Ocena różnic w zdolności konkurencyjnej plemników u Drosophila

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest przetestowanie różnic w zdolności konkurencyjnej plemników wśród Drosophila, samców melanogaster o różnych genotypach. Osiąga się to poprzez śledzenie widocznych markerów genetycznych, które identyfikują ojcostwo potomstwa samicy kojarzonej z dwoma różnymi samcami, genotypami w teście, samice najpierw mogą kojarzyć się z referencyjnym samcem, a następnie mogą kojarzyć się z eksperymentalnym samcem. Frakcję potomstwa urodzonego przez doświadczalnego samca wnioskuje się poprzez badanie koloru oczu potomstwa.

Wyniki pośrednio porównują zdolność konkurencyjną eksperymentalnych plemników męskich na podstawie ich względnej wydajności w stosunku do referencyjnych plemników męskich. Metody te mogą pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania z zakresu genetyki i ewolucji w dziedzinach biologii, takie jak ocena wpływu czynnika genetycznego na konkurencyjną zdolność SPR, wykazując, że ta procedura będzie S i studentów naszego laboratorium. Poniższy protokół ilustruje analizę czynnika genetycznego zwanego sic, który przypuszczalnie koduje białko zaangażowane w ruchliwość plemników.

Zacznij od ustawienia od 15 do 20 fiolek do każdej fiolki. Lekko posyp podłoże kilkoma suszonymi aktywnymi granulkami drożdży. Aby ułatwić ove pozycję.

Zawsze używaj świeżych pożywek, takich jak pożywka drożdżowa z mąki kukurydzianej. Następnie do każdej fiolki dodaj od ośmiu do 10 samic, ale nie więcej, i dodaj pięć samców. Identyfikację płci można osiągnąć poprzez oględziny kilku różnic morfologicznych.

Przechowywać fiolki w temperaturze 25 stopni Celsjusza i przenosić dorosłe osobniki do nowych fiolek co najmniej co trzy do pięciu dni. Przenoś dorosłe osoby co drugi dzień, aby uzyskać najlepszy wynik. Zachować fiolki z jajem w celu zebrania potomstwa.

Wymagana liczba fiolek będzie zależała od liczby eksperymentalnych typów męskich w badaniu i szacowanej liczby osób potrzebnych do uzyskania mocy statystycznej. Cztery lub pięć dni po przeniesieniu rodziców z fiolki należy zwiększyć dostępną powierzchnię do przepoczwarzenia w fiolce, wkładając do niej wielokrotnie złożony papier. Zbadaj fiolki pod kątem pociemniałych poczwarek, gdy są widoczne.

Muchy te pojawią się w ciągu 24 godzin, od 11 do 12 dni po pierwszym ustawieniu krzyżówki. Rozpocznij zbieranie dziewiczych samic i naiwnych samców z tych fiolek. Z samego rana wyrzuć muchy, które pojawiły się w nocy.

Następnie raz lub dwa razy w ciągu dnia, w odstępach od czterech do sześciu godzin, zbierz muchy z fiolek, znieczul muchy, wprowadzając dwutlenek węgla do fiolki. Następnie stukaj muchy w dół i uprawiaj z nimi seks pod mikroskopem stereoskopowym. Umieść pożądane muchy w różnych fiolkach według płci i fenotypu i odpowiednio oznacz fiolki.

Nie należy ładować fiolek potencjalnie więcej niż 10 fiolkami. Dziewicze samice ustawiają na muchach od 12 do 12 jasny cykl ciemności, aby regulować ich czas okluzji na twoją korzyść. Szczytowe czasy okluzji występują od jednej do dwóch godzin po subiektywnym świcie i dwie godziny przed wyłączeniem świateł.

Istnieją dwie wersje tego eksperymentu. Nazywa się je testem ataku i testem obrony. W tej sekcji opisano, jak przeprowadzić test ofensywny rano pierwszego dnia, ustawić pierwsze krycie za pomocą aspiratora.

Aspirator składa się z kawałka rurki przymocowanej do końcówki pipety z barykadą, która utrzymuje zasysane muchy w końcówce. Otwór końcówki jest poszerzony. Dla much ustawiono fiolki zawierające dziesięć cztero- lub pięciodniowych dziewiczych samic.

Z 10 naiwnymi samcami referencyjnymi ustawiają dwie do trzech takich fiolek dziennie przez pięć kolejnych dni. Dla każdej fiolki pozwól muchom łączyć się w pary przez dwie godziny, a następnie wyrzuć referencyjne samce i przenieś każdą samicę do nowej fiolki za pomocą etykiety aspiratora, każdej fiolki V i pozostaw samicę w fiolce na dwa dni. Trzeciego dnia zorganizuj drugie krycie dla naiwnych samców o innym genotypie dla każdej samicy.

Dwie godziny przed subiektywnym zapadnięciem zmroku użyj aspiratora, aby przenieść samicę do nowej fiolki z trzyma, pięcioma lub sześciodniowymi eksperymentalnymi samcami o tym samym genotypie. Oznaczyć fiolki genotypem męskim i oznaczyć nową fiolkę V dwa. Następny poranek to dzień czwarty.

Na dwie godziny przed subiektywnym lotem, świt odrzuca samce za pomocą aspiratora. Szóstego dnia przenieś każdą samicę do innej nowej fiolki oznaczonej V trzy. 10 dnia wyrzuć samice 17 dnia.

Sprawdzić fiolki V jeden od potomstwa. Ustal, czy samica była dziewicą, czy nie, gdy została pokryta listwą referencyjną i czy kojarzyła się z listą referencyjną. Tego samego dnia należy zbadać potomstwo z dwóch fiolek V, powalając muchy węglem.

Posortuj je według koloru oczu i płci. Następnie zapisz liczbę potomstwa spłodzonego przez pierwszego i drugiego samca. W tym eksperymencie tylko potomstwo płci żeńskiej może być jednoznacznie przypisane jako cicis przez odniesienie lub doświadczalne samce.

W innych eksperymentach różne markery genetyczne mogą być również wykorzystane do określenia ojcostwa męskiego potomstwa. Odrzucić badane potomstwo, ale zachować dwie fiolki V przez sekundę. Badanie w 20 dniu, odnotować ojcostwo potomstwa z V dwóch fiolek po raz drugi i dokonać pierwszego oględzin potomstwa z V trzech fiolek

Następnie, trzy dni później, w 23 dniu, sprawdź powstałe potomstwo w V trzy. Ponownie, zarejestrowane liczenie potomstwa powinno być odpowiednio zorganizowane, aby ułatwić kontrolę wzrokową i wydajną analizę, z pakietem statystycznym dla każdej samicy i liczeniem od V 2 i V 3. Aby obliczyć całkowitą liczbę potomstwa urodzonego przez referencyjnego samca i doświadczalnego samca, należy obliczyć wynik P dwa dla każdej samicy jako stosunek potomstwa urodzonego przez doświadczalnego samca w stosunku do potomstwa zarówno od doświadczalnych, jak i referencyjnych samców.

Niektóre samice muszą być wykluczone z analizy. Po pierwsze, te bez potomstwa lub z bardzo ograniczonym potomstwem, drugie samice, które zmarły podczas zabiegu, i trzecie samice, które zostały skutecznie zapłodnione tylko przez jednego z dwóch samców. Poszukaj różnic statystycznych w dwóch wartościach P.

Wśród eksperymentalnych typów męskich stosuje się testy parametryczne lub nieparametryczne oparte na skośności rozkładu wartości P dwóch oraz zależności między wariancją a średnią proporcją. Dane zwykle nie są rozprowadzane normalnie. Transformacja znaku łuku, znana również jako transformacja kątowa, może być zastosowana do oryginalnych wartości P dwie przed testem T-studenta lub testem NOVA lub po prostu użyć testów nieparametrycznych, takich jak dwa eksperymenty ofensywne WIL Coxin z drosophila melanogaster.

Eksperymentalne samce przeprowadzono jeden z funkcjonalnym klastrem ESIC i bez niego. W sumie od 58% do 83% kobiet było pouczających. Samce bez funkcjonalnego klastra ESIC wykazywały znacznie niższe wyniki P 2 w porównaniu z samcami z nienaruszonym klastrem esic.

Oznacza to, że klaster SIC zwiększa zdolność konkurencyjną plemników. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przeprowadzać eksperymenty z podwójnym kryciem, dzięki czemu możesz wykryć różnice w zdolności konkurencyjnej plemników między zmutowanymi i kontrolnymi samcami.