Charakterystyka genetycznie modyfikowanych mezenchymalnych komórek macierzystych do zastosowań neuroterapeutycznych

Zacznij od transgenicznych mezenchymalnych komórek macierzystych myszy - multipotencjalnych komórek pochodzących ze szpiku kostnego.

Komórki są zaprojektowane tak, aby wyrażać GFP i terapeutyczne czynniki neurotroficzne, które wspierają wzrost i przeżycie neuronów.

Umyj komórki buforem i utrwal je, aby zachować integralność komórkową.

Ponownie przemyć buforem, a następnie dodać roztwór, aby przeniknąć błony komórkowe i jądrowe oraz zablokować niespecyficzne miejsca wiązania.

Wprowadzić przeciwciała pierwszorzędowe skierowane przeciwko białku markerowemu proliferacji komórek ulegającemu ekspresji wyłącznie w jądrze dzielących się komórek.

Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.

Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem skierowane do przeciwciał pierwszorzędowych i barwnik wiążący DNA, aby przeciwdziałać barwieniu jąder.

Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych odczynników.

Załaduj płytkę do systemu przesiewania o wysokiej zawartości i uchwyć obrazy w celu wykrycia sygnałów fluorescencyjnych.

Ekspresja markera proliferacji komórek wskazuje na aktywny podział komórek, co sugeruje przydatność komórek transgenicznych do zastosowań neuroterapeutycznych.

Aby