Bouw van een meerdere lagen mesenchymale stamcellen blad met een 3D dynamische cultuur-systeem

Stamceltherapie is op grote schaal gemeld als een veelbelovende behandeling voor vele ziekten. En de celbladtechnieken zijn ontwikkeld om de retentie van de cel en de overleving binnen de doelen te verbeteren. Tijdens de opbouw van celbladen blijft de ontoereikende voedingsvoorziening een belangrijk probleem voor het verlies van de functie van stamcel, en is een onbevredigende stamceleigendom die uiteindelijk de therapeutische effecten in vivo zou beïnvloeden.

Ons doel om de beschikbare meerlaagse stamcelblad product voor te bereiden, ons team ontwikkelde de cellulaire gepolste polesized, pericardium en cel blad steiger. Op basis van het steiger zou de meerlaagse cellen starter snel worden gebouwd met nonapeptide Waterstof en een dynamica perfusiesysteem wordt gebruikt om de voedingsvoorziening van de stamcel in vitro te garanderen. Neem een gedroogde DBP steiger en zet het in het midden van de zwarte basis.

Leg een witte spanningsring op de DBP steiger, en breng het aan in de weefseldrager. Zorg ervoor dat de DBP steiger volledig vast zit in de weefseldrager. Voeg 100 microliters cultuur mediums op de DBP steiger.

Zet de steiger in de 37 graden Celsius incubator, en laat het weken voor 15 minuten. Haal de cellen uit de couveuse, verwijder de kweekmediums uit de kweekschaal, was de cellen voorzichtig met twee milliliter warme PBS. Verwijder alle PBS uit de kweekschaal en zorg ervoor dat er geen vloeistof overblijft.

Voeg twee milliliter toe aan 1,25% trypsineoplossing aan de schotel en ontcubeer de cellen gedurende drie minuten. Stop het trypsin effect door het toevoegen van twee milliliter cultuur medium. Was de cellen voorzichtig uit de schaal.

Breng de celsuspensies over in een nieuwe centrifugaalbuis van 15 milliliter. Centrifugate de cellen op 220 keer zwaartekracht gedurende vijf minuten, en het verkrijgen van celsedimenten. Verwijder de supernatant, en veeg de cel sediment.

Schors de cellen opnieuw met drie milliliter 10%sucroseoplossing. Aspirate 10 microliter cel suspensie, en de inhoud celnummer leest een hemocytometer, extract drie miljoen cellen en overdracht in uw nieuwe 1,5 milliliter centrifugaal buis. Centrifugate de cellen op 220 keer vierkant wortel gedurende vijf minuten, volledig verwijderen van de supernatants en het verkrijgen van de cellen sediment.

Bereid 20 microliter voor 10% sacharoseoplossing. Voorzichtig opnieuw op te schorten de cellen en het verkrijgen van een uniforme suspensie. Voeg 20 microliter peptide hydro gel aan de bovenkant van de suspensie voorzichtig meng de peptide hydro gel, en de cellen schorsing met de T, neem de DBP steiger, het verlaten van de weefseldrager, en dan zachtjes aspirate de calculi mediaan met een T.Aspirate het mengsel het mengsel en gelijkmatig toe te voegen aan de DBP steiger.

Voeg een milliliter calciumedetaat toe aan de bodem van de weefseldrager. Voeg voorzichtig vier milliliter cultureel medium in de cultuur schotel en dan ontstaan de cel vel. Zet de cellen in de couveuse voor twee uur laat het cultuur.

Het dynamische perfusiesysteem omvat een perfusiecultuurcontainer het gas dat recrement en een glasfles uitwisselt. Assembles zijn dynamische perfusiesystemen zoals de figuur wordt weergegeven. Voeg twee hydro milliliters cultuur medians in de glazen fles.

Steek de celplaat in de kamer van de kweekcontainer, voeg drie milliliters cultuurmedianen in de container, zet de dynamische perfusiesystemen in de couveuses en begin te pompen. Open de kweekcontainer in de bipositieve ligfiets. Haal het celblad uit de kweekcontainer en zet het in cultuurschotel.

Gebruik een tang om de weefseldrager te immobiliseren en gebruik nog eens twee tangen om de witte spanningsring van de zwarte basis te scheiden. Tot slot, verkrijg het meerlaagse celblad. DBP steiger is transparant.

De SEM doorverkoopt toont aan dat hogescholen gevangen en de componenten zijn volledig gereserveerd. De celbladen kunnen door tangen voor korte bewaring worden verkregen en worden gehouden. Deze cel plaat kan worden overgebracht naar 1,5 milliliter cylindriform buis.

Als model bijvoorbeeld te beginnen met celvertoningen van BMFC's zeer positief voor de stamcellen marker CD 9O en de CD 29. Na de celconstructie van de BMFC's die het celblad verlaten, blijven hoge expansieniveaus van CD 90 en de CD 29. Het bouwen van de meerlaagse celstructuur is de kritieke stap van het protocol.

De pantijd vereist vier hydrogel wanneer de PH-waarde verandert van SA naar neutraal, daarom is het belangrijk om de cel te wassen met sacharoseoplossing om de oppervlakte-ionen te verwijderen. Ook de volumeverhouding van celsuspensie en panthihydrogel is geen goede vriend voor de bouw van de tijdelijke meerlaagse structuur. Na de vorming van 3D stamcelstructuur ziet u dat het dynamische perfusiesysteem belangrijk is voor het stabiliseren van de meerlaagse structuur en het handhaven van de viabiliteiten van de stamcel.

De dynamische infiltratie van de cultuurmediaan zou stamcellen kunnen vergemakkelijken om celcontext binnen de meerlaagse structuur te vermenigvuldigen en te extrapoleren ook zouden de dynamische cultuurthermometers volgens verschillende stamceltypes moeten worden aangepast.