Uzyskiwanie komórek pierwotnego raka jajnika z próbek litych: metoda hodowli komórek nabłonkowego raka jajnika z próbek guza jajnika

Komórki nabłonkowe obecne na zewnętrznej powierzchni jajnika mogą ulegać złośliwej transformacji w komórki rakowe, które mogą przekształcić się w guzy jajnika.

Aby wyizolować te nabłonkowe komórki raka jajnika lub EOC, zacznij od pobrania próbki guza jajnika i zmielenia jej na małe kawałki. Przenieść zmielone kawałki do probówki zawierającej bufor wytrawiający uzupełniony pożądanym enzymem proteazą.

Proteazy te degradują białka macierzy zewnątrzkomórkowej w tkance, uwalniając komórki EOC, erytrocyty i kilka zdysocjowanych fibroblastów do zawiesiny.

Przefiltruj zawiesinę komórek przez sitko, aby oddzielić zawieszone pojedyncze komórki od niezdysocjowanych kawałków tkanki. Odwirować zawiesinę w celu granulacji komórek EOC, erytrocytów i fibroblastów. Odrzucić supernatant zawierający enzym.

Zawiesić osad komórkowy w nabłonkowym pożywce wzrostowej i przenieść go do naczynia hodowlanego. Inkubuj kulturę, aby umożliwić komórkom EOC i fibroblastom przyczepienie się do podstawy szalki, podczas gdy erytrocyty unoszą się w pożywce.

Usuń zawieszone erytrocyty, odświeżając pożywkę. Z biegiem czasu pożywka ułatwia selektywny wzrost komórek EOC nad fibroblastami, tworząc monowarstwę komórek pierwotnego raka jajnika.

Pobrać próbkę z sali operacyjnej i przetransportować ją na lodzie do laboratorium. Pozostając w transportowanym pojemniku, umieścić próbkę w biologicznym kapturze bezpieczeństwa. Przenieś próbkę z 50-mililitrowej stożkowej rurki na szalkę Petriego o wymiarach 60 milimetrów na 60 milimetrów zawierającą 10 mililitrów świeżego, lodowatego PBS.

Następnie za pomocą sterylnej żyletki pokrój próbkę na 2 milimetry lub mniejsze kawałki. Następnie potraktuj DMEM dyspazą II w 15-mililitrowej stożkowej probówce. Przenieść zmielone tkanki do probówki z mieszaniną DMEM dispazy II. Następnie inkubuj próbkę w 5% dwutlenku węgla i temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut. Ręcznie mieszaj gnojowicę komórkową co pięć minut, aby zapewnić optymalne trawienie.

Po inkubacji przenieś zawiesinę komórek przez sitko o siatce 70 mikrometrów umieszczone na 50-mililitrowej stożkowej rurce. Delikatnie docisnąć siatkę za pomocą tłoka strzykawki. Wyrzuć wszelką niezdysocjowaną tkankę pozostałą na wierzchu siatki i zbierz uzyskaną zawiesinę komórek w 50-mililitrowej sterylnej stożkowej probówce.

Następnie odwirować stożkową probówkę o sile 320 x g przez siedem minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Wyrzuć supernatant i ponownie zawieś osad komórkowy w 10 mililitrach DMEM zawierającym 10% FBS i 1% PS. Następnie przenieś zawiesinę komórkową na szalkę Petriego i inkubuj zawiesinę w 5% dwutlenku węgla i 37 stopniach Celsjusza. Zmień pożywkę 24 godziny po początkowym posiewie, aby usunąć resztki komórkowe i większość erytrocytów obecnych w hodowli.

Na koniec należy zmieniać pożywkę co trzy dni przez kolejne dwa tygodnie, po czym hodowle pierwotnych komórek EOC są gotowe do dalszych zastosowań.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.