Pomiar pętli głośności ciśnienia w myszy

Ogólnym celem pomiaru pętli objętości ciśnienia u myszy jest uzyskanie szczegółowej oceny czynności serca. Metoda ta jest przydatna do fizjologicznej charakterystyki myszy posiadających określone manipulacje genetyczne, które z kolei mogą dostarczyć informacji na temat roli określonych białek w funkcji serca. Główną zaletą tej techniki jest to, że zapewnia szczegółową ocenę funkcji skurczu, która nie jest dostępna za pomocą innych metodologii.

Gdy mysz jest przygotowana do operacji, zacznij od wykonania nacięcia w wcięciu mostka rozciągającym się od około pięciu milimetrów na prawo od linii środkowej do około pięciu milimetrów na lewo od linii środkowej. Wykonaj drugie nacięcie rozciągające się wzdłuż prawej krawędzi pierwszego rostralnie do około dwóch milimetrów rozpieszczonych do końca żuchwy. Następnie wykonaj trzecie nacięcie rozciągające się od rostralnego końca drugiego nacięcia do około pięciu milimetrów na prawo od linii środkowej.

I cofnij powstały płat skóry w prawo, aby odsłonić podkreślone tkanki. Następnie, pod mikroskopem preparacyjnym, tępo wypreparuj śliniankę przyuszną i gruczoły ślinowe poniżej żuchwy w linii środkowej, aby odsłonić mięśnie podkreślające tchawicę. Następnie tępo oddziel prawy i lewy mięsień gnykowy mostka.

Gdy tchawica jest widoczna, przełóż dziesięciocentymetrowy kawałek jedwabnego szwu z trzema zerami pod tkanką gardła, uważając, aby nie objąć przełyku. Za pomocą igły o rozmiarze 20 wykonaj szerokie nacięcie w szczelinie, po prostu przyłóż do krtani przed pierwszym pierścieniem tchawicy. Następnie natychmiast zdejmij maskę anestezjologiczną ze zwierzęcia i ostrożnie włóż rurkę dotchawiczą do tchawicy.

Po zabezpieczeniu rurki przedłuż lewą krawędź pierwotnego nacięcia skóry w dół do wyrostka mieczykowatego i w poprzek linii środkowej do około jednego punktu pięć centymetrów na prawo od linii środkowej. Następnie użyj cięcia, aby cofnąć płat skóry na boki, odsłaniając mięśnie podkreślone. I użyj kleszczy rozszerzających naczynia, aby odizolować przyczep mięśnia piersiowego większego po prawej stronie w pobliżu rozpieszczonej części mostka.

Kauteryzuj i przetnij mięsień. Następnie przetnij mięsień piersiowy większy wzdłuż jego przyczepu do mostka. I podważyć najszerszy grzbietu po tej samej stronie.

Cofnij odcięty koniec czaszkowo, aby odsłonić żebra. I użyj pary ostrych kleszczy, aby ostrożnie przeciąć warstwy mięśni międzyżebrowych, aby dostać się do klatki piersiowej. Po otwarciu przestrzeni w liczbie mnogiej ostrożnie włóż rozszerzacze naczyń z końcówką i podnieś ścianę klatki piersiowej z delikatną siłą skierowaną w górę.

Teraz przetnij bocznie wzdłuż mięśni międzyżebrowych, uważając, aby nie przeciąć płata płuca i przedłuż nacięcie przyśrodkowo, zachowując trzy do czterech milimetrów z boku linii środkowej, aby uniknąć wewnętrznej tętnicy sutkowej biegnącej równolegle do mostka. Następnie umieść nasączony solą fizjologiczną mały aplikator z bawełnianą końcówką przez nacięcie w kierunku linii środkowej i zapewnij delikatną przyczepność w górę, aby odciągnąć ścianę klatki piersiowej od struktur poniżej. Ostrożnie użyj kauteryzacji, aby przeciąć ścianę klatki piersiowej, zaczynając od przyśrodkowej krawędzi nacięcia i kończąc około jednego centymetra po linii środkowej po lewej stronie.

Po dokładnym kauteryzacji tkanki użyj nożyczek, aby ostrożnie przeciąć mostek. Wierzchołek serca powinien być wyraźnie widoczny. Następnie, za pomocą rozwarstwienia, przerwij osierdzie i zidentyfikuj żyłę główną ogonową.

Aby umieścić cewnik do żyły szyjnej, ustaw cewnik igłowy o rozmiarze 30 G przymocowany do strzykawki zawierającej dziesięć procent albuminy w taki sposób, aby igła leżała na żyle szyjnej samodzielnie, skośną stroną do góry. Aby uwidocznić żyłę szyjną, chwyć igłę kleszczami jedną ręką i cofnij gruczoł ślinowy kleszczami tkankowymi drugą. Zastosuj delikatną trakcję do tkanki otaczającej żyłę szyjną diesla, aby wytworzyć napięcie na ścianie naczynia.

Następnie, używając płytkiego kąta natarcia, ostrożnie włóż igłę do żyły i wsuń końcówkę o trzy do czterech milimetrów w głąb naczynia. Gdy cewnik znajdzie się na swoim miejscu, przymocuj igłę do podciętych gruczołów ślinowych za pomocą kleju chirurgicznego i rozpocznij wlewanie roztworu albuminy. Aby umieścić cewnik objętościowy pod ciśnieniem, najpierw przesuń strzykawkę zawierającą zrównoważony roztwór soli fizjologicznej i cewnik objętościowy ciśnienia obok myszy z końcówką cewnika mniej więcej na tej samej wysokości co serce i wyzeruj odczyt ciśnienia.

Następnie, używając nasączonego solą fizjologiczną małego aplikatora z bawełnianą końcówką, manewruj sercem, aby uwidocznić wierzchołek i użyj igły o rozmiarze 25, aby wykonać nacięcie jak najbliżej środka wierzchołka. Po wyjęciu igły szybko, ale delikatnie wprowadzić cewnik przez nacięcie. Następnie można zmierzyć pętle objętości ciśnienia komorowego.

Po umieszczeniu cewnika zmniejsz znieczulenie, aby oświetlić działanie dipresyjne układu krążenia, które może mieć znieczulenie. Jeśli podczas zabiegu nastąpiła nadmierna utrata krwi, można po prostu zwiększyć objętość podawanej albuminy. Zgodnie z konwencją objętość jest wykreślana na osi X, a ciśnienie na osi y.

Pętle objętości ciśnienia wynikające z wykreślenia ciśnienia w stosunku do objętości powinny przypominać prostokąt, którego pionowe krawędzie reprezentują izowolumiczne zmiany ciśnienia. Dolna pozioma strona reprezentuje wypełnienie komory przez zastawkę mitralną, a górna pozioma strona reprezentuje opróżnianie komory przez zastawkę aortalną. U zdrowej myszy typu dzikiego oczekuje się ciśnienia w lewej komorze od 90 do 110 milimetrów słupa rtęci przy maksymalnej szybkości maksymalnej pochodnej ciśnienia od 8000 do 12000 milimetrów słupa rtęci na sekundę.

Co więcej, jednym z najczęstszych artefaktów pomiarowych, które mogą komplikować analizę danych dotyczących objętości ciśnienia, jest uwięzienie cewnika, które jest widoczne jako skok ciśnienia na końcu skurczu, prawdopodobnie wynikający z bezpośredniego ściskania przetwornika ciśnienia przez mięsień brodawkowaty lub inną dynamiczną strukturę w komorze. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o ciągłym monitorowaniu myszy, aby zapewnić wystarczającą głębokość znieczulenia. Po opanowaniu tej techniki można wykonać w ciągu około godziny, w zależności od protokołu zastosowanego po umieszczeniu cewnika.

Po zakończeniu tej procedury można zastosować infuzje związków eksperymentalnych do oceny ich wpływu na czynność serca. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak chirurgicznie umieścić cewnik objętości ciśnienia w lewej komorze myszy i uzyskać wysokiej jakości pętle objętości ciśnienia do analizy serca.