Zastosowanie cystometrii u małych gryzoni: badanie chemosensacji pęcherza moczowego

Celem tej procedury jest określenie wpływu związków chemicznych na funkcje magazynowania i mikcji pęcherza moczowego. Osiąga się to poprzez uprzednie wszczepienie cewnika do pęcherza moczowego. Po krótkim okresie rekonwalescencji przez cewnik przez cewnik podaje się roztwór kontrolny.

Ponieważ ciśnienie śródpęcherzowe i objętość mikcji są rejestrowane przez kolejne 30 minut, zwierzę jest podawane w infuzji interesującego związku. Ostatecznie wyniki mogą pokazać, w jaki sposób drażniące substancje chemiczne wpływają również na wzorzec mikcji poprzez analizę częstotliwości oddawania moczu. Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak rejestracja kurczliwości izolowanego pęcherza moczowego, jest to, że funkcję tego narządu można badać w bardziej fizjologicznych warunkach.

Na przykład zachowane są działania regulacyjne ośrodkowego układu nerwowego. Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ etapy operacji są trudne do nauczenia, ponieważ istnieje wiele szczegółów technicznych i manewrów, których należy przestrzegać, aby zapewnić sukces eksperymentu. Aby przygotować rurkę, którą chcesz wszczepić do pęcherza moczowego, najpierw odetnij rurkę PE 50 na żądaną długość i umieść mały biały kawałek cewnika o rozmiarze 18 na cewnik główny.

Następnie utwórz mały mankiet na końcu, paląc jeden koniec rurki i przepłucz go solą fizjologiczną, aby usunąć powietrze. Teraz wywołaj znieczulenie u 10 do 12 tygodniowej samicy szczura za pomocą izofluoru. Po wywołaniu znieczulenia należy ustalić poziom utrzymania izofluoru.

Ułóż zwierzę na jego grzbiecie i umieść małą maskę anestezjologiczną wykonaną ze strzykawki o pojemności 10 cm3. Po ogoleniu brzucha i zdezynfekowaniu skóry właściwej przystąp do zabiegu. Poniższa operacja jest wykonywana zarówno na szczurach, jak i myszach w ten sam sposób.

Zacznij od wykonania laparotomii w dolnej linii środkowej, aby odsłonić pęcherz. Następnie rozpoczyna się najbardziej krytyczna część operacji. Pod mikroskopem chirurgicznym umieść szew sznurkowy w kopule pęcherza moczowego za pomocą niewchłanialnej żyłki six zero szew

Następnie za pomocą igły wykonaj małą cystostomię wewnątrz sznurka torebki. Wprowadzić cewnik PE 50 z mankietem przez ten otwór. Cieńsze rurki cewnika, takie jak PE 10, mogą mieć wyższy i bardziej zmienny opór, więc nie są zalecane.

Zabezpiecz sznurek torebki wokół rurki za pomocą węzła chirurgicznego. Następnie delikatnie wyciągnij cewnik na zewnątrz, aż końcówka mankietu znajdzie się bezpośrednio pod szwem. Kawałek cewnika o rozmiarze 18 jest popychany w kierunku szwu, aby zapobiec przeciekaniu.

Sprawdź, czy nie ma wycieków między cewnikiem a pęcherzem. Z delikatnym naparem z soli fizjologicznej. Dokręcić wszelkie przecieki za pomocą dodatkowych szwów.

Teraz zamknij mięśnie brzucha za pomocą szwów monofilamentowych, pozostawiając przejście dla cewnika w górnej części nacięcia. Tunel cewnika w obszarze międzyłopatkowym za pomocą pustego metalowego pręta, zapobiegając w ten sposób gryzieniu rurki przez zwierzęta. Po zabiegu metalowy pręt należy umieścić pod skórą oraz nad mięśniami brzucha i grzbietu.

Przepchnij pręt przez zwierzę podskórnie do obszaru międzyłopatkowego. Operację należy zakończyć zamykając mięśnie brzucha i skórę niewchłanialnymi szwami monofilamentowymi. Teraz bardzo ważne jest sprawdzenie przepuszczalności i stabilności wszczepionego cewnika poprzez przepłukanie go solą fizjologiczną.

Roztwór do infuzji powinien opuścić pęcherz, uruchomić cewkę moczową. Po podaniu środka przeciwbólowego podskórnie zamknij zewnętrzny koniec cewnika folią z tworzywa sztucznego i zakotwicz cewnik do skóry w dolnej części pleców szczura. Na koniec pozwól zwierzęciu dojść do siebie przez 30 minut.

Przed rozpoczęciem cytometrii upewnij się, że przyrządy zostały prawidłowo skalibrowane. Umieść szczura w klatce metabolicznej nad pojemnikiem zawierającym olej, który spoczywa na wadze cyfrowej. Następnym krokiem jest podłączenie wszczepionego cewnika do trójdrożnego kranu za pomocą króćca przynęty.

Kran powinien być podłączony do przetwornika ciśnienia i pompy infuzyjnej. Przetwornik ciśnienia jest następnie podłączony za pomocą wzmacniacza do systemu akwizycji danych, a komputer, który wykorzystuje publicznie dostępne oprogramowanie, rozpoczyna pomiary kontrolne od uruchomienia pompy infuzyjnej w celu wkroplenia soli fizjologicznej do pęcherza. W ciągu 30 minut klatka metaboliczna jest zawieszona na wadze cyfrowej, która służy do oszacowania objętości opróżnionej przestrzeni szczura.

Ciśnienie śródpęcherzykowe jest rejestrowane, gdy pęcherz napełnia się i opróżnia. W kolejnym kroku leki mogą być podawane ogólnoustrojowo lub dopęcherzowo przez kolejne 30 minut zbierania danych. Po zakończeniu eksperymentu zwierzę powinno zostać złożone w ofierze.

Typowy ślad ciśnienia u szczura pokazuje, że podczas wlewu płynów następuje powolny wzrost ciśnienia w pęcherzu, aż do osiągnięcia określonego progu. Następnie pęcherz moczowy skurczy się, a zwieracz moczu otworzy się, umożliwiając przejście wkroplonego roztworu przez cewkę moczową. W związku z tym pęcherz jest opróżniany.

Skurcz ustanie, a ciśnienie ponownie spadnie do poziomu podstawowego. Dane zebrane za pomocą myszy mają wszystkie te same funkcje. Cytometria została wykorzystana do identyfikacji celów molekularnych oleju musztardowego lub mo MO jest wysoce reaktywnym związkiem, który od dawna jest stosowany w eksperymentalnych modelach zapalenia i przebarwień narządów trzewnych, takich jak pęcherz moczowy.

Zgodnie z oczekiwaniami, infuzja dopęcherzowa 10 milimolowych MO spowodowała silne zmniejszenie odstępu skurczu u myszy typu dzikiego. Co ciekawe, myszy z niedoborem receptora MO T RPA A miały wynik podobny do dzikich typów w tych samych warunkach. W przeciwieństwie do tego, MO wywołał znacznie słabszą zmianę parametrów systemowych u myszy TRP V z jednym nokautem niż u myszy typu dzikiego, podwójne nokauty zarówno TRPA jeden, jak i TRP V jeden, które prawie nie reagowały na dawkę M mo.

Dane sugerują, że TRP V one może odgrywać kluczową rolę w podrażnieniu trzewnym wywołanym przez mo. Średnia chwilowa częstość oddawania moczu przed i podczas dopęcherzowej infuzji MO potwierdza te dane. Średnia częstość występowania jest względna w stosunku do naparu z soli fizjologicznej.

Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby upewnić się, że cewnik pozostaje mocno przymocowany do pęcherza, aby nie doszło do wycieku roztworu do wstrzykiwania do jamy brzusznej. Po obejrzeniu tego filmu powinien dobrze zrozumieć, jak mierzyć ciśnienie śródpęcherzowe, co pociąga za sobą implantację cewnika w pęcherzu moczowym i umieszczenie obudzonych lub znieczulonych zwierząt w fazie cytometrii pod kontrolowaną obfitością pęcherza.