Indukcja martwiczego zapalenia jelit w ludzkim nabłonkowym modelu enteroidalnym

Uzyskanie krypt pochodzących z ludzkiej tkanki jelita cienkiego — kanalików zawierających komórki macierzyste i różne typy komórek nabłonkowych.

Dodaj krypty jelitowe do schłodzonej matrycy piwnicznej.

Przenieś tę mieszaninę na płytkę wielodołkową, tworząc trójwymiarową kopułę.

Dodaj pożywkę wzrostową i inkubuj.

Komórki macierzyste samoorganizują się, namnażają i różnicują w wiele typów komórek jelitowych, tworząc enterosfery.

Z biegiem czasu enterosfery dojrzewają do enteroidów – trójwymiarowych, samoodnawiających się struktur, przypominających krypty jelitowe.

Dodaj lipopolisacharydy lub LPS, endotoksynę bakteryjną, do studzienki zawierającej enteroidy i inkubuj.

Cząsteczki LPS wiążą się z receptorem toll-podobnym w enteroidzie, inicjując odpowiedź prozapalną, w wyniku której dochodzi do akumulacji reaktywnych form tlenu. To uruchamia kaskadę zdarzeń prowadzących do apoptozy.

W konsekwencji integralność enteroidu jest zagrożona, co prowadzi do przenikania LPS do światła, co dodatkowo nasila reakcję zapalną.

Naśladuje to rozwój martwiczego zapalenia jelit, ciężkiego stanu zapalnego w jelitach wcześniaków.

W momencie pobierania na salę operacyjną należy umieścić próbkę ludzkiej tka