Polisomy to kompleksy utworzone przez wiele rybosomów translujących pojedynczą nici mRNA.

Dlaczego używać mikroskopii sił atomowych do obrazowania?

AFM zapewnia rozdzielczość w skali nanometrów, umożliwiając szczegółową wizualizację struktur biologicznych.

Jaka jest znaczność obrazowania polisomów?

Obrazownie polisomów pomaga w zrozumieniu mechanizmów syntezy i regulacji białek.

Jak przygotowywane są próbki do AFM?

Próbki są przygotowywane poprzez przyczepienie polisomów do arkuszy miki i zabezpieczenie ich do obrazowania.

Jakie parametry obrazowania są ważne w tym badaniu?

Kluczowe parametry obejmują obszar skanowania, rozdzielczość i ustawienia skali Z dla optymalnego obrazowania.

Obrazowanie polisomów wyizolowanych z mózgu myszy za pomocą mikroskopii sił atomowych

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:28 min • May 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od arkusza miki z przylegającymi polisomami wyizolowanymi z tkanki mózgowej myszy.

Polisom to kompleks wielu rybosomów przyłączonych do nici RNA.

Za pomocą taśmy przymocuj arkusz miki do uchwytu na próbkę.

Umieść uchwyt próbki w stoliku mikroskopu sił atomowych.

Ustawić wstępnie zamontowany wspornik. Ustaw laser i detektor, aby zapewnić dokładne wykrywanie sygnału podczas obrazowania.

Dostosuj częstotliwość oscylacji wspornika, aby zoptymalizować wykrywanie cech powierzchni przy jednoczesnym zachowaniu integralności próbki.

Rozpocznij obrazowanie od oscylacji końcówki wspornika nad powierzchnią próbki.

Gdy końcówka napotyka podwyższoną powierzchnię polisomu, laser jest odchylany.

Te odchylenia lasera są wychwytywane przez detektor, który generuje obraz o rozdzielczości w nanoskali.

Użyj odpowiedniego oprogramowania, aby skorygować dowolne efekty przechyłu i dryfu, umożliwiając wizualizację polisomu.

Przymocować przygotowaną próbkę do uchwytu na próbkę AFM za pomocą taśmy dwustronnej. Następnie włożyć uchwyt na próbkę do stolika AFM zgodnie z instrukcjami producenta. Po kalibracji zbliżyć się do próbki, aż końcówka wspornika zatli się z powierzchnią.

Wybierz obszar skanowania o wymiarach 2 na 2 mikrony, rozdzielczość co najmniej 512 na 512 pikseli. Wybierz tryb odejmowania tła na żywo i wybierz skalę Z od 20 do 25 nanometrów. Następnie rozpocznij akwizycję obrazu. Sprawdź obraz, szukając obecności okrągłych obiektów charakteryzujących się wysokością od 10 do 15 nanometrów podczas pozyskiwania obrazów w powietrzu.

Następnie dostosuj wartość zadaną i parametry sprzężenia zwrotnego, aż zostaną wyświetlone ostre obiekty. Tło powinno wydawać się stosunkowo płaskie w dobrych próbkach z obiektami o wysokości od 2 do 4 nanometrów. Gdy obraz wygląda dobrze, wykonaj kilka skanów o wymiarach 2 na 2 mikrony w różnych obszarach próbki.