Charakterystyka właściwości mechanicznych tkanki mózgowej myszy za pomocą mikroskopii sił atomowych

Weź naczynie pokryte bioadhezją z unieruchomionym wycinkiem mózgu myszy we wstępnie podgrzanym podłożu.

Umieść go na wstępnie rozgrzanym mikroskopie sił atomowych lub stoliku AFM, aby utrzymać warunki fizjologiczne.

Nanieś kroplę pożywki na sferyczną stopkę wspornika AFM umieszczoną nad głowicą AFM.

Następnie zmień położenie głowicy AFM i zanurz ją w medium.

Ustaw wiązkę laserową na wsporniku, aby śledzić ugięcie wspornika za pomocą fotodiody.

Opuść sondę AFM, aż zetknie się z powierzchnią tkanki mózgowej.

W celu pomiaru podatności pełzania należy zaprogramować sondę AFM tak, aby przykładała stałą siłę.

Siła ta powoduje deformację tkanki podczas wyginania się wspornika. Laser wykrywa

zginanie wspornika i mierzy sztywność tkanki.

Aby zmierzyć rozluźnienie siły, wciąć tkankę na ustaloną głębokość i utrzymać ją.

Laser śledzi zginanie wsporników w celu pomiaru oporu i relaksacji tkanek w czasie, umożliwiając precyzyjną ocenę właściwości mechanicznych tkanki.

Ostrożnie załaduj sondę AFM o nominalnej stałej sprężystości 0,03 niutona na metr i koraliku borokrzemianowym o średnicy 20 mikrometrów do uchwytu sondy. Umieść wycinek mózgu zamontowany na szalce Petriego na podgrzewaczu AFM stage, który został wstępnie podgrzany do 37 stopni Celsjusza.

Następnie dodaj około 2 mililitrów podgrzanego podłoża.

Następnie ostrożnie dodaj kroplę pożywki na sondę AFM, aby chronić ją przed pęknięciem z powodu napięcia powierzchniowego, gdy jest opuszczana do pożywki otaczającej wycinek mózgu. Następnie przenieś głowicę AFM na scenę. I zacznij opuszczać głowę, aż zostanie zanurzona w medium.

Za pomocą mikroskopu optycznego przesuń stolik tak, aby obszar zainteresowania znajdował się poniżej skalibrowanej sondy AFM. Następnie opuść sondę AFM, aby zetknąć się z powierzchnią tkanki. Aby przeprowadzić eksperymenty z pełzaniem, skonstruuj funkcję siły przyłożonej w edytorze funkcji oprogramowania.

Funkcja składa się z rampy od 0,1 sekundy do 0,05 nanoniutona, która jest utrzymywana przez 20 sekund, a następnie 1-sekundowej rampy do 0 nanoniutonów. Oprogramowanie będzie rejestrować dane dotyczące wgłębienia sondy AFM w tkance podczas funkcji przyłożonej siły. Po przeprowadzeniu eksperymentu zgodności pełzania przeprowadź eksperymenty relaksacji siły, tworząc zastosowaną funkcję wcięcia w oprogramowaniu. Uruchom tę funkcję, podczas gdy oprogramowanie zbiera dane o sile odczuwanej przez sondę AFM podczas wciskania się w tkankę.