JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:07 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki pokrytej ECM i skupisk nasion ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych w pożywce wzrostowej zawierającej inhibitory kinazy Rho.
ECM zwiększa przyczepianie komórek, podczas gdy inhibitory blokują kinazy Rho, zapobiegając apoptotycznej śmierci komórek i promując przeżycie i proliferację komórek.
Wprowadź pożywkę różnicowania neuronalnego, aby indukować różnicowanie komórek macierzystych w nerwowe komórki progenitorowe.
Leczyć roztworem odłączającym; enzymy w tym roztworze degradują ECM i kontakt komórkowy, uwalniając komórki.
Przenieść je do niepowlekanej kolby zawierającej inhibitory kinazy Rho.
Inhibitory ułatwiają przeżycie komórek i spontaniczną agregację w trójwymiarowe struktury lub sferoidy.
Uzupełnij sferoidy bogatą w czynnik wzrostu pożywką różnicującą neurony, umożliwiając neuronalnym komórkom progenitorowym różnicowanie się w progenitory astrocytów i tworzenie astrosfer.
Regularnie dodawaj roztwór odłączający, aby rozdzielić astrosfery na mniejsze gromady. Dzięki temu składniki odżywcze docierają do wewnętrznych komórek sferoidy i utrzymują ich żywotność.
Utrzymuj astrosfery w świeżym podłożu, aby przodkowie mogli dojrzeć do astrocytów.
Zacznij o
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych