Een gemodificeerde QuEChERS-HPLC-methode voor de detectie van polycyclische aromatische koolwaterstoffen in zebravisembryo's die zijn blootgesteld aan fijnstof

Dit onderzoek heeft tot doel een aangepaste QuEChERS-HPLC-methode te ontwikkelen om PAK's te kwantificeren in zebravisembryo's die zijn blootgesteld aan EOM, om de huidige kloof aan te pakken die wordt veroorzaakt door technische uitdagingen bij het meten van interne PAK's als gevolg van de massagrootte van de embryo's en de complexiteit van hun biologische matrix. Voor het verkrijgen van betrouwbare resultaten zijn 200 embryo's per groep nodig, wat een praktische uitdaging vormt. De combinatie van HPLC met een fluorescentiedetector zou de gevoeligheid van de methode verder kunnen verbeteren. In vergelijking met andere technieken verkort deze gemodificeerde QuEChERS-HPLC-methode de hangtijd van het monster aanzienlijk en biedt het een snelle en efficiënte aanpak voor het analyseren van de niveaus van 16 PAK's in zebravisembryo's die zijn blootgesteld aan EOM.

[Verteller] Bereid om te beginnen het QuEChERS-monster voor door 72 uur na de bevruchting de schaaltjes met de embryo's uit de couveuse te halen. Was de embryo's drie keer met zuiver water. Breng de embryo's over in buisjes van 1,5 milliliter en verwijder overtollig water. Plaats de buisjes 30 minuten in een vriezer van min 80 graden Celsius om de embryo's te lyofiliseren. Maal de embryo's na vriesdrogen met een glazen staaf. Voeg 25 microliter 16 polycyclische aromatische koolwaterstoffen of PAK's toe, meng standaardoplossing aan de DMSO-controlegroep om het herstel van spikes te testen. Voeg vervolgens een milliliter n-hexaan toe en vortex gedurende 30 seconden. Ultrasoonapparaat het mengsel op 35 graden Celsius gedurende 30 minuten. Centrifugeer het monster nu gedurende vijf minuten op 7.000 g. Breng het bovenstaande over in een nieuw buisje. Verdamp de verzamelde supernatanten tot droogte onder stikstofstroom in een waterbad van 35 graden Celsius. Voeg een milliliter acetonitril toe en vortex gedurende 30 seconden. Voeg 10 milligram primair secundair amine, 45 milligram magnesiumsulfaat en 15 milligram C18-pakking toe aan het monster en draai vervolgens gedurende 30 seconden. Centrifugeer gedurende vijf minuten bij 7.000 g en breng het bovenstaande over in een nieuwe buis. Verdamp het bovenstaande tot 0,5 milliliter onder stikstof en filtreer het monster door een microporeus membraan van 0,22 micrometer. Bereid een reeks werkoplossingen voor van één tot 500 nanogram per milliliter voor de 16 PAK-mengnorm met acetonitril. Injecteer 20 microliter van de monsteroplossingen in een vloeistofchromatograaf met behulp van een acetonitril- of watermobiele fase en volg de elutieprocedure die op het scherm wordt weergegeven. Teken een standaardcurve met massaconcentraties van de standaard werkoplossingen op de x-as en de bijbehorende piekgebieden op de y-as, met een bereik van vijf nanogram per milliliter tot 500 nanogram per milliliter. Injecteer het gezuiverde monster in de vloeistofchromatograaf die is uitgerust met een fluorescentiedetector, of FLD, en diode-arraydetector of DAD. Identificeer de aanwezigheid van PAK's door retentietijden te vergelijken. Meet piekgebieden om de concentratie te bepalen. Bereken ten slotte de interne concentraties van de 16 PAK's op basis van de gemeten massaconcentraties. De concentraties van polycyclische aromatische koolwaterstoffen, of PAK's, in zebravisembryo's 72 uur na de bevruchting worden in deze tabel weergegeven. Zes PAK's werden met succes gedetecteerd in geëxtraheerd organisch materiaal, of EOM, blootgestelde zebravisembryo's. Daarentegen werden slechts twee PAK's geïdentificeerd in de DSMO-controlemonsters, op niveaus die significant lager waren dan die in EOM-monsters.