JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:01 min. • April 30th, 2023
Metabolomika to badanie mające na celu identyfikację i ilościowe określenie metabolitów obecnych w komórkach. Aby przygotować próbkę, zacznij od wysiewu komórek raka piersi wraz z pożywką wzrostową na dwóch płytkach oznaczonych jako test i kontrola. Inkubować przez trzy dni w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Teraz usuń pożywkę i dodaj świeżą pożywkę z estradiolem na płytce testowej i zwykłą pożywkę na płytce kontrolnej.
Estradiol wiąże się z receptorem estrogenowym alfa w komórkach raka piersi w celu wywołania pewnych ekspresji, powodując zmianę składu metabolitów. Inkubuj płytki przez żądany czas. Zastąp pożywkę lodowatym roztworem soli fizjologicznej buforowanym fosforanem lub PBS, aby umyć komórki, a następnie dodaj lodowaty aceton. Lodowate odczynniki zatrzymują działanie proteaz, a tym samym zapobiegają degradacji białek.
Teraz użyj skrobaka, aby oderwać komórki od płytek i przenieś je do probówek za pomocą pipety. Weź 20 mikrolitrów tej zawiesiny komórek na hemocytometr i policz liczbę komórek. Próbki należy przechowywać w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do czasu wykorzystania ich do dalszej analizy. W poniższym protokole przygotowujemy próbki z komórek MCF-7 do chrom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych