Zbieranie DRG z kręgosłupa szczura: procedura ekstrakcji zwoju korzenia grzbietowego z kręgosłupa modelu szczura

Zwoje korzenia grzbietowego lub DRG to skupiska ciał komórkowych neuronów czuciowych umieszczonych w kręgach po obu stronach rdzenia kręgowego. Ich podstawową funkcją jest przekazywanie czuciowych sygnałów neuronalnych z obwodowego układu nerwowego do ośrodkowego układu nerwowego.

Aby wyizolować zwoje korzenia grzbietowego, zacznij od pobrania świeżo pobranego kręgosłupa szczura. Przeanalizuj kręgosłup, aby oddzielić odcinek szyjny, piersiowy i lędźwiowy. Utrzymuj sekcje kręgosłupa w odpowiednim buforze, aby zapewnić nawodnienie tkanek.

Teraz ustaw odcinek piersiowy tak, aby jego grzbietowa strona była skierowana do góry. Podziel sekcję na dwie boczne połówki. Następnie zabezpiecz wyciętą połowę odcinka kręgosłupa, przyśrodkową stroną do góry. Delikatnie odłącz przecięty na pół rdzeń kręgowy - długą, rurkowatą strukturę - od segmentowanych kości kręgowych sekcji, aby odsłonić leżący pod spodem DRG.

DRG pojawiają się jako wyraźne białe masy z korzeniami grzbietowymi i brzusznymi osadzonymi w kanale kręgowym. Za pomocą cienkich kleszczy ostrożnie wyciągnij DRG, aby usunąć go z kanału kręgowego. Na koniec należy przenieść zebrany DRG na odpowiednie podłoże do dalszych zastosowań.

Oczyść skórę grzbietową szczura poddanego eutanazji 70% etanolem i użyj nożyczek, aby usunąć kręgosłup. Oddziel odcinek szyjny, piersiowy i lędźwiowy i umieść odcinki kręgosłupa w 10-centymetrowym naczyniu hodowlanym z PBS, aby utrzymać nawodnienie próbek tkanek.

Za pomocą delikatnych nożyczek do kości otwórz kości piersiowe i szyjne kręgów w części grzbietowej i brzusznej, aby rozdzielić kręgosłup na dwie boczne połowy, a następnie umieść skrawki tkanek w czystym 10-centymetrowym naczyniu ze świeżym PBS. Za pomocą kleszczy delikatnie odłącz rdzeń kręgowy od kości kręgów, aby uwidocznić zwoje korzenia grzbietowego.

Umieszczając końcówki pary cienkich kleszczy trzymanych pod każdym ganglionem, chwyć tkankę i wyciągnij ją z jamy kostnej, w której jest osadzona. Natychmiast po zbiorach umieść każdy ganglion w pożywce hodowlanej DMEM uzupełnionej 2% penicyliną i streptomycyną lub Pen/Strep i 10% płodową surowicą bydlęcą lub FBS, aby zapobiec bakteryjnemu zanieczyszczeniu tkanek nerwowych.