Chirurgia zastawkowa, cewnikowanie prawego serca i morfometria naczyniowa w modelu szczurzym dla tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego przepływem

Ogólnym celem tych procedur jest stworzenie modelu tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego przepływem u szczurów oraz analiza jego głównych hemodynamicznych i histologicznych punktów końcowych za pomocą cewnikowania prawego serca i morfometrii naczyń. Przedstawiamy stworzenie szczurzego modelu nadciśnienia płucnego związanego z przepływem, który charakteryzuje się nową przebudową naczyń typu intymnego, podobną do ludzkiego tętniczego nadciśnienia płucnego, i która jest indukowana przez klinicznie dobrze rozpoznany czynnik wyzwalający, a mianowicie zwiększony przepływ krwi w płucach. Cechy te przyczynią się do lepszego przełożenia wyników uzyskanych w tym modelu na chorobę człowieka.

Przedstawiono również standaryzowane metody oceny hemodynamicznej i charakterystyki histopatologii z wykorzystaniem morfometrii ilościowej. Implikacje tych technik rozciągają się w kierunku odkrycia i oceny nowych strategii leczenia i pozwalają na ocenę specyficznego wpływu na hemodynamikę płuc i morfologię naczyń. Procedury zademonstrują Annemieke Smit-Van Oosten i Michel Weij, mikrochirurdzy z tego laboratorium.

Przed rozpoczęciem zabiegu należy wyszorować skórę znieczulonego szczura sześciobaczkiem chlorkowym w celu dezynfekcji i wstrzyknąć podskórnie buprenorfinę w celu znieczulenia pooperacyjnego. Następnie użyj nożyczek, aby wykonać nacięcie w linii środkowej wzdłuż brzucha, zaczynając jeden centymetr poniżej przepony, rozciągając się tuż nad genitaliami. Przenieś jelita na sterylną gazę zwilżoną 0,9% solą fizjologiczną na lewą stronę zwierzęcia i przykryj narząd bardziej mokrą, sterylną gazą.

Użyj nowych wacików, aby oddzielić błony łączące aortę brzuszną i żyłę główną poniżej otaczających tkanek. Pod mikroskopem preparacyjnym użyj kleszczyków odłamkowych, aby usunąć okołonaczyniowy tłuszcz aortalny tuż nad rozwidleniem po prawej stronie aorty, w którą zostanie wprowadzona igła. Następnie oddziel aortę i żyłę główną od dwóch milimetrów powyżej miejsca, miejsca wprowadzenia igły, aby stworzyć miejsce na zacisk rzutnika.

Teraz umieść luźny szew 5-O wokół aorty i umieść zacisk Kochera na szwie, aby wytworzyć napięcie na ligaturze powyżej nacięcia. Umieść zacisk rzutnika tuż nad szwem i użyj nowej zamiany, aby ścisnąć żyłę główną tak dystalnie, jak to możliwe, aby zablokować przepływ. Następnie zegnij igłę o rozmiarze 18 do kąta 45 stopni ze skosem skierowanym na zewnątrz i trzymając igłę pod kątem 90 stopni względem zwierzęcia, włóż końcówkę igły do aorty tuż nad rozwidleniem ze skosem skierowanym w lewo.

Wypreparuj błony otaczające aortę i żyłę główną na tyle, aby zapewnić dobrą widoczność obszaru wprowadzania zastawki, ponieważ nadmierne rozwarstwienie spowoduje nieszczelność zastawki. Manipuluj końcówką igły w lewo i włóż igłę do żyły głównej, aż będzie można ją zaobserwować w naczyniu. Aby zapobiec zakrzepicy, użyj nowego bawełnianego wacika, aby wypchnąć pozostałą krew z aorty przez miejsce wkłucia i użyj sterylnej gazy, aby wysuszyć obszar wokół zastawki.

Usunąć igłę i natychmiast nałożyć kroplę kleju tkankowego na miejsce nakłucia. Następnie zdejmij zacisk z aorty i ręcznie zwolnij więzadło na aorcie promixal do zastawki. Żyła główna dystalna do zastawki powinna stać się jaskrawoczerwona i powodować turbulencje w miejscu zastawki.

Po zweryfikowaniu zastawki należy przywrócić jelita do jamy brzusznej i użyć wchłanialnych szwów 4-0, aby zamknąć warstwy mięśni i skóry. Następnie przewietrz zwierzę 100% tlenem w celu odzyskania znieczulenia. W celu cewnikowania prawego serca zdezynfekuj szyję sześciordzeniem chlorkowym i użyj ostrza skalpela numer 10, aby wykonać 1,5-centymetrowe nacięcie po prawej brzusznej stronie szyi od prawego obojczyka do kości żuchwy.

Pod mikroskopem preparacyjnym użyj nożyczek, aby rozprowadzić tkankę, a następnie użyj pęsety, aby delikatnie rozsunąć tkankę, aż pojawi się żyła szyjna. Wypreparuj błony wokół żyły szyjnej za pomocą kleszczy odłamkowych. Następnie umieść luźny szew 5-O wokół naczynia i przyklej ligaturę do maski wentylacyjnej, aby zwiększyć napięcie żyły.

Za miejscem wprowadzenia umieść luźną ligaturę wokół naczynia. Następnie za pomocą uchwytów kleszczy lekko zgnij końcówkę igły o rozmiarze 20 ze skosem skierowanym do wewnątrz i wprowadź końcówkę igły do żyły. Szybko umieść kaniulę zawierającą cewnik w naczyniu i wyjmij igłę, zamykając dolną ligaturę wokół kaniuli, aby zabezpieczyć kaniulę na miejscu.

Teraz przeprowadź kaniulę i cewnik do żyły szyjnej, manewrując kaniulą pod obojczykiem, aby wejść do prawego przedsionka. Skieruj końcówkę kaniuli w stronę serca, aby wejść do prawej komory. Na monitorze przyłóżkowym powinna pojawić się krzywa ciśnienia w prawej komorze łóżka.

Gdy krzywa ciśnienia w prawej komorze jest stała, zapisz skurczowe i rozkurczowe ciśnienie w prawej komorze i manipuluj końcówką kaniuli w lewo i do góry. Przesuń cewnik w obrębie kaniuli, a następnie wsuń cewnik do głównej tętnicy płucnej. Gdy krzywa ciśnienia w tętnicy płucnej jest stała, zapisz skurczowe, rozkurczowe i średnie ciśnienie w tętnicy płucnej.

Następnie przesuwaj cewnik w kaniuli, aż kulka na końcu cewnika zaklinuje się w tętnicy płucnej. Spadek krzywej ciśnienia należy obserwować na monitorze przyłóżkowym. Gdy krzywa ciśnienia klina jest stała, zapisz ciśnienie skurczowe, rozkurczowe i średnie ciśnienie klinowe.

Następnie powoli odciągnij cewnik i kierując się krzywymi na monitorze przyłóżkowym, zapisz odpowiednie wartości ciśnienia PA i RV. Gdy cewnik dotrze do prawej komory, lekko pociągnij kaniulę i cewnik do tyłu i zmierz średnie ciśnienie w prawym przedsionku. W tym reprezentatywnym eksperymencie, 28 dni po podaniu MCT i zwiększonym przepływie krwi w płucach, obserwuje się średni wzrost skurczowej prawej komory, skurczowej tętnicy płucnej i średniego ciśnienia w tętnicy płucnej.

Stosunek masy prawej komory do lewej komory i przegrody znacznie wzrasta od 14 dnia po leczeniu do etapu niewydolności prawej komory, co wskazuje na przerost prawej komory. Stosunek mokrej do suchej wątroby jest również znacznie zwiększony na etapie niewydolności prawej komory, co wskazuje na obrzęk wątroby, a także zastoinową niewydolność prawej komory. Umięśnienie naczyń międzygrobikowych zwiększa się stopniowo podczas progresji nadciśnienia tętniczego w tętnicy płucnej, przy czym prawie połowa naczyń wykazuje całkowite media mięśniowe do 14 dnia po leczeniu w prawie wszystkich tętniczkach umięśnionych w końcowej fazie choroby.

Co więcej, zmiany w obrębie błony środkowej są po raz pierwszy obserwowane w 21 dniu, przy czym około 65% wszystkich tętniczek wykazuje warstwę neo-wewnętrzną pod koniec progresji choroby. Powoduje to postępującą niedrożność naczyń krwionośnych, w której w końcowej fazie choroby dochodzi do zamknięcia do 60% światła. Po opanowaniu techniki te można ukończyć w 20 minut na technikę.

Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak echokardiografia lub pętla objętości ciśnienia, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące funkcji prawej komory. Po opracowaniu technika ta toruje drogę naukowcom zajmującym się tętniczym nadciśnieniem płucnym do zbadania wpływu zwiększonego przepływu krwi na układ naczyniowy płuc. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak stworzyć model tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego przepływem u szczurów i jak analizować jego główne hemodynamiczne i histologiczne punkty końcowe