Analiza ultrastrukturalna wycinka mózgu myszy z wykorzystaniem transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Weźmy na przykład fragment mózgu myszy umocowany tetratlenkiem osmu osadzony w bloku żywicy.

Uzyskaj obraz przekroju i wyrównaj go z wcześniej przygotowanym obrazem atlasu, aby zidentyfikować obszar zainteresowania.

Zaznacz granice tego regionu na bloku.

Podgrzej żywicę, aby ją zmiękczyć i wyciąć zaznaczony obszar.

Przyklej próbkę do szklanego pręta mocującego i przytnij ją.

Za pomocą ultramikrotomu przygotuj półcienkie i ultracienkie sekcje.

Przenieś sekcje półcienkie i ultracienkie odpowiednio na nośniki szklane i siatki niklowe.

Wybarwić półcienkie odcinki barwnikiem, który wiąże się z kwasami nukleinowymi, cytoplazmą bogatą w rybosomy i macierzą zewnątrzkomórkową.

Umyj skrawki i zbadaj je pod mikroskopem świetlnym, aby potwierdzić obecność obszaru docelowego.

Obserwuj ultracienkie skrawki pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym.

Tetratlenek osmu zwiększa gęstość elektronową błon komórkowych i organelli, zapewniając wysoki kontrast z cytoplazmą o mniejszej gęstości elektronów, umożliwiając wizualizację ultrastruktury komórkowej.

Aby zmapować obszar zainteresowania, należy wybrać obraz zawierający obszar zainteresowania z wcześniej przygotowanego atlasu obrazów. Naszkicuj granice obszar