Mysi model interpozycji aorty do badania odrzucenia naczyniowego wywołanego alloimmunologicznie

Przygotuj znieczuloną mysz dawcy i umieść ją w pozycji leżącej. Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić jamę brzuszną.

Uzewnętrznij jelito, aby zlokalizować podnerkową aortę brzuszną lub IAA pod tętnicami nerkowymi, przenosząc natlenioną krew.

Oddziel IAA od sąsiedniej żyły głównej dolnej, która przenosi odtlenioną krew.

Podwiązaj małe gałęzie w pobliżu IAA i zaciśnij IAA, aby utrudnić przepływ krwi.

Wytnij segment o odpowiedniej długości i umieść go w soli fizjologicznej.

Powtórz procedurę z myszą biorcą o innym tle genetycznym.

Wszczepić biorcę w biorcę, dopasowując go do jego orientacji anatomicznej.

Wykonaj zespolenia typu end-to-end, zszywając końcówki przeszczepu dawcy do końców biorcy.

Zwolnij zaciski i sprawdź, czy przepływ krwi jest normalny bez wycieków. Wróć z jelita do jamy brzusznej. Następnie zszyj miejsce nacięcia.

Model jest teraz gotowy do badania odpowiedzi immunologicznej na przeszczepiony przeszczep IAA.

Zacznij od umieszczenia myszy dawcy w pozycji leżącej na plecach na czystej, cienkiej płycie z pleksiglasu owiniętej sterylną zasłoną pod mikroskopem operacyjnym pod mikroskopem operacyjnym w powiększeniu 8-30X.

Po potwierdzeniu odpowiedniego znieczulenia chirurgicznego przez uszczypnięcie palca u nogi, użyj sterylnych nożyczek, aby wykonać pojedyncze nacięcie linii środkowej od łona do wyrostka mieczykowatego. Następnie użyj małego retraktora, aby otworzyć ściany brzucha, odsłaniając jamę brzuszną. Następnie użyj sterylnych aplikatorów z bawełnianą końcówką, aby delikatnie cofnąć jelita górnie do lewej strony zwierzęcia. Przykryj tkankę gazą zwilżoną solą fizjologiczną i przesuń narządy rozrodcze niżej, aby zlokalizować aortę podnerkową i żyłę główną dolną lub IVC.

Teraz użyj kleszczy medycznych numer 5, aby oddzielić aortę od IVC w lewej tętnicy nerkowej w pobliżu rozwidlenia. Następnie użyj nici monofilamentowych z poliamidu 10-0, aby podwiązać małe gałęzie w pobliżu aorty. Po oddzieleniu aorty dawcy i IVC należy nasycić naczynie solą fizjologiczną. Przykryj odsłonięty ubytek zwilżoną gazą i odłóż dawcę na bok w sterylnym miejscu.

Teraz umieść mysz biorcy pod mikroskopem i oddziel aortę biorcy od IVC, jak właśnie pokazano. Następnie umieść dwa 4-milimetrowe zaciski mikronaczyniowe proksymalnie i dystalnie do interesującego segmentu w odległości około 5 milimetrów od siebie. Następnie, za pomocą mikronożyczek Vannas-Tübingen, wykonaj pojedynczą aortomię poziomą i wytnij nie więcej niż 0,5 milimetra aorty brzusznej, aby pomieścić przeszczep aorty dawcy.

Zwróć dawcę do mikroskopu i przeciąć 3-4-milimetrowy segment przeszczepu, jak pokazano poniżej. Wtedy. Użyj igły 5/8 w rozmiarze 25, aby przepłukać wyciętą aortę heparynizowaną solą fizjologiczną, uważając, aby końcówka igły nie stykała się z naczyniem, i umieść naczynie w pojemniku z heparynizowaną solą fizjologiczną na lodzie.

W ciągu 30 minut od wycięcia należy umieścić przeszczep aorty dawcy w pozycji ortotopowej u biorcy, dopasowując odpowiednią orientację anatomiczną przeszczepu do orientacji biorcy. Następnie delikatnie chwyć osłonkę zewnętrzną naczynia i użyj kleszczy numer 5, aby ją lekko odwrócić. Teraz użyj kleszczy, aby wbić igłę przymocowaną do nici monofilamentowej z poliamidu 10-0 przez całą grubość ściany naczynia, aby przymocować przeszczep aorty dawcy do wyciętego naczynia biorcy.

W celu założenia ściegów ciągłych, umieść szwy podtrzymujące na godzinie 9 zarówno w górnym, jak i dolnym końcu przeszczepu. Następnie, zaczynając od górnego końca przeszczepu od godziny 3, zespolić wycięte końce dwoma szwami biegowymi i przymocować szew do szwu podciągowego. Następnie odwróć przeszczep i kontynuuj szew biegnący do grzbietowej części naczynia, spotykając się ze szwem początkowym. Zabezpiecz szew bez wywierania dużego nacisku na naczynie i powtórz szycie dla dolnego zespolenia.

Po zakończeniu zespolenia zwolnij dystalny zacisk mikronaczyniowy, aby umożliwić wsteczny przepływ krwi przez naczynie. Jeśli nie obserwuje się krwawienia, zwolnij proksymalny zacisk. Jeśli nie zaobserwuje się żadnych przeszkód związanych z krwią, użyj kleszczy, aby delikatnie chwycić jeden koniec szwów podtrzymujących i lekko odwrócić naczynie, aby sprawdzić tylną ścianę naczynia. Nie należy zaobserwować marszczenia się. Jeśli zaobserwuje się silny puls zarówno w naczyniu dawczym, jak i biorczym, użyj aplikatorów z bawełnianą końcówką, aby przywrócić jelita do jamy brzusznej.

Na koniec użyj uchwytu na igłę i kleszczyków Graefe, aby zamknąć ścianę brzucha za pomocą szwów polipropylenowych 5-0 i ciągłego szycia. Za pomocą zamknięcia podskórnego zamknij warstwę skóry tymi samymi szwami. Funkcję motoryczną kończyn tylnych można obserwować, aby ocenić powodzenie operacji.