Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa: technika wstępnego rozdzielania i oznaczania ilościowego lipidów z neutrofili

Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa, HPTLC, jest zaawansowaną techniką analityczną służącą do rozdzielania różnych analitów przy użyciu drobnoziarnistych cząstek adsorbentu jako fazy stacjonarnej. Ta cecha ułatwia wydajne pakowanie, zapewniając lepszą separację.

Aby oddzielić lipidy za pomocą HPTLC, weź mieszaninę lipidów o różnej polarności uzyskaną z neutrofili. Teraz wstępnie zrównoważ płytkę w rozpuszczalniku organicznym, aby usunąć wszelkie ślady pary wodnej i brudu, a następnie aktywuj w wysokiej temperaturze, aby zapobiec zniszczeniu płytki.

Zastosuj mieszankę lipidów i wzorzec jako oddzielne miejsca w pobliżu podstawy płytki. Przenieś płytkę do szklanej komory nasyconej rozpuszczalnikiem polarnym - fazą ruchomą. Pozwól rozpuszczalnikowi przesunąć się w górę poprzez działanie kapilarne.

Podczas ruchu bardziej polarne lipidy migrują wzdłuż frontu rozpuszczalnika ze względu na ich powinowactwo do rozpuszczalnika polarnego. I odwrotnie, mniej polarne lipidy ulegają adsorpcji na cząsteczkach krzemionki i pozostają w tyle. Uruchom lipidy w rozpuszczalniku o pośredniej polarności, a następnie w rozpuszczalniku całkowicie niepolarnym, co spowoduje dalszą separację lipidów.