronous Systems for Toxicologic and Immunomodulatory Therapies in Bacterial, Gut, and Immune Cells

박테리아, 장 및 면역 세포의 독성 및 면역 조절 요법을 위한 비동기 시스템 개발을 위한 3D 플립웰 엔지니어링

To study the roles of bacterial secretome in immune cell polarization and gut mucosal homeostasis, we developed a 3-dimensional co-culture model using ...

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상피 세포가 3 차원 세포 골재 형성의 결과로 생리적 조건에서 성장할 수있는 회전 세포 배양 시스템이 설명되어 있습니다. 집계는 디스플레이를...

Culturing 및 벽면 선박 생물 반응기를 회전의 응용은 3D 상피 세포 모델을 유래

이 3D 미세유체 프린팅 기술은 수중 표면에 세포 배열을 인쇄합니다.  우리는 세포 배열이 3D 플로우 셀에서 수중 표면에 미세유체적으로 전달되는 방법을 설명합니다.  물에 잠긴 표면에 인쇄함으로써, 다양한 분야에서 약물 스크리닝 및 세포 독성 평가를 허용하는 세포 마이크로어레이가 생성되었습니다.

연속 흐름 Microspotter을 사용하여 수정 된 표면에 세포의 침수 인쇄

이 프로토콜 cryogelation 기술로 제작을 통합 하 여 탄력 있는 3D macroporous microcryogels의 제작을 설명 합니다. 재생 치료를 촉진 하기 위하여 쉽게 주입된 비보 수 또는 생체 외에서 높은 처리량 마약 검사에 대 한 배열로 조립 셀 로딩 시 3D microtissues 생성 됩니다.

주 사용 재생 치료와 높은 처리량 마약 검사에 대 한 3D Microtissues

체 외 광 화학요법 (ECP)의 핵심 기능을 복제 하기 위해 실험 설정에서 생리 활성, 가변 수지상 생산을 가능 하 게 하는 (TI) 장치 또는 플레이트 및 관련 프로토콜이 개발 되었습니다. 암 면역 요법을 위한 세포 (DCs).

생리 적 면역 원 성 수지상 세포 생성을 위한 새로운 프로토콜

우리는 아세트아미노펜 (APAP)에 장과 간 오르가노이드를 가진 미생물 계통 (MPS)를 드러나. 이 문서에서는 MPS의 오르가노이드 생산 및 APAP 약동 및 독성 특성 평가를 위한 방법을 설명합니다. 또한 결과를 검증하는 데 필요한 조직 기능 분석을 설명합니다.

약물 약동 및 독성 평가를 위한 장/간 미생물학 시스템

면역 요법 및 단일 세포 게놈 프로파일링 시대에 암 생물학은 적절한 시공간 맥락에서 종양-면역 인터페이스를 조사하기 위한 새로운 시험관 내 및 전산 도구를 필요로 합니다. 우리는 2D 및 3D 설정에서 종양 면역 미세유체 공동 배양을 활용하기 위한 프로토콜을 설명하며, 세포 기능의 동적 다중 매개변수 모니터링과 호환됩니다.

in vitro 종양 미세환경에서 면역 반응을 해부하기 위한 미세유체 공동 배양 모델

여기서는 기본 3차원(3D) 장 세포주 모델 시스템과 고정 장 등가물의 광학 현미경 평가를 위한 파라핀 임베딩 프로토콜을 구성하는 방법을 설명합니다. 선택한 단백질의 염색을 통해 단일 실험에서 여러 시각적 파라미터를 분석하여 전임상 약물 스크리닝 연구에 사용할 수 있습니다.

면역 성분이 있는 기본 3차원(3D) 장 모델 시스템

개의 장 오가노이드와 Gut-on-a-Chip 미세유체 시스템의 통합은 인간 장 질환에 대한 관련 번역 모델을 제공합니다. 제시된 프로토콜은 장의 3D 형태 형성 및 동적 체외 모델링을 가능하게 하여 One Health를 통해 개와 인간의 장 질환에 대한 효과적인 치료법 개발을 지원합니다.

염증성 장 질환 환자에서 유래한 장 오가노이드를 사용한 개 장내 칩의 3차원 형태 형성

이 논문에서는 복막 전이의 3차원 구조를 특성화하기 위해 최적화된 다중 면역형광 프로토콜에 대해 설명합니다.

Iterative Bleaching Extends Multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징

수동 IBEX 방법을 사용하여 저비용의 다목적 광조사 기술을 구현하면 상당한 네이티브 자가형광으로 인체 조직을 최적으로 이미징할 수 있습니다. 이 프로토콜은 도립 현미경, 널리 사용 가능한 시약 및 이미지 정렬 및 처리를 위한 오픈 소스 소프트웨어를 사용하여 보관된 임상 샘플에서 다중화된 전체 슬라이드 이미지를 얻는 방법을 자세히 설명합니다.

반복적인 표백을 위해 최적화된 워크플로우는 고도의 자가형광 임상 샘플의 멀티플렉시티 이미징을 확장합니다.

배우세요 장 점막 환경을 모방한 3D 공배양 시스템을 이용하여 장내 세균, 상피 세포 및 대식세포 간 상호작용을 연구하고 약물 반응을 평가하는 방법을. 이 시스템은 면역 조절 요법 개발에 활용됩니다.

박테리아, 장 및 면역 세포의 독성 및 면역 조절 요법을 위한 비동기 시스템 개발을 위한 3D 플립웰 엔지니어링

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