Name: 포유 동물 세포를 Trypsinizing 및 Subculturing (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: 배우세요 포유 동물 세포의 트립신 처리 및 서브컬처링 방법을 통해 부착성 및 현탁 세포 계열을 건강하게 유지하는 기술을 익히세요. 이 영상은 세포 생물학 연구에 필수적인 세포 배양 관리 절차를 시각적으로 안내합니다.

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이 실험 방법에 대한 전체 텍스트 프로토콜에서 사용할 수 있습니다 <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">셀 생물학의 현재 프로토콜</a> .

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포유 동물 세포를 trypsinizing 및 subculturing

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

세포 confluency 도달로, 그들은 subcultured 또는 passaged해야합니다. 결국 감소 mitotic 색인 및 세포 죽음에의 subculture 합류 전지 결과에 오류가 발생했습니다. subculturing의 첫 번째 단계는 trypsinization 또는 기계적 수단으로 기본 문화 선박의 표면에서 세포를 분리하는 것입니다. 결과 세포 현탁액은 다음 세분화, 또는 신선한 문화로, reseeded입니다. 차 문화가 성장을위한 확인하고 정기적으로 공급하고, 이후 차 문화를 생산하는 subcultured 수 있습니다. 세포의 passaging 사이의 시간은 세포주에 따라 다릅니다 및 성장 속도에 따라 다릅니다.

세포 confluency 도달로, 그들은 subcultured 또는 passaged해야합니다. 이 동영상은 자기편과 서스펜션 세포 모두 subculturing위한 절차를 보여줄 것입니다.

포유 동물 세포를 Trypsinizing 및 Subculturing

세포가 컨플루언시(confluency)에 도달하면, 세포를 계대 배양(subculture 또는 passage)해야 합니다. 컨플루언시 상태의 세포를 계대 배양하지 않으면 유사분열 지수(mitotic index)가 감소하며, 결과적으로...

조직 배양 기술은 세포 생물학 분야에서 널리 응용되어 왔습니다. 하지만 배양된 세포가 건강한 상태를 유지하기 위해서는 정기적인 관리가 필요합니다. 세포가 합류도(confluency)에 도달하면, 계대 배양(subculture 또는 passage)을 수행해야 합니다.그렇게 하지 않으면 성장이 저해되고 결국 세포 사멸로 이어집니다. 본 영상에서는 부착성 및 부유성 세포주 모두에 대한 조직 배양 세포 유지 방법을 시연합니다. 안녕하세요, 저는 이스트 테네시의 Molecular Pathology Laboratories Network 내 Dr.LAN's Laboratory의 Ricky입니다.오늘은 부유 세포와 부착 세포를 계대 배양하는 두 가지 기술을 보여드리고자 합니다. 세포 플레이트를 계대 배양하기 위해, 5 mL의 조직 배양 배지가 들어 있는 60 mm 페트리 접시 또는 25 cm² 조직 배양 플라스크에서 컨플루언시(confluency) 상태까지 성장시킨 일차 배양 세포로 시작하겠습니다.먼저 멸균 피펫을 사용하여 일차 배양액의 모든 배지를 제거합니다. 그다음, 다음 단계에서 첨가할 트립신 효소의 활성을 저해할 수 있는 잔류 태아 송아지 혈청을 제거하기 위해, 칼슘과 마그네슘이 없는 37 °C HBSS 소량을 사용하여 부착된 세포 단층을 한두 번 세척합니다.다음으로, 부착된 세포층이 덮일 정도로 충분한 양의 따뜻한 trypsin EDTA 용액을 배양 접시에 추가합니다. 그 후, 플레이트를 37 °C 가온 트레이에 1~2분 동안 놓아둡니다. 배양이 끝나면, 플레이트 바닥을 평평한 표면에 가볍게 두드려 세포를 떼어냅니다.도립 현미경으로 배양 상태를 확인하여 세포가 둥글게 말려 있는지 확인하십시오. 이는 세포가 표면에서 떨어져 나왔음을 나타냅니다. 세포가 충분히 떨어지지 않았다면, 플레이트를 워밍 트레이에 1~2분 더 두십시오. 현미경 관찰 후, 디쉬를 완전 배지로 헹구고 부유액을 2 mL의 완전 배지가 들어 있는 15 mL 원심관에 피펫으로 옮기십시오.세포를 원심 분리하여 펠렛으로 만든 후, 완전 배지에 펠렛을 재현탁합니다. 이제 적절하게 라벨링된 각 새 플레이트에 동일한 부피의 세포 현탁액을 첨가합니다. 또는, 혈구계수기를 사용하여 세포 수를 센 후 원하는 밀도로 희석하여 각 플레이트에 특정 수의 세포를 첨가할 수 있습니다.모든 플레이트에 계대배양 날짜와 계대 횟수를 반드시 표시하십시오. 세포 현탁액을 추가한 후, 각 새로운 배양물에 신선한 배지 1 mL를 넣으십시오. 이제 습도가 유지되는 37 °C, 5% CO2 배양기에 플레이트를 배양하십시오.세포를 하룻밤 동안 배양한 후, 플레이트에 신선한 배지를 추가하고 다시 37°C에 넣으십시오. 플레이트 내 세포가 합류(confluency) 상태에 도달하면, 이 절차를 반복하여 플레이트를 다시 계대 배양할 수 있으며, 필요에 따라 계대 배양을 계속하십시오. 이제 부유 배양 세포를 계대 배양하는 방법을 보여드리겠습니다.부유 배양 세포의 패키징은 부착 세포보다 간단합니다. 부유 배양물을 패키징하기 전에, 세포가 뭉쳐 부유액 내에 덩어리가 지고 플라스크를 흔들었을 때 배지가 탁하게 보일 때까지 2~3일마다 먹이를 공급하여 합류도(confluency)에 도달할 때까지 유지해야 합니다.이를 위해, 플라스크 바닥에 가라앉은 세포들이 흐트러지지 않도록 주의하며 배양기에서 부유 세포가 담긴 플라스크를 꺼냅니다. 무균적으로 플라스크 내 배지의 약 3분의 1을 제거하여 버리고, 이를 37 °C로 예열된 배지로 동일한 부피만큼 채웁니다. 배지를 교체한 후, 플라스크를 가볍게 돌려 섞어준 다음 37 °C, 5% CO2 조건의 배양기로 다시 넣습니다.플라스크 내 배지 부피가 15 mL 미만인 경우, 세포와 배지의 접촉을 높이기 위해 플라스크를 수평 상태로 배양하십시오. 그렇지 않은 경우, 배지를 공급하지 않는 날에는 플라스크를 수직으로 세워 배양할 수 있습니다. 플라스크를 흔들어 세포를 재부유시켜 상태를 확인하십시오.배지에서 대사 성장이 원활함을 나타내는 색상 변화가 있는지 반드시 관찰하십시오. 세포 배양액이 1mL당 약 250만 개의 세포로 합쳐져 밀도가 높아지면(confluent), 계대 배양을 진행할 수 있습니다. 다시 한번, 부착 배양 및 부유 배양 모두에 대해 배양 세포를 계대 배양하는 방법을 보여드렸습니다.이상입니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 모든 실험에서 좋은 결과 얻으시길 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

마이크로 해부 explants 기술은 골격 근육 줄기 세포의 원천으로 청소년, 성인이나 배아 근육에서 proliferative 골격근 세포를 분리를위한 강력하고 안정적​​인 방법입니다. 유니 클리,이 세포는 clonally 생체내 이식에 사용되는 골격 근육 줄기 세포 라인을 생산하기 위해 파생되었습니다.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

이 보고서에서, 우리는 분리 시스템 및 마우스 유선에서 문화 기증자 세포를 증명하고, orthotopically stromal 분석받는 마우스에서 이러한 세포를 이식 : 내유 종양 개발하는 동안 상피 상호 작용합니다.

C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유

이 비디오는 마우스 종양 이종 이식 모델에서 종양 특이적 항체의 생체 내 국소화를 연구하는 기술을 보여줍니다. 종양 형성을 위해 암세포를 마우스에 피하 주입하면 종양 특이적 수용체에 결합하는 형광 표지된 항체를 주입하여 이미징을 통해 항체 국소화를 생체 내에서 평가할 수 있습니다.

종양 특이적 항체의 In vivo 국소화를 평가하는 기법

이 비디오는 포유류 세포에서 벌크 자가포식 격리 활성을 평가하기 위한 분석을 보여줍니다. 전기천공법을 활용하여 젖산 탈수소효소(LDH)를 포함한 세포질 단백질을 방출합니다. 격리된 LDH 및 총 세포 LDH 분획은 LDH 격리를 평가하기 위해 결정되어 전체 벌크 격리 활성에 대한 통찰력을 제공합니다.

포유류 세포에서 벌크 자가포식 격리 활성(Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells) 정량화

이 비디오는 마우스 배아의 배측 뇌파에서 1차 대뇌 피질 세포를 분리하고 배양하는 프로토콜을 보여줍니다.

Isolation and Culturing of Cells from Mouse Embryo Dorsolateral Telencephalons(쥐 배아에서 세포 분리 및 배양)

이 기술은 이전 포유류의 세포의 감염에 대한 자연 protozoan 호스트 세포에 미리 재배되고 세균 병원균의 세포 성장을, 수확 정상화하고 계량화 할 수있는 방법을 제공합니다. 이 메소드는 프라이밍 단계뿐만 아니라 대상 셀 유형에 대한 호스트 세포의 다양한 수용하기 위해 수정할 수 있습니다.

Protozoan - 중이오 박테리아와 취급하기 쉬운 포유류의 세포 감염

우리는 라벨 및 신생아 쥐의 유전형과 그들로부터 차의 연결을 문화를 생성하는 절차에 대해 설명합니다. 유전자형은 신속하고 효율적이며 신뢰성 및 자동 핵산 추출 할 수 있습니다. 이 neonatally 치명적인 마우스와 유전자형의 이전 완료를 필요로 그들의 문화에 특히 유용합니다.

동물의 신속한 유전자형은 뇌 신경 세포의 차 문화 구축에 이어

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마우스 표피 각질 세포와 체외 클로노겐 문화의 격리

우리는 살아있는 효모와 포유류 세포에서 포름알데히드가 교차하는 번역 (단백질 생합성) 복합체를 급속하게 안정화시키는 기술을 제시합니다. 접근은 과도 중간및 동적 RNA:단백질 상호 작용을 해부할 수 있습니다. 교차 연결된 복합체는 심층 시퀀싱 기반 프로파일링 방법, 현미경 검사법 및 질량 분석법과 같은 여러 다운스트림 응용 분야에서 사용할 수 있습니다.

진핵 세포에서 번역 단지의 신속한 생체 내 고정 및 격리

AviTag 특이적 위치 제한 조명 증강 비오티닐화(ALIBi)는 리보솜의 아세포 집단을 표지하고 친화력을 정제하기 위해 개발된 새로운 광유전학 활성화 방법으로, 하위 시퀀싱과 단백질체 분석을 위해 개발되었습니다.

재조합 펩타이드 태그 특이적 위치 제한 조명 증강 비오티닐화를 기반으로 한 세포 내 리보솜 하위 집단의 분리

배우세요 포유 동물 세포의 트립신 처리 및 서브컬처링 방법을 통해 부착성 및 현탁 세포 계열을 건강하게 유지하는 기술을 익히세요. 이 영상은 세포 생물학 연구에 필수적인 세포 배양 관리 절차를 시각적으로 안내합니다.

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