Ekstrakcja biomarkerów z osadów - przyspieszona ekstrakcja rozpuszczalnikiem

1. Zebranie niezbędnych materiałów

1. Wyodrębnij próbki. Próbki (w tym przypadku osad) są zamrażane, liofilizowane, kruszone i homogenizowane przed ekstrakcją, a następnie ekstrahowane w grupach w celu maksymalizacji wydajności.
2. W zależności od wielkości próbki należy używać fiolek do pobierania próbek o objętości 40 lub 60 ml. Do tego eksperymentu używa się fiolek ze szkła borokrzemianowego (40 ml) i nakrętek bezpiecznych dla rozpuszczalników. Fiolki do spalania, pipety ze szkła borokrzemianowego i puszki wagowe w temperaturze 550 °C przez 6 godzin przed usunięciem ewentualnych zanieczyszczeń organicznych.
3. Dichlorometan (DCM) i metanol są powszechne w większości laboratoriów geochemii organicznej. Używaj ich pojedynczo (najpierw metanol, a następnie DCM) do płukania narzędzi laboratoryjnych i szkła przed użyciem. Mieszanina dichlorometanu z metanolem (MeOH; 9:1) jest stosowana w wielu laboratoriach do wydajnej ekstrakcji biomarkerów o szerokim zakresie polarności. Rozpuszczalniki powinny być wolne od zanieczyszczeń organicznych.
4. Zdobądź przyspieszony ekstraktor rozpuszczalnikowy do użycia w tym eksperymencie.

2. Przygotowanie komórek próbnych

1. Zbierz jedną celę na próbkę dla każdej próbki, która ma zostać wyekstrahowana, oraz jedną ślepą próbę.
   1. Dla każdej komórki przykręć zaślepkę na jednym końcu korpusu ogniwa.
   2. Umieść spalony filtr z włókna szklanego na każdej komórce za pomocą pęsety przepłukanej rozpuszczalnikiem. Następnie delikatnie i powoli wciśnij filtr do komórki za pomocą tłoka filtra.
   3. Oznacz ciała komórek numerami (e.g. 1 - 22) dla każdej próbki i napisz "puste" na pustej komórce.
   4. Wypełnij puste miejsce ziemią okrzemkową (lub piaskiem) i zakryj drugą zaślepką. Dokręć ręcznie.

3. Przygotowanie próbek

1. Umieść spaloną puszkę wagową na wadze laboratoryjnej, a następnie wytaruj.
2. Przepłukać szpatułkę laboratoryjną rozpuszczalnikiem, a następnie za jej pomocą przenieść odpowiednią masę próbki do szalki wagowej i zapisać masę.
   1. Masa próbki różni się w zależności od zawartości materii organicznej. Stosunkowo chudy materiał materii organicznej (błoto morskie) może wymagać kilku gramów, podczas gdy materiał bogaty w materię organiczną (tkanka liści) może wymagać znacznie mniej.
3. Przenieść cały materiał z blachy wagowej do przygotowanej celi ASE.
4. Umieść kolejny filtr z włókna szklanego na górze komórki, a następnie powoli i delikatnie dociśnij, aż dotrze do górnej części próbki za pomocą tłoka filtra.
5. Dodaj ziemię okrzemkową (lub piasek) do komórki, aż będzie prawie pełna. Uważaj, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia z gwintów korpusu komórki.
6. Zakryj górną część komórki inną zaślepką.
7. Powtórzyć kroki 3.1 - 3.6 dla każdej próbki.

4. Przygotowanie fiolek do pobrania

1. Oznaczyć każdą fiolkę numerem odpowiadającej jej komórki (np. 1 - 22 lub ślepą) i zakryć nakrętką fiolki do pobierania ASE.

5. Ekstrakcja

1. Umieść każdą komórkę próbki w ponumerowanym gnieździe na górnej tacy ASE.
2. Umieścić odpowiednią fiolkę do zbierania w tym samym gnieździe numerycznym na dolnej tacy ASE.
3. Utwórz metodę wyodrębniania przy użyciu klawiatury w środowisku ASE. Ekstrahować w temperaturze 100 °C i ciśnieniu 1 200 psi. Ekstrahować każdą próbkę 3 razy z 10-minutowym zatrzymaniem statycznym i przepłukać korpus komórki 50% jej całkowitej objętości między elektrostatycznymi uchwytami.
4. Upewnij się, że butelka z rozpuszczalnikiem zawiera wystarczającą ilość rozpuszczalnika, aby wyekstrahować wszystkie próbki.
5. Wypłucz ASE 3x przed rozpoczęciem pracy, naciskając przycisk "płukanie" na panelu sterowania ASE.
6. Naciśnij start.