Analiza pętli ciśnienie-objętość serca za pomocą cewników konduktancyjnych u myszy

Ogólnym celem tej procedury jest ocena zależnych od obciążenia i niezależnych pomiarów funkcji komorowej, skurczowej i rozkurczowej. Osiąga się to najpierw poprzez umieszczenie cewnika konduktanckiego w lewej komorze serca myszy. W drugim etapie aorta jest zwężana w celu zmiany obciążenia następczego, po którym następuje zmiana obciążenia wstępnego poprzez zwężenie żyły dolnej cva.

W ostatnim etapie cewnik konduktancyjny jest starannie kalibrowany, aby dokładnie ocenić zmiany w objętości komory serca. Ostatecznie analiza objętości ciśnienia sercowego służy do uzyskania zależnych od obciążenia i niezależnych pomiarów czynności serca. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku terapii dysfunkcji serca, ponieważ pozwala ona zarówno na rygorystyczną ocenę funkcji serca, jak i na potencjał w maskowaniu fenotypów funkcjonalnych pominiętych w testach nieinwazyjnych.

Tę procedurę zademonstruje dr Lan Mao, neurochirurg myszy z naszego laboratorium, na 30 minut przed umieszczeniem cewnika konduktanckiego w komorze lewej komory. Namocz końcówkę cewnika w ciepłym roztworze soli fizjologicznej, podczas gdy końcówka moczy. Ogol szyję i klatkę piersiową znieczulonej dorosłej myszy i umieść zwierzę na podgrzewanej podkładce.

Po nałożeniu maści na oczy zwierzęcia wykonaj nacięcie w linii środkowej szyi i wypreparuj mięśnie tchawicy, aby odsłonić tchawicę. Następnie umieść rurkę dotchawiczą w ustach, wizualizując tchawicę w celu prawidłowego umieszczenia rurki i podłącz rurkę do respiratora. Ustaw ustawienia respiratora w zależności od wagi zwierzęcia, jak wskazano.

Następnie, aby umieścić cewnik z dostępu szyjnego, wykonaj nacięcie nad prawą tętnicą szyjną od żuchwy do mostka i wypreparuj otaczającą tkankę, aby odsłonić prawą tętnicę szyjną. Następnie przetnij nerw błędny, który biegnie w sąsiedztwie tętnicy szyjnej i zabezpiecz jedwabny sześcian wokół dystalnego końca tętnicy szyjnej. Umieść dwa dodatkowe szwy pod tętnicą szyjną proksymalnie do pierwszego szwu, luźno wiążąc szew środkowy.

Następnie delikatnie pociągnij szew proksymalny i za pomocą zacisku przymocuj szew do skóry. Po zaciśnięciu tętnicy szyjnej zarówno proksymalnie, jak i dystalnie wykonaj małe nacięcie w prawej tętnicy szyjnej proksymalnie do pierwszego szwu i rozciągające się podłużnie w kierunku klatki piersiowej. Teraz włóż końcówkę cewnika konduktanckiego nasączonego solą fizjologiczną do naczynia przez nacięcie za pomocą środkowego szwu, aby zabezpieczyć cewnik.

Następnie delikatnie wsuń cewnik do lewej komory przez tętnicę szyjną. Obserwowanie śledzenia pętli objętości ciśnienia w celu zapewnienia prawidłowego umieszczenia, optymalne umieszczenie cewnika spowoduje powstanie pętli objętości ciśnienia, które wydają się prostokątne przez pięć do 10 minut po zapisie umieszczenia Pętle objętości ciśnienia wyjściowego, aż do osiągnięcia stanu ustalonego w celu umieszczenia cewnika metodą podejścia wierzchołkowego. Wykonaj początkowe nacięcie od wyrostka mieczykowatego przez ścianę klatki piersiowej bocznie, aż przepona będzie widoczna.

Przeciąć przeponę, aby uwidocznić wierzchołek serca i użyj igły o rozmiarze od 25 do 30, aby wykonać ranę kłutą w wierzchołku lewej komory. Następnie wprowadzić cewnik konduktujący przez ranę kłutą, aż elektroda proksymalna znajdzie się tuż wewnątrz komory. I zapisz pętle objętości ciśnienia podstawowego, jak właśnie pokazano, aby zmieniać obciążenie następcze wraz z przejściową okluzją aorty.

Zacznij od wykonania małego poziomego nacięcia w górnej części klatki piersiowej i wypreparuj otaczającą tkankę, aby odsłonić aortę poprzeczną. Umieść jedwabną ligaturę 6.0 pod aortą poprzeczną. Następnie, gdy pętle objętości ciśnienia powrócą do linii podstawowej, umieść oba końce ligatury w małym segmencie rurki klasy PE 50 oba końce szwu za pomocą zacisku igły i delikatnie i powoli podnoś szew przez okres jednej do dwóch sekund, po czym następuje powolne zwalnianie napięcia na naczyniu.

Optymalne zapisy powinny mieć co najmniej pięć cykli pętli objętości ciśnienia i wykazywać stały wzrost końcowego ciśnienia skurczowego podczas przykładania naprężenia na szew. Aby zmienić napięcie wstępne za pomocą przejściowej okluzji CVA żyły dolnej. Wykonaj pionowe nacięcie poniżej wyrostka mieczykowatego i pod przeponą, aby odsłonić żyłę dolną cva.

Umieść sześcioma jedwabną ligaturę pod żyłą dolną cva. Następnie, po tym, jak pętle objętości ciśnienia powrócą do linii podstawowej, zaciśnij oba końce szwu zaciskiem igły i delikatnie i powoli podnieś szew przez okres jednej do dwóch sekund, po czym nastąpi powolne zwalnianie napięcia na naczyniu. Optymalne zapisy powinny mieć co najmniej pięć cykli pętli objętości ciśnienia i wykazywać stały spadek ciśnienia w lewej komorze i rozkurczu podczas przykładania napięcia do szwu w celu wykonania kalibracji soli fizjologicznej.

Na zakończenie badania wstrzyknij zwierzęciu 10 mikrolitrów soli fizjologicznej hipertonicznej przez żyłę szyjną, aby uzyskać równoległą wartość przewodności. Widoczny wzrost objętości będzie obserwowany bez zmiany ciśnienia w wyniku zmiany przewodnictwa w sadzawce krwi. Aby przeprowadzić kalibrację vete, należy ogrzać vete z dołkami o znanej średnicy do 37 stopni Celsjusza i wypełnić pierwsze trzy otwory świeżymi, ciepłymi heparynami.

Krew myszy poddawanych badaniom hemodynamicznym pasuje do plastikowego adaptera dostarczonego przez producenta do weterynarza. Spowoduje to utrzymanie cewnika konduktancji nieruchomo podczas kalibracji. Następnie włóż cewnik konduktancyjny do pierwszej studzienki, aż wszystkie elektrody zostaną zanurzone.

Na koniec zapisz przewodnictwo w kanale objętościowym, aby sprawdzić, czy ligand angiotensyny typu pierwszego z polaryzacją beta arrestiny TR RV 1 2 0 0 2 3 wpływa na czynność serca. Analizę pętli objętości ciśnienia in vivo przeprowadzono na myszach typu dzikiego otrzymujących konwencjonalne lub nowe blokery receptora angiotensyny. Rzeczywiście, w tym eksperymencie dożylna infuzja TR RV 1 2 0 0 2 3 znacznie zwiększyła kurczliwość serca w porównaniu z leczeniem konwencjonalnym i kontrolnym.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przeprowadzić analizę pętli objętości ciśnienia przy użyciu zwężenia zarówno aorty, jak i żyły głównej dolnej, aby uzyskać zarówno zależne, jak i niezależne pomiary czynności serca.