Name: Een op GFP-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Leer een GFP-reconstitutiemethode om cel-celcontact via cytonemen in levende Drosophila-vleugelimaginale schijven te visualiseren. Dit protocol helpt onderzoekers groeifactortransport en weefselgroei te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ng, J. K., Tamura, K., Buscher, D., Izpisua-Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+basis+of+pattern+formation+during+vertebrate+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular basis of pattern formation during vertebrate limb development.</a> Curr Top Dev Biol. 41, 37-66 (1999).</li>
<li>Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+and+the+dispersion+of+morphogens%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytonemes and the dispersion of morphogens.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 3 (6), 445-463 (2014).</li>
<li>Daly, C. A., Hall, E. T., Ogden, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+mechanisms+of+cytoneme-based+morphogen+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Regulatory mechanisms of cytoneme-based morphogen transport.</a> Cell Mol Life Sci. 79 (2), 119(2022).</li>
<li>Ramirez-Weber, F. A., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes%3A+cellular+processes+that+project+to+the+principal+signaling+center+in+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cytonemes: cellular processes that project to the principal signaling center in Drosophila imaginal discs.</a> Cell. 97 (5), 599-607 (1999).</li>
<li>Hall, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme+delivery+of+Sonic+Hedgehog+from+ligand-producing+cells+requires+Myosin+10+and+a+Dispatched-BOC%2FCDON+co-receptor+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cytoneme delivery of Sonic Hedgehog from ligand-producing cells requires Myosin 10 and a Dispatched-BOC/CDON co-receptor complex.</a> Elife. 10, e61432(2021).</li>
<li>Sanders, T. A., Llagostera, E., Barna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+filopodia+direct+long-range+transport+of+SHH+during+vertebrate+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized filopodia direct long-range transport of SHH during vertebrate tissue patterning.</a> Nature. 497 (7451), 628-632 (2013).</li>
<li>Stanganello, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodia-based+Wnt+transport+during+vertebrate+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Filopodia-based Wnt transport during vertebrate tissue patterning.</a> Nat Commun. 6, 5846(2015).</li>
<li>Hall, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme+signaling+provides+essential+contributions+to+mammalian+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cytoneme signaling provides essential contributions to mammalian tissue patterning.</a> Cell. 187 (2), 276-293.e23 (2024).</li>
<li>Zhang, C., Brunt, L., Ono, Y., Rogers, S., Scholpp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+transport+of+active+Wnt5b-Ror2+complexes+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated transport of active Wnt5b-Ror2 complexes in zebrafish.</a> Nature. 625 (7993), 126-133 (2024).</li>
<li>Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+signaling+at+cytoneme+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate signaling at cytoneme synapses.</a> Science. 363 (6430), 948-955 (2019).</li>
<li>Wood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+with+complex+geometries+and+composition+extend+into+invaginations+of+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytonemes with complex geometries and composition extend into invaginations of target cells.</a> J Cell Biol. 220 (5), e202101116(2021).</li>
<li>Gonzalez-Mendez, L., Seijo-Barandiaran, I., Guerrero, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+cell-cell+contacts+for+Hedgehog+reception%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated cell-cell contacts for Hedgehog reception.</a> Elife. 6, e24045(2017).</li>
<li>Du, L., Sohr, A., Li, Y., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPI-anchored+FGF+directs+cytoneme-mediated+bidirectional+contacts+to+regulate+its+tissue-specific+dispersion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">GPI-anchored FGF directs cytoneme-mediated bidirectional contacts to regulate its tissue-specific dispersion.</a> Nat Commun. 13 (1), 3482(2022).</li>
<li>Roy, S., Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+contact-dependent+transport+of+the+Drosophila+decapentaplegic+signaling+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated contact-dependent transport of the Drosophila decapentaplegic signaling protein.</a> Science. 343 (6173), 1244624(2014).</li>
<li>Feinberg, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+Reconstitution+Across+Synaptic+Partners+%28GRASP%29+defines+cell+contacts+and+synapses+in+living+nervous+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">GFP Reconstitution Across Synaptic Partners (GRASP) defines cell contacts and synapses in living nervous systems.</a> Neuron. 57 (3), 353-363 (2008).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competitive+coordination+of+the+dual+roles+of+the+Hedgehog+co-receptor+in+homophilic+adhesion+and+signal+reception%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Competitive coordination of the dual roles of the Hedgehog co-receptor in homophilic adhesion and signal reception.</a> Elife. 10, e65770(2021).</li>
<li>Patel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+coordinate+asymmetric+signaling+and+organization+in+the+Drosophila+muscle+progenitor+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cytonemes coordinate asymmetric signaling and organization in the Drosophila muscle progenitor niche.</a> Nat Commun. 13 (1), 1185(2022).</li>
<li>Chen, W., Huang, H., Hatori, R., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+basal+cytonemes+take+up+Hedgehog+in+the+Drosophila+wing+imaginal+disc%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Essential basal cytonemes take up Hedgehog in the Drosophila wing imaginal disc.</a> Development. 144 (17), 3134-3144 (2017).</li>
<li>Huang, H., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myoblast+cytonemes+mediate+Wg+signaling+from+the+wing+imaginal+disc+and+Delta-Notch+signaling+to+the+air+sac+primordium%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Myoblast cytonemes mediate Wg signaling from the wing imaginal disc and Delta-Notch signaling to the air sac primordium.</a> Elife. 4, e06114(2015).</li>
<li>Hatori, R., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+produced+by+the+Drosophila+wing+imaginal+disc+induces+distinct+responses+in+three+target+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Hedgehog produced by the Drosophila wing imaginal disc induces distinct responses in three target tissues.</a> Development. 147 (22), dev195974(2020).</li>
<li>Rambaud, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slik+sculpts+the+plasma+membrane+into+cytonemes+to+control+cell-cell+communication%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Slik sculpts the plasma membrane into cytonemes to control cell-cell communication.</a> EMBO J. 44 (8), 2186-2210 (2025).</li>
<li>Gibson, M. C., Schubiger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripodial+cells+regulate+proliferation+and+patterning+of+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Peripodial cells regulate proliferation and patterning of Drosophila imaginal discs.</a> Cell. 103 (2), 343-350 (2000).</li>
<li>Gibson, M. C., Lehman, D. A., Schubiger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumenal+transmission+of+decapentaplegic+in+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Lumenal transmission of decapentaplegic in Drosophila imaginal discs.</a> Dev Cell. 3 (3), 451-460 (2002).</li>
<li>Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egfr%2FRas+pathway+mediates+interactions+between+peripodial+and+disc+proper+cells+in+Drosophila+wing+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Egfr/Ras pathway mediates interactions between peripodial and disc proper cells in Drosophila wing discs.</a> Development. 130 (20), 4931-4941 (2003).</li>
<li>Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+interactions+between+squamous+and+columnar+epithelia+of+the+Drosophila+wing+disc%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signaling interactions between squamous and columnar epithelia of the Drosophila wing disc.</a> J Cell Sci. 118 (Pt 15), 3363-3370 (2005).</li>
<li>Pedelacq, J. D., Cabantous, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+superfolder+and+split+fluorescent+protein+detection+systems+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Development and applications of superfolder and split fluorescent protein detection systems in biology.</a> Int J Mol Sci. 20 (14), 3479(2019).</li>
<li>Panneton, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+catalytic+and+non-catalytic+functions+of+the+Drosophila+Ste20+kinase+Slik+by+activation+segment+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Regulation of catalytic and non-catalytic functions of the Drosophila Ste20 kinase Slik by activation segment phosphorylation.</a> J Biol Chem. 290 (34), 20960-20971 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Discovery V12 dissectiemicroscoop</td><td>Zeiss</td><td></td><td>dissectiemicroscoop</td></tr><tr><td>Dumont #55 pincet, Biologie tips</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td>dissectiepincet</td></tr><tr><td>EP-Slik (slik20358)</td><td>BDSC</td><td>Panneton et al. 2015&nbsp;</td><td>vliegend ras voor het tot expressie brengen van Slik</td></tr><tr><td>FIJI</td><td></td><td>Schindelin J. et al. (2012)&nbsp;</td><td>beeldanalysesoftware</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>H3570&nbsp;</td><td>kernkleuring voor live imaging&nbsp;</td></tr><tr><td>LexAop-CD4-spGFP11&nbsp;</td><td>BDSC</td><td>93018</td><td>vliegend ras</td></tr><tr><td>LSM 700 confocale microscoop&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td></td><td>confocale microscoop</td></tr><tr><td>nub-GAL4</td><td>Bloomington Drosophila Stock Centre (BDSC)</td><td>86108</td><td>vliegend ras</td></tr><tr><td>PerM-LexA</td><td></td><td>Rambaud, Joseph et al., 2025</td><td>vliegend ras</td></tr><tr><td>PYREX 9-putjes glas spotplaten</td><td>Corning Life Sciences</td><td>7220-85</td><td>voor het verzamelen en wassen van larven</td></tr><tr><td>Schneider's Drosophila Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21720024</td><td>medium voor live imaging</td></tr><tr><td>SecureSeal beeldvormingsspaties, 8-putjes, 0,12 mm dik&nbsp;</td><td>Grace Bio-Labs</td><td>654008</td><td>spatie</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 siliconen elastomeerset</td><td>Sylgard</td><td>3097358-1004</td><td>voor het maken van dissectieplaten</td></tr><tr><td>UAS-CD4-spGFP1-10&nbsp;</td><td>BDSC</td><td>93017</td><td>vliegend ras</td></tr><tr><td>Zen Black</td><td>Zeiss</td><td></td><td>acquisitiesoftware</td></tr></tbody></table>

een op gfp-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de drosophila-vleugel

A GFP Complementation-based Dual-expression System for Assessing Cell-Cell Contact Mediated by Cytonemes in Live Drosophila Wing Imaginal Discs

Een op GFP-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel

Embryonic tissue growth and patterning are largely controlled by signals exchanged locally between cell populations within the tissues themselves. ...

a-gfp-complementation-based-dual-expression-system-for-assessing-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.

Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc

Drosophila hemocytes verspreiden over het geheel van de zich ontwikkelende embryo. Dit protocol laat zien hoe te monteren en het imago van deze migraties met behulp van embryo's met fluorescent gelabelde hemocytes.

Live-beeldvorming van Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migraties

De kinetochoor is waar de SAC initieert het signaal het toezicht op de mitotische segregatie van de zuster chromatiden. Een methode wordt beschreven om de werving en de omzet van een van de kinetochoor eiwitten en de coördinatie te visualiseren met het chromosoom beweging...

Studeren Mitotische Checkpoint door te laten zien Dynamic kinetochoor Protein Gedrag en Chromosoom Motion in Living<em&gt; Drosophila</em&gt; Syncytieel Embryo&#39;s

This video demonstrates the immunofluorescence staining of a transgenic Drosophila brain for single-cell imaging of glial cells. The brain expresses membrane-targeted proteins fused with different combinations of antigenic epitopes under the control of a glial-specific recombinase system. The isolated and fixed brains are stained with primary antibodies specific to the antigenic epitopes, followed by fluorophore-conjugated secondary antibodies. This labeling enables the simultaneous imaging of...

Immunofluorescence Staining of Drosophila Brains for the Single-Cell Imaging of Glial Cells

Dit protocol Gegevens een gestroomlijnde methode voor live cell imaging uitvoeren in het kader van een intact larvale hersenen. Live cell imaging benaderingen zijn van onschatbare waarde voor de studie van asymmetrische neurale stamcellen divisies evenals andere neurogene en ontwikkelingsprocessen, consequent blootleggen van mechanismen die eerder over het hoofd gezien.

Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvale neuroblasts

De volwassen structuren van Drosophila zijn afgeleid van zak-achtige structuren die imaginale schijven worden genoemd. Analyse van deze schijven biedt inzicht in vele ontwikkelingsprocessen, waaronder weefselbepaling, oprichting van compartimentgrenzen, celproliferatie, celbestemmingsspecificatie en cellulaire planaire polariteit. Dit protocol wordt gebruikt om imaginale schijven voor te bereiden op licht-/fluorescentiemicroscopie.

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit Drosophila melanogaster

Dit protocol presenteert een efficiënte methode voor het beeldvormen van het levende Drosophila pupale oogneuro-epitheel. Deze methode compenseert voor weefselbeweging en ongelijke topologie, verbetert de visualisatie van celgrenzen door het gebruik van meerdere GFP-gelabelde junctie-eiwitten en maakt gebruik van een eenvoudig te monteren beeldvormingsopstelling.

Live-beeldvorming van de Drosophila Pupal Eye

Cellen weergeven van verschillende morphologies en stellen een verscheidenheid van interacties met hun buren. Dit protocol wordt beschreven hoe te onthullen van de morfologie van afzonderlijke cellen en cel-cel interactie onderzoeken met behulp van de gevestigde Gal4/UAS expressie systeem.

Toepassing van MultiColor FlpOut techniek om hoge resolutie eencellige Morphologies en cel interacties van Glia in Drosophila te studeren

Hier bieden we een gedetailleerd protocol om live beeldvorming uit te voeren van de asymmetrische deling van germinale stamcellen (GSC's) in de Drosophila ovarium-niche. We gebruiken een transgene lijn die ubiquitair een groen fluorescent eiwit (GFP) tot expressie brengt, een fusie van het spectrosoom-eiwit Par-1.

Uitgebreide live beeldvorming van vrouwelijke Drosophila melanogaster kiembaanstammecellen niches

Expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie (EASI-FISH) is een robuuste techniek die expansiemicroscopie combineert met fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) om de expressie van meerdere genen in dik weefsel te detecteren. Dit protocol schetst recente vorderingen in de methode en de aanpassing ervan voor het labelen van het intacte Drosophila centrale zenuwstelsel..

Multiplex detectie van genexpressie in de intacte Drosophila hersenen met behulp van expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie

Dit artikel beschrijft een efficiënt protocol voor beeldende schijfdissectie en antistofkleuring dat zuinig is met reagentia en het hanteren van imaginale schijven in kleine aantallen vergemakkelijkt.

Kleinschalige dissectie en antilichaamkleuring van oog-antenne en vleugelbeeldschijven van Drosophila melanogaster

Leer een GFP-reconstitutiemethode om cel-celcontact via cytonemen in levende Drosophila-vleugelimaginale schijven te visualiseren. Dit protocol helpt onderzoekers groeifactortransport en weefselgroei te bestuderen.

Een op GFP-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel (Video) | JoVE Journal

Een op GFP-complementatie gebaseerd systeem met dubbele expressie voor het beoordelen van cel-celcontact gemedieerd door cytonemen in levende imaginaire schijven van de Drosophila-vleugel

Meer video's verkennen