Name: Inkoop en perfusie-decellularisatie van porcine gevasculariseerde flappen in een aangepaste perfusiebioreactor (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: Leer perfusie-decellularisatie van gevasculariseerde porcine flappen in een aangepaste bioreactor. Deze veelzijdige methode ondersteunt weefselregeneratie en reconstructieve chirurgie door betrouwbare decellularisatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Richardson, D., Fisher, S. E., Vaughan, D. E., Brown, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radial+Forearm+Flap+Donor-Site+Complications+and+Morbidity%3A+A+Prospective+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Radial Forearm Flap Donor-Site Complications and Morbidity: A Prospective Study.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 99 (1), 109-115 (1997).</li>
<li>Edsander-Nord, Å, Jurell, G., Wickman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-site+morbidity+after+pedicled+or+free+TRAM+flap+surgery%3A+A+prospective+and+objective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Donor-site morbidity after pedicled or free TRAM flap surgery: A prospective and objective study.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 102 (5), 1508-1516 (1998).</li>
<li>Qian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+and+meta-analysis+of+free-style+flaps%3A+Risk+analysis+of+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery.+Global+Open%22%5BJournal%5D)">A systematic review and meta-analysis of free-style flaps: Risk analysis of complications.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. Global Open. 6 (2), 1651(2018).</li>
<li>Issa, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+composite+allograft-specific+characteristics+of+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">Vascularized composite allograft-specific characteristics of immune responses.</a> Transplant International. 29 (6), 672-681 (2016).</li>
<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+composite+allotransplantation%3A+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li>
<li>Iske, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+tissue+allotransplantation%3A+Opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Composite tissue allotransplantation: Opportunities and challenges.</a> Cellular and Molecular Immunology. 16 (4), 343-349 (2019).</li>
<li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016, 1541823(2016).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Hussey, G. S., Dziki, J. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-based+materials+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-based materials for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Materials. 3, 159-173 (2018).</li>
<li>Colazo, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applied+bioengineering+in+tissue+reconstruction%2C+replacement%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B+Reviews%22%5BJournal%5D)">Applied bioengineering in tissue reconstruction, replacement, and regeneration.</a> Tissue Engineering. Part B Reviews. 25 (4), 259-290 (2019).</li>
<li>Rouwkema, J., Rivron, N. C., van Blitterswijk, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Vascularization in tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 26 (8), 434-441 (2008).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+skin%2Fadipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li>
<li>Jank, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+bioengineered+skin+flap+scaffold+with+a+perfusable+vascular+pedicle%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+-+Part+A%22%5BJournal%5D)">Creation of a bioengineered skin flap scaffold with a perfusable vascular pedicle.</a> Tissue Engineering - Part A. 23 (13-14), 696-707 (2017).</li>
<li>Giatsidis, G., Guyette, J. P., Ott, H. C., Orgill, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+large-volume+human-derived+adipose+acellular+allogenic+flap+by+perfusion+decellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Development of a large-volume human-derived adipose acellular allogenic flap by perfusion decellularization.</a> Wound Repair and Regeneration. 26 (2), 245-250 (2018).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularized+skeletal+muscle+as+a+three-dimensional+scaffold+with+a+vascular+network+template%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularized skeletal muscle as a three-dimensional scaffold with a vascular network template.</a> Biomaterials. 89, 114-126 (2016).</li>
<li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+of+the+porcine+ear+generates+a+biocompatible%2C+nonimmunogenic+extracellular+matrix+platform+for+face+subunit+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Decellularization of the porcine ear generates a biocompatible, nonimmunogenic extracellular matrix platform for face subunit bioengineering.</a> Annals of Surgery. 267 (6), 1191-1201 (2018).</li>
<li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularization+of+human+ear+grafts+enables+ECM-based+scaffolds+for+auricular+vascularized+composite+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularization of human ear grafts enables ECM-based scaffolds for auricular vascularized composite tissue engineering.</a> Acta Biomaterialia. 73, 339-354 (2018).</li>
<li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+a+human+face+graft%3A+The+matrix+of+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li>
<li>Haughey, B. H., Panje, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+for+multiple+musculocutaneous+flaps%5BTitle%5D)+AND+%22The+Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">A porcine model for multiple musculocutaneous flaps.</a> The Laryngoscope. 99 (2), 204-212 (1989).</li>
<li>Khachatryan, A., et al. Radial Forearm Flap. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKhachatryan%2C+A+%22Microsurgery+Manual+for+Medical+Students+and+Residents%3A+A+Step-by-Step+Approach%22">Microsurgery Manual for Medical Students and Residents: A Step-by-Step Approach</a>. , Springer. Denmark. 177-181 (2021).</li>
<li>Hammouda, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+effect+on+the+nanostructure+of+SDS+micelles+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Research+of+the+National+Institute+of+Standards+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Temperature effect on the nanostructure of SDS micelles in water.</a> Journal of Research of the National Institute of Standards and Technology. 118, 151-167 (2013).</li>
<li>Qu, J., Van Hogezand, R. M., Zhao, C., Kuo, B. J., Carlsen, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+of+a+fasciocutaneous+flap+for+use+as+a+perfusable+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Decellularization of a fasciocutaneous flap for use as a perfusable scaffold.</a> Annals of Plastic Surgery. 75 (1), 112-116 (2015).</li>
<li>Keane, T. J., Swinehart, I. T., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+tissue+decellularization+used+for+preparation+of+biologic+scaffolds+and+in+vivo+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods of tissue decellularization used for preparation of biologic scaffolds and in vivo relevance.</a> Methods. 84, 25-34 (2015).</li>
<li>Mendibil, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+decellularization+methods%3A+Rationale+and+strategies+to+achieve+regenerative+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific decellularization methods: Rationale and strategies to achieve regenerative compounds.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (15), 5447(2020).</li>
<li>Lupon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vascularized+composite+allografts+using+natural+scaffolds%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B+Reviews%22%5BJournal%5D)">Engineering vascularized composite allografts using natural scaffolds: A systematic review.</a> Tissue Engineering. Part B Reviews. 28 (3), 677-693 (2022).</li>
<li>Duisit, J., Maistriaux, L., Bertheuil, N., Lellouch, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vascularized+composite+tissues+by+perfusion+decellularization%2Frecellularization%3A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Transplantation+Reports%22%5BJournal%5D)">Engineering vascularized composite tissues by perfusion decellularization/recellularization: Review.</a> Current Transplantation Reports. 8, 44-56 (2021).</li>
<li>Adil, A., Xu, M., Haykal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recellularization+of+bioengineered+scaffolds+for+vascular+composite+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">Recellularization of bioengineered scaffolds for vascular composite allotransplantation.</a> Frontiers in Surgery. 9, 843677(2022).</li>
<li>Phelps, E. A., García, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+more+than+a+cell%3A+Vascularization+strategies+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Engineering more than a cell: Vascularization strategies in tissue engineering.</a> Current Opinion in Biotechnology. 21 (5), 704-709 (2010).</li>
<li>Pozzo, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+porcine+fascio-cutaneous+flap+model+for+vascularized+composite+allografts+bioengineering+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A reliable porcine fascio-cutaneous flap model for vascularized composite allografts bioengineering studies.</a> Journal of Visualized Experiments. (181), e63557(2022).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+recellularization+of+whole+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Decellularization and recellularization of whole livers.</a> Journal of Visualized Experiments. (48), e2394(2011).</li>
<li>Uzarski, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+repopulation+and+preparation+of+rodent+extracellular+matrix+scaffolds+for+renal+tissue+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell repopulation and preparation of rodent extracellular matrix scaffolds for renal tissue development.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e53271(2015).</li>
<li>Sullivan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+methods+of+porcine+kidneys+for+whole+organ+engineering+using+a+high-throughput+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Decellularization methods of porcine kidneys for whole organ engineering using a high-throughput system.</a> Biomaterials. 33 (31), 7756-7764 (2012).</li>
<li>Choudhury, D., Yee, M., Sheng, Z. L. J., Amirul, A., Naing, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+systems+and+devices%3A+State-of-the-art%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularization systems and devices: State-of-the-art.</a> Acta Biomaterialia. 115, 51-59 (2020).</li>
<li>Schilling, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+fabrication+of+an+automatable%2C+3D+printed+perfusion+device+for+tissue+infusion+and+perfusion+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Design and fabrication of an automatable, 3D printed perfusion device for tissue infusion and perfusion engineering.</a> Tissue Engineering. Part A. 26 (5-6), 253-264 (2020).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Het voorgestelde protocol maakt gebruik van de perfusie van SDS met lage concentratie om een reeks van varkens afgeleide flappen te decellulariseren. Met deze procedure kunnen acellulair omentum, tensor fascia lata en radiale onderarmflappen met succes worden gedecellulariseerd met behulp van een protocol dat SDS met lage concentratie bevordert. Voorlopige optimalisatie-experimenten hebben vastgesteld dat SDS bij een lage concentratie (0,05%) tussen 2 dagen tot 5 dagen in staat is om cellulair materiaal voor het omentum,...

Traumatisch letsel en tumorverwijdering kunnen leiden tot grote en complexe defecten van zacht weefsel. Deze defecten kunnen de kwaliteit van leven van de patiënt aantasten, functieverlies veroorzaken en leiden tot blijvende invaliditeit. Hoewel technieken zoals autologe weefselflapoverdracht vaak worden toegepast, zijn problemen met de beschikbaarheid van flappen en morbiditeit van de donorplaats belangrijke beperkingen 1,2,3. Gevasculariseerde composiet allotransplantatie (VCA) is een veelbelovend alternatief dat samengestelde weefsels, bijvoorbeeld spieren, huid, vasculatuur, als een enkele eenheid overdraagt aan ontvangers. VCA vereist echter langdurige immunosuppressie, wat leidt tot geneesmiddeltoxiciteit, opportunistische infecties en maligniteiten 4,5,6.
Tissue-engineered acellulaire steigers zijn een mogelijke oplossing voor deze beperkingen7. Acellulaire weefselsteigers kunnen worden verkregen met behulp van decellularisatiemethoden, die cellulair materiaal uit inheemse weefsels verwijderen met behoud van de onderliggende extracellulaire matrix (ECM) microarchitectuur. In tegenstelling tot het gebruik van synthetische materialen in tissue engineering, biedt het gebruik van biologisch afgeleide steigers een biomimetisch ECM-substraat dat biocompatibiliteit en het potentieel voor klinische vertaling mogelijk maakt8. Na decellularisatie kan de daaropvolgende recellularisatie van scaffolds met ontvangerspecifieke cellen vervolgens functionele, gevasculariseerde weefsels genereren met weinig tot geen immunogeniciteit 9,10,11. Door een effectief protocol te ontwikkelen om acellulaire weefsels te verkrijgen met behulp van perfusie-decellularisatietechnieken, kan een breed scala aan weefseltypen worden gemanipuleerd. Op zijn beurt maakt het voortbouwen op deze techniek de toepassing op complexere weefsels mogelijk. Tot op heden is perfusie-decellularisatie van gevasculariseerde zachte weefsels onderzocht met behulp van eenvoudige gevasculariseerde weefsels zoals een fasciocutane flap van volledige dikte bij knaagdier12, varkens13 en menselijke modellen14, evenals varkens rectus abdominis skeletspieren15. Bovendien zijn complexe gevasculariseerde weefsels ook perfusie gedecellulariseerd, zoals aangetoond in varkens- enmensenoormodellen 16,17 en menselijke full-face transplantaatmodellen18.
Hier beschrijft het protocol de decellularisatie van gevasculariseerde vrije flappen met behulp van biologisch afgeleide ECM-steigers. We presenteren de decellularisatie van drie klinisch relevante flappen: 1) het omentum, 2) de tensor fascia lata en 3) de radiale onderarm, die allemaal representatief zijn voor werkpaardflappen die routinematig worden gebruikt in reconstructieve chirurgie en niet eerder zijn onderzocht in dierstudies in de context van weefseldecellularisatie. Deze bio-technische flappen bieden een veelzijdig en direct beschikbaar platform dat het potentieel heeft voor klinische toepassingen voor gebruik op het gebied van reparatie en reconstructie van grote weke delendefecten.

<table><tbody><tr><td>0.2 &micro;m pore Acrodisk Filter</td><td>VWR</td><td>CA28143-310</td><td></td></tr><tr><td>0.9 % Sodium Chloride Solution (Normal Saline)</td><td>Baxter</td><td>JF7123</td><td></td></tr><tr><td>20 L Polypropylene Carboy</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-62507-20</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Sofsilk Nonabsorbable Surgical Tie</td><td>Covidien</td><td>&nbsp;LS639</td><td></td></tr><tr><td>3-way Stopcock</td><td>Cole-Parmer</td><td>UZ-30600-04</td><td></td></tr><tr><td>Adson Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-Antimycotic Solution, 100X</td><td>Wisent</td><td>450-115-EL</td><td></td></tr><tr><td>Atropine Sulphate 15 mg/30ml</td><td>Rafter 8 Products</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>BD Angiocath 20-Gauge</td><td>VWR</td><td>BD381134</td><td></td></tr><tr><td>BD Angiocath 22-Gauge</td><td>VWR</td><td>BD381123</td><td></td></tr><tr><td>BD Angiocath 24-Gauge</td><td>VWR</td><td>BD381112</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td>DNAse Co-factor</td></tr><tr><td>DNase I from bovine pancreas</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>DNA assay (Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit)</td><td>Invitrogen</td><td>P7589</td><td></td></tr><tr><td>DPBS, 10X</td><td>Wisent</td><td>311-415-CL</td><td>&nbsp;without Ca++/Mg++</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td></td></tr><tr><td>Heparin, 1000 I.U./mL</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine Hydrochloride&nbsp; 5000 mg/50 ml</td><td>Bimeda-MTC Animal Health Inc.</td><td>612316</td><td></td></tr><tr><td>Ismatec Pump Tygon 3-Stop Tubing</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-96450-40</td><td>Internal Diameter:&nbsp; 1.85 mm</td></tr><tr><td>Ismatec REGLO 4-Channel Pump</td><td>Cole-Parmer</td><td>78001-78</td><td></td></tr><tr><td>Ismatec Tubing Cassettes</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-78016-98</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 99.9%, 250 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>2231929</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar Lennox</td><td>Bioshop Canada</td><td>LBL406.500</td><td>Sterility testing agar plates</td></tr><tr><td>Magnesium Sulfate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td>DNAse Co-factor</td></tr><tr><td>Masterflex L/S 16 Tubing</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-96410-16</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>2242905</td><td></td></tr><tr><td>Monopolar Cautery Pencil</td><td>Valleylab</td><td>E2100</td><td></td></tr><tr><td>Normal Buffered Formalin, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>N&deg;11 scalpel blade</td><td>Swann Morton</td><td>303</td><td></td></tr><tr><td>Papain from papaya latex</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3125</td><td></td></tr><tr><td>Peracetic Acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>269336</td><td></td></tr><tr><td>Plastic Barbed Connector for 1/4" to 1/8" Tube ID</td><td>McMaster-Carr</td><td>5117K61</td><td></td></tr><tr><td>Plastic Barbed Tube 90&deg; Elbow Connectors</td><td>McMaster-Carr</td><td>5117K76</td><td></td></tr><tr><td>Plastic Quick-Turn Tube Plugs</td><td>McMaster-Carr</td><td>51525K143</td><td>Male Luer</td></tr><tr><td>Plastic Quick-Turn Tube Sockets</td><td>McMaster-Carr</td><td>51525K293</td><td>Female Luer</td></tr><tr><td>Punch Biopsy Tool</td><td>Integra Miltex</td><td>3332</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Chloride 40 mEq/20 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-Iodine, 10%</td><td>Rougier</td><td>833133</td><td></td></tr><tr><td>Serological Pipet, 2mL</td><td>Fisher Science</td><td>13-678-27D</td><td></td></tr><tr><td>Snap Lid Airtight Containers</td><td>SnapLock</td><td>142-3941-4</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Dodecyl Sulfate Powder</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4509</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Metal Ligation Clips, Small</td><td>Teleflex</td><td>001200</td><td></td></tr><tr><td>Stevens Tenotomy Scissors, 115 mm, straight</td><td>B. Braun</td><td>BC004R</td><td></td></tr><tr><td>TruWave Pressure Monitoring Set</td><td>Edwards Lifesciences</td><td>PX260</td><td></td></tr></tbody></table>

inkoop en perfusie-decellularisatie van porcine gevasculariseerde flappen in een aangepaste perfusiebioreactor

Procurement and Perfusion-Decellularization of Porcine Vascularized Flaps in a Customized Perfusion Bioreactor

Grote volumeke delen defecten leiden tot functionele tekorten en kunnen de kwaliteit van leven van de patiënt sterk beïnvloeden. Hoewel chirurgische reconstructie kan worden uitgevoerd met behulp van autologe vrije flaptransfer of gevasculariseerde composiet allotransplantatie (VCA), hebben dergelijke methoden ook nadelen. Problemen zoals morbiditeit op de donorplaats en de beschikbaarheid van weefsel beperken autologe vrije flaptransfer, terwijl immunosuppressie een significante beperking van VCA is. Gemanipuleerde weefsels in reconstructieve chirurgie met behulp van decellularisatie / recellularisatiemethoden vertegenwoordigen een mogelijke oplossing. Gedecellulariseerde weefsels worden gegenereerd met behulp van methoden die native cellulair materiaal verwijderen met behoud van de onderliggende extracellulaire matrix (ECM) microarchitectuur. Deze acellulaire steigers kunnen vervolgens worden gerecellulariseerd met ontvangerspecifieke cellen.
Dit protocol beschrijft de inkoop- en decellularisatiemethoden die worden gebruikt om acellulaire steigers in een varkensmodel te bereiken. Daarnaast geeft het ook een beschrijving van het ontwerp en de opstelling van de perfusiebioreactor. De flappen omvatten het varkensomentum, de tensor fascia lata en de radiale onderarm. Decellularisatie wordt uitgevoerd via ex vivo perfusie van natriumdodecylsulfaat (SDS) wasmiddel met lage concentratie, gevolgd door DNase-enzymbehandeling en perazijnzuursterilisatie in een aangepaste perfusiebioreactor.
Succesvolle weefseldecellularisatie wordt gekenmerkt door een wit-ondoorzichtig uiterlijk van flappen macroscopisch. Acellulaire flappen tonen de afwezigheid van kernen op histologische kleuring en een significante vermindering van het DNA-gehalte. Dit protocol kan efficiënt worden gebruikt om gedecellulariseerde weke delen steigers te genereren met geconserveerde ECM en vasculaire microarchitectuur. Dergelijke steigers kunnen worden gebruikt in latere recellularisatiestudies en hebben het potentieel voor klinische vertaling in reconstructieve chirurgie.

Dit protocol voor het decellulariseren van gevasculariseerde varkensflappen is afhankelijk van de perfusie van een ionische wasmiddel, SDS, door de flap vasculatuur in een aangepaste perfusiebioreactor. Voorafgaand aan de decellularisatie werden drie gevasculariseerde flappen in een varkensmodel verkregen en gecannuleerd volgens hun belangrijkste aanvoervaten. De flappen werden onmiddellijk na aankoop gespoeld om een gepatenteerde, doorlaatbare vasculatuur te behouden om succesvolle decellularisatie mogelijk te maken. Me...

Het protocol beschrijft de chirurgische verkrijging en daaropvolgende decellularisatie van gevasculariseerde varkensflappen door de perfusie van natriumdodecylsulfaatwater door de flapvasculatuur in een aangepaste perfusiebioreactor.

Inkoop en perfusie-decellularisatie van porcine gevasculariseerde flappen in een aangepaste perfusiebioreactor

Large volume soft tissue defects lead to functional deficits and can greatly impact the patient&#39;s quality of life. Although surgical reconstruction ...

Deze methode beschrijft de chirurgische verkrijging van drie gevasculariseerde varkensflappen en hun daaropvolgende perfusiedecellularisatie. Deze methode kan helpen bij het regenereren van varkensflappen met behulp van een weefseldecellularisatie- en recellularisatiebenadering. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de veelzijdigheid om profusie-decellularisatie te bereiken over een verscheidenheid aan gevasculariseerde varkensflappen in een eenvoudig te monteren bioreactoropstelling.De hier beschreven techniek kan breed worden toegepast op andere gevasculariseerde flappen als een potentiële tissue engineering-oplossing met behulp van varkensflappen in reconstructieve chirurgie. Maak om te beginnen een in- en uitstroombuis door ongeveer 50 centimeter LS16 platina-gecoate siliconenbuizen te meten. Sluit het ene uiteinde aan op een gele 3-stops pompslang en het andere op een steriele serologische pipet van 2 milliliter om perfusaat van de reinigingsmiddelreservoirs naar de bioreactorkamer te brengen.Autoclaaf de kamer en slangen in individueel verpakte steriele verpakkingen. Voor het verkrijgen van omentale flap plaatst u een 12 weken oud verdoofd Yorkshire-varken in rugligging en bereidt u de buik vervolgens op de gebruikelijke steriele manier voor. Voer een xipho-navelstreng laparotomie uit om de buik binnen te gaan en het maagcefalad te mobiliseren en het omentum in het operatieveld te plaatsen.Beginnend bij het linker aspect van de grotere kromming, waar de linker gastro-epiploïsche slagader zich aansluit bij de miltslagader, skeletiseert u de linker gastro-epiploïsche slagader en ader met behulp van een rechte Stevens-tenotomieschaar. Vervolgens ligate en verdeel beide afzonderlijk met behulp van chirurgische banden of clips. Ga langs de grotere kromming van de maag van links naar rechts om de korte vaattakken die voortkomen uit het omentum te ligateeren en te verdelen, waardoor de grotere kromming van de maag ontstaat.Ga door met de mobilisatie van het grotere omentum totdat de kruising van de rechter gastro-epiploïsche vaten en gastroduodenale slagader wordt aangetroffen. Ligaat vervolgens en verdeel vervolgens de rechter gastro-epiploïsche slagader en ader om de omentale flap te bevrijden en later flapcannulatie mogelijk te maken. Voor tensor fascia lata flap inkoop, plaats het varken in de laterale decubitus positie.Markeer de binnenste flapgrens van de voorste superieure iliacale wervelkolom, of ASIS, naar de laterale patella en een achterste grens ongeveer 8 tot 10 centimeter caudaal. Gebruik een scalpel om een scherpe incisie te maken aan de distale rand bij de patella. Verdiep de incisie door de onderhuidse weefsels om de fascia boven de rectus femoris te bereiken en ga door met de incisies naar de ASIS langs de gemarkeerde grenzen.Om alleen de fasciale flap te isoleren, verwijdert u de bovenliggende huidcomponent uit de onderliggende fascialaag. Vervolgens ligate of cauteriseren kleine perforatorvaten naar de huid. Keer terug naar de distale rand van de flap en snijd de diepe fascia in.Mobiliseer de fascia van de onderliggende vastus lateralis spier naar de ASIS. Nadat u de pedikel naar de diepe femorale vaten hebt gesleept, skeletiseert u de laterale circumflexe femorale slagader en ader die de fasciale flap voeden. Ligate en verdeel vervolgens flapvaten proximaal, waar ze zich aansluiten bij de diepe femorale vaten en latere cannulatie mogelijk maken.Markeer voor radiale onderarmklepverwerving een vierkant van 3 bij 3 centimeter op het radiale aspect van een verlengde varkensonderarm. Teken een lijn tussen het middelpunt van de proximale flapmarge en de antecubitale fossa om het geschatte verloop van de radiale slagader pedikel aan te geven. Bevestig het arteriële beloop met palpatie.Snijd vervolgens de huid in met behulp van een scalpel op het distale aspect met een diepte tot aan de antebrachiale fascia. Stompe dissectie met tenotomieschaar totdat de distale radiale slagader en de vena comitantes worden aangetroffen. Vervolgens ligate en verdeel de slagader en aderen met chirurgische banden of clips.Ga door met de huidincisies op de radiale en ulnaire randen van het gemarkeerde huidplein. Mobiliseer vervolgens de flap van het onderliggende radiale bot met een chirurgisch mes of cautery, gaande van een ulnaire naar radiale richting terwijl de huidflap proximaal naar de antecubitale fossa wordt verhoogd. Gebruik een tenotomieschaar, skelet de radiale slagader en vena comitantes proximaal bij de antecubitale fossa, waar ze respectievelijk de brachiale slagader en aderen verbinden.Ontleed de vaten van de omliggende fibro-vetweefsels om de vasculaire pedikel te isoleren. Vervolgens ligate en verdeel de slagader en ader afzonderlijk om de radiale onderarmklep vrij te maken. Vervolgens kannuleer de pedikelvaten met 20 tot 24-gauge angiocatheter beveiligd met 3-0 zijden banden.Spoel heparinized zoutoplossing in de flap arteriële canule totdat een duidelijke veneuze uitstroom wordt waargenomen. Plaats tijdens het werken in een laminaire flow Biosafety-kast flappen in de weefselkamer van de bioreactor. Prime instroombuis met steriele gehepariniseerde zoutoplossing om restlucht te verwijderen en kleppen te plaatsen om verbinding tussen de flap arteriële canule en de mannelijke luerconnector mogelijk te maken.Gebruik vervolgens steriele hemostaten om de arteriële canule op de connector te schroeven. Spoel vervolgens de gehepariniseerde zoutoplossing door de stopkraan om te controleren of de luerverbinding zonder lekken is en of de flops kunnen worden doordrenkt met bewijs van veneuze uitstroom. Nadat u het deksel van de weefselkamer hebt gesloten, verbindt u de instroombuis met een gele 3-stops pompbuis met de instroomstop van de weefselkamer.Bevestig ook een inline druksensortransducer aan de instroom 3-weg stopkraan voor perfusiedrukbewaking. Schakel vervolgens de instroom peristaltische pomp in en ga op het beginscherm naar het derde tabblad met behulp van de pijl om de buis-ID in te stellen op 1,85 millimeter. Stel vervolgens de perfusiesnelheid in vanaf het tweede tabblad.De invoersnelheid als leveringsmethode is ingesteld op 2 milliliter per minuut. Zorg ervoor dat de stroomrichting correct is zoals weergegeven op het scherm. Laad de 3-stops pompslang naar de peristaltische pomp met een compatibele cassette.Stel de instelling van de uitstroompomp in op een snelheid van 4 milliliter per minuut. Verbind de uitstroombuizen met een gele 3-stops pompbuis met de uitstroomstop van de weefselkamer. Laad vervolgens de 3-stops pompslang naar de peristaltische pomp en start de stroom voor beide pompen door op de aan / uit-knop op elke pomp te drukken.Begin met de perfusie-decellularisatie van flappen met heparinized zoutoplossing in de weefselkamer gedurende 15 minuten om eventuele achtergebleven bloedstolsels te verwijderen. Vervang na voltooiing de resterende zoutoplossing door 500 milliliter natriumdodecylsulfaat of SDS-decellularisatieoplossing om de flap onder te dompelen. Breng vervolgens de instroomslang over naar de SDS-oplossing en breid het weefsel uit.Na SDS-decellularisatie aspirateert u het resterende SDS voordat u de klep gedurende één dag met PBS doordrenkt. Na SDS-perfusie-decellularisatie, perquentiële perfusie de flappen in DNA-oplossing gedurende twee uur en vervolgens in PBS gedurende één dag, gevolgd door het overbrengen van de instroombuizen in perazijnzuur en ethanol in gedestilleerd water om de flappen te steriliseren door gedurende drie uur te perfuseren. Als u klaar bent, verwijdert u de flappen aseptisch en dompelt u ze onder in twee wasbeurten van PBS met 1% antibiotica antimycotica gedurende elk 15 minuten.Bewaar flappen bij 4 graden Celsius totdat ze klaar zijn voor hercellulaireisatie. Gebruik een ponsbiopsietool van 3 tot 10 millimeter om weefselmonsters te verkrijgen voor de evaluatie van gedecellulariseerde flappen. De geïsoleerde gedecellulariseerde flappen die onder handmatige controle werden gespoeld, toonden bewijs van uitstroom uit de vrij drainerende veneuze canule van omentum, tensor fascia lata en radiale onderarmklep.De grove morfologie van het inheemse omentum, de tensor fascia lata en de radiale onderarmflappen leek onmiddellijk na de verkrijging roze gekleurd. Ter vergelijking: gedecellulariseerde weefsels waren karakteristiek wit of ondoorzichtig van uiterlijk. Histologisch onderzoek van inheemse weefsels met hematoxyline en eosine toonde de aanwezigheid van blauwe kernen aan.In gedecellulariseerde flappen onthulde histologische kleuring verlies van cellulair materiaal zonder blauwe nucleaire kleuring, wat wijst op een acellulair weefselsteiger. Aanvullende kwantificering van het DNA-gehalte toonde een significante afname van DNA in acellulaire steigers in vergelijking met inheemse weefsels. De belangrijkste overweging is een chirurgische techniek die tijdens de verkrijging wordt gebruikt, waarbij ervoor wordt gezorgd dat schade aan de flap-pedikel wordt voorkomen om daaropvolgende perfusiedecellularisatie mogelijk te maken.Na perfusie-decellularisatie kunnen de resulterende flappen worden gerecellulariseerd met weefselspecifieke celpopulaties om de inheemse weefselcompartimenten te regenereren.

procurement-perfusion-decellularization-porcine-vascularized-flaps

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Perfusie decellularisatie is een nieuwe techniek om hele lever scaffolds dat het orgel van de extracellulaire matrix samenstelling en microarchitectuur behoudt produceren. Hierin wordt de werkwijze voor het bereiden gehele orgel steigers met behulp van perfusie decellularisatie en de daaropvolgende herstel van de populatie met hepatocyten beschreven. Functionele en transplanteerbare lever enten kan worden gegenereerd met behulp van deze techniek.

Decellularisatie en Recellularization van Whole Levers

Een methode om snel en volledig cellulaire componenten uit een intact varkens hart door retrograde perfusie beschreven. Deze methode levert een plaatsspecifieke cardiale extracellulaire matrix scaffold die het potentieel voor gebruik in verscheidene klinische toepassingen.

Procedure voor decellularisatie van Varkens Heart van Retrograde coronaire perfusie

Decellularisatie van hele organen produceert natuurlijke biologische scaffolds die kunnen worden gebruikt voor regeneratieve geneeskunde. Er wordt een beschrijving gepresenteerd van een niet-menselijke primaatmodel van longregeneratie waarbij hele longen worden gedecellulariseerd en vervolgens worden gezaaid met volwassen stamcellen en endotheelcellen in een bioreactor die vasculaire circulatie en vloeibare media-ventilatie vergemakkelijkt.

Niet-menselijke primaat longdecellurisatie en recellerisatie met behulp van een gespecialiseerde bioreactor voor grote organen

Hier presenteren we een protocol om tissue engineered vaartuig enten die functioneel zijn voor het enten in muizen door dubbel zaaien gedeeltelijk geïnduceerde pluripotente stamcellen genereren (PiPSC) - afgeleide gladde spiercellen en PiPSC - afgeleide endotheelcellen op een gedecellulariseerde schip steiger bioreactor.

Generatie en enten van-Weefselmanipulatieproducten Schepen in een muismodel

Tot op heden worden defecten in dik weefsel meestal gereconstrueerd door autologe weefselflaps of geconstrueerde weefsels aan te brengen. In dit protocol presenteren we een nieuwe methode voor het maken van een gevasculariseerd weefselflap met een autologe steel, die dient als alternatief voor autologe flaps.

Engineered Gevasculariseerd Muscle Flap

De gepresenteerde technieken voor leveroogst, canulerings- en perfusietechnieken met behulp van ons eigen apparaat, maken geavanceerde perfusie-opstellingen mogelijk om de decellularisatie- en recellularisatie-experimenten in rattenlevers te verbeteren.

Procedure voor Decellularisatie van Rat Levers in een oscillerende druk perfusie Device

Deze methode kan decellularization voor een complexe solide orgel met behulp van een eenvoudig protocol gebaseerd op osmotische schok en perfusie van Ionische detergent met minimale orgel matrix verstoring. Het bestaat uit een roman decellularization-techniek voor menselijke harten binnen een hydrofoor etui met real-time bewaking van flow dynamics en cellulaire puin uitstroom.

Decellularization van gehele menselijk hart binnen een hydrofoor tasje in een omgekeerde richting

Het huidige protocol beschrijft het porcine fascio-cutane flap model en het potentiële gebruik ervan in gevasculariseerd samengesteld weefselonderzoek.

Een betrouwbaar porcine fascio-cutaan flapmodel voor gevasculariseerde composiet allografts bio-engineering studies

We beschrijven de chirurgische techniek en het decellularisatieproces voor samengestelde rattenachterpoten. Decellularisatie wordt uitgevoerd met behulp van natriumdodecylsulfaat met een lage concentratie via een ex vivo machineperfusiesysteem.

Verkrijging en decellularisatie van Rat Hindlimbs met behulp van een ex vivo perfusie-gebaseerde bioreactor voor gevasculariseerde composiet allotransplantatie

Dit protocol presenteert de opzet en werking van een nieuw ontwikkelde, 3D-geprinte bioreactor voor de ex vivo kweek van bloedvaten in perfusie. Het systeem is ontworpen om gemakkelijk door andere gebruikers te worden overgenomen, praktisch, betaalbaar en aanpasbaar aan verschillende experimentele toepassingen, zoals basisbiologie en farmacologische studies.

Ex Vivo Perfusiecultuur van grote bloedvaten in een 3D-geprinte bioreactor

Dit protocol beschrijft de chirurgische techniek voor het oogsten van een menselijk perforatorflapmodel gebaseerd op de diepe inferieure epigastrische arteriepedicle, bedoeld voor experimenteel onderzoek.

Een experimenteel menselijk DIEP-flapmodel om conserveringsstrategieën te onderzoeken voor vasculariseerde samengestelde allografts en vrije flappen

Leer perfusie-decellularisatie van gevasculariseerde porcine flappen in een aangepaste bioreactor. Deze veelzijdige methode ondersteunt weefselregeneratie en reconstructieve chirurgie door betrouwbare decellularisatie.

Inkoop en perfusie-decellularisatie van porcine gevasculariseerde flappen in een aangepaste perfusiebioreactor

Meer video's verkennen