Name: Charakterystyka zwapnień przy użyciu technik mikroskopii optycznej i elektronowej na żywo w rurowcu morskim (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 39 s
Description: Poznaj metody mikroskopii optycznej i elektronowej do badania procesu biomineralizacji u rurowca morskiego Hydroides elegans. Techniki te pozwalają obserwować zwapnienie w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy chcieliby bardzo podziękować Clemson Broadcast Productions, nagranie audio J. Brighta, narracja A. D. McQuiston, słodzenie dźwięku, K. Murphy, filmowanie G. Spake, grafika T. Messervy, montaż wideo T. Messervy i E. Rodgers. Pomoc techniczna i doradztwo naukowe zostały zainspirowane radami S. Kawady, S. Kubo, J. Hudsona, T. Darroudiego, D. Mulwee, H. Qian, Y. W. Lama, M. B. Johnstone'a, C. Campanati, A. C. Lane'a i R. Dineshrama. Badanie to zostało sfinansowane z trzech grantów GRF z HKSAR-RGC (numery grantów: 705511P, 705112P i 17304914).

<ol><li>Aizenberg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeleton+of+Euplectella+sp.%3A+structural+hierarchy+from+the+nanoscale+to+the+macroscale%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Skeleton of Euplectella sp.: structural hierarchy from the nanoscale to the macroscale.</a> Science. 309 (5732), 275-278 (2005).</li>
<li>de Nooijer, L. J., Toyofuku, T., Oguri, K., Nomaki, H., Kitazato, H. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.4319/lom.2008.6.610/abstract">Intracellular pH distribution in foraminifera determined by the fluorescent probe HPTS.</a> Limnol Oceanogr Methods. 6 (11), 610-618 (2008).</li>
<li>de Nooijer, L. J., Langer, G., Nehrke, G., Bijma, J. <a target="_blank" href="http://www.biogeosciences.net/6/2669/2009/">Physiological controls on seawater uptake and calcification in the benthic foraminifer Ammonia tepida.</a> Biogeosciences. 6 (11), 2669-2675 (2009).</li>
<li>Smith, A. M., Riedi, M. A., Winter, D. J. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s00227-013-2210-z">Temperate reefs in a changing ocean: skeletal carbonate mineralogy of serpulids.</a> Mar Biol. 160 (9), 1-14 (2013).</li>
<li>Carpizo-Ituarte, E., Hadfield, M. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/1542509?seq=1#page_scan_tab_contents">Stimulation of metamorphosis in the polychaete Hydroides elegans Haswell (Serpulidae).</a> Biol. Bull. 194 (1), 14(1998).</li>
<li>Bryan, P. J., Kreider, J. L., Qian, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022098197001056">Settlement of the serpulid polychaete Hydroides elegans (Haswell) on the arborescent bryozoan Bugula neritina (L.): evidence of a chemically mediated relationship.</a> J Exp Mar Biol Ecol. 220, 171-190 (1998).</li>
<li>Chan, V. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+compositional+and+ultrastructural+shifts+during+the+development+of+calcareous+tubes+in+the+biofouling+tubeworm%2C+Hydroides+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evidence of compositional and ultrastructural shifts during the development of calcareous tubes in the biofouling tubeworm, Hydroides elegans.</a> J. Struct. Biol. 189 (3), 230-237 (2015).</li>
<li>DOE. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Handbook+of+methods+for+the+analysis+of+the+various+parameters+of+the+carbon+dioxide+system+in+sea+water.+Version+2%22">Handbook of methods for the analysis of the various parameters of the carbon dioxide system in sea water. Version 2</a>. Dickson, A. G., Goyet, C. , ORNL/CDIAC-74 (1994).</li>
<li>Chan, V. B. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.openaire.eu/search/publication?articleId=frontiers___::60dc3ff1cf8480f5672e61caa159856d">Direct deposition of crystalline aragonite in the controlled biomineralization of the calcareous tubeworm.</a> Front Mar Sci. 2, 97(2015).</li>
<li>Bond, J., Varley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+flow+cytometry+and+SNARF+to+calibrate+and+measure+intracellular+pH+in+NS0+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Use of flow cytometry and SNARF to calibrate and measure intracellular pH in NS0 cells.</a> Cytometry A. 64, 43-50 (2005).</li>
<li>Lloyd, G. E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/249849686_Atomic_Number_and_Crystallographic_Contrast_Images_with_the_SEM_A_Review_of_Backscattered_Electron_Techniques">Atomic number and crystallographic contrast images with the SEM: a review of backscattered electron techniques.</a> Mineral Mag. 51, 3-19 (1987).</li>
<li>Perez-Huerta, A., Dauphin, Y., Cuif, J. P., Cusack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+electron+backscatter+diffraction+%28EBSD%29+data+from+calcite+biominerals+in+recent+gastropod+shells%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">High resolution electron backscatter diffraction (EBSD) data from calcite biominerals in recent gastropod shells.</a> Micron. 42 (3), 246-251 (2011).</li>
<li>Bandli, B. R., Gunter, M. E. <a target="_blank" href="http://ammin.geoscienceworld.org/content/97/8-9/1269">Electron backscatter diffraction from unpolished particulate specimens: examples of particle identification and application to inhalable mineral particulate identification.</a> Am. Mineral. 97, 1269-1273 (2012).</li>
<li>Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHayat%2C+MA+%22Principles+and+techniques+of+electron+microscopy%3A+biological+applications%22">Principles and techniques of electron microscopy: biological applications</a>. , Cambridge University Press. (2000).</li>
<li>Wirth, R. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0009254108001940">Focused Ion Beam (FIB) combined with SEM and TEM: Advanced analytical tools for studies of chemical composition, microstructure and crystal structure in geomaterials on a nanometre scale.</a> Chem Geo. 261, 217-229 (2009).</li>
<li>Volkert, C. A., Minor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+microscopy+and+micromachining%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Bull%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam microscopy and micromachining.</a> MRS Bull. 32, 389-399 (2007).</li>
<li>Kudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtexture+of+larval+shell+of+oyster%2C+Crassostrea+nippona%3A+A+FIB-TEM+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Microtexture of larval shell of oyster, Crassostrea nippona: A FIB-TEM study.</a> J. Struct. Biol. 169 (1), 1-5 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Obrazowanie optyczne na żywo jest przydatną metodą obserwacji zdarzeń komórkowych w organizmie wielokomórkowym. W tym przypadku wykorzystano wewnętrzne wskaźniki pH i jonów wapnia do pomiaru strumienia jonów w miejscach mineralizacji. W tych regionach wymagane jest aktywne pompowanie jonów w celu podniesienia pH i stężenia Ca2+, aby umożliwić zwapnienie 2,3. Podczas stosowania cząsteczek fluorescencyjnych do badania organizmu ważne jest, aby upewnić si...

Biomineralizacja to złożona seria zdarzeń, która łączy w sobie szereg aktywności komórkowych, w wyniku których powstają doskonale uporządkowane minerały1. Wyzwanie polega na scharakteryzowaniu zarówno dynamicznego procesu komórkowego, jak i wyrafinowanych struktur mineralnych przy użyciu kombinacji metod mikroskopii optycznej i elektronowej. Podwyższenie wewnątrzkomórkowego pH sprzyja tworzeniu się kryształów CaCO3, stąd identyfikacja etapu życia, który ma podwyższone pH, ujawnia czas, w którym prawdopodobnie wystąpi zwapnienie2,3.
Rureczki z rodziny Serpulidae są powszechnymi kalcyfikatorami w oceanie4. Jest to również popularny model bezkręgowców do badań morskich, zwłaszcza w biofoulingu5,6. W niniejszej pracy obserwuje się proces zwapnienia w komorach mineralizujących podczas biomineralizacji. Szybki proces metamorfozy obejmuje pojawienie się struktur węglanu wapnia7,8.
Pokazujemy, jak można przeprowadzić wewnętrzne pomiary pH na rureczniku oraz jak można badać etapy życia i tkanki istotne dla zwapnienia. Po zidentyfikowaniu interesującego etapu życia tkankę odpowiedzialną za zwapnienie można scharakteryzować w wyższej rozdzielczości za pomocą metod mikroskopii elektronowej. Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej określamy czas potrzebny do pojawienia się węglanu wapnia po indukcji metamorficznej. Podobny etap życia został następnie zwizualizowany za pomocą SEM-EDS w celu dystrybucji składu pierwiastkowego, a zdeponowany minerał przeanalizowano przy użyciu dwóch różnych metod mikroskopii elektronowej, w szczególności SEM-EBSD i FIB-TEM.

<table><tbody><tr><td>Heksametyldisilazan&nbsp;</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>16700(EM)</td><td></td></tr><tr><td>Tetratlenek osmu 2% roztwór wodny</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>19192</td><td></td></tr><tr><td>IBMX 3-izobutylo-1-metyloksantyna</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PHZ1124</td><td></td></tr><tr><td>Nigerycyna, Wolny kwas</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>N7143-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Średnica 35 mm, rozmiar otworu 27 mm, Szkło nr 0, Bez powłoki</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D110400</td><td></td></tr><tr><td>5-(i-6)-karboksy-SNARF-1, ester acetoksymetylowy, octan</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-1271</td><td></td></tr><tr><td>BDH Chlorek potasu, klasa ACS</td><td>VWR</td><td>BDH0258-500G</td><td></td></tr><tr><td>Odczynnik paraformaldehydowy , krystaliczny</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>1 M Kwas solny do analizy wolumetrycznej</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>083-01095</td><td></td></tr><tr><td>0,05 M roztwór wodorotlenku sodu do analizy wolumetrycznej</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>199-02185</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Sigma</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>FASW</td><td>Iwaki Co. Ltd.</td><td>Rei-sea Morskie</td><td></td></tr><tr><td>membrany estrowe z mieszanej celulozy; Średnica 47 mm, 0,45 &mikro; m</td><td>ADVANTEC</td><td>A045A047A</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>051-00476</td><td></td></tr><tr><td>Sztuczna woda morska do</td><td></td><td></td><td>według SOP06 DOE (1994), cdiac.ornl.gov/ftp/cdiac74/sop06.pdf</td></tr><tr><td>Chlorek sodu</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>191-01665</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek potasu</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>163-03545</td><td></td></tr><tr><td>Sześciowodny chlorek magnezu</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>135-00165</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek wapnia</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>039-00475</td><td></td></tr><tr><td>Siarczan sodu</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>197-03345</td><td></td></tr><tr><td>Kwas solny</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>089-08415</td><td></td></tr><tr><td>2-amino-2-hydroksymetylo-1,3-propanodiol (tris)</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>207-06275</td><td></td></tr><tr><td>2-aminopirydyna</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>011-02775</td><td></td></tr><tr><td>Miernik pH Orion 5-gwiazdkowy Plus</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PrpHecT ROSS Micro Kombinowana elektroda pH 8220BNWP</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiovision, wersja 4.6, Axio Obserwator Z1</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH, Bethesda, MD, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRTEM H500</td><td>Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SU6600 VPSEM</td><td>System Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NB5000 Focused Ion and Electron Beam (FIB-SEM)</td><td>Hitachi&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

charakterystyka zwapnień przy użyciu technik mikroskopii optycznej i elektronowej na żywo w rurowcu morskim

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

Scharakteryzowanie pierwszego zdarzenia biologicznej produkcji węglanu wapnia wymaga połączenia podejść mikroskopowych. Po pierwsze, wewnątrzkomórkowy rozkład pH i jony wapnia można obserwować za pomocą mikroskopii na żywo w czasie. Pozwala to na identyfikację etapu życia i tkanki z cechą będącą przedmiotem zainteresowania dla dalszych badań mikroskopii elektronowej. Etap życia i tkanki będące przedmiotem zainteresowania mają zazwyczaj wyższe sygnały pH i Ca. 
Tutaj, używając H. elegans, prezentujemy protokół charakteryzujący obecność struktur węglanu wapnia w próbce biologicznej na skaningowym mikroskopie elektronowym (SEM), używając spektroskopii rentgenowskiej z dyspersją energii (EDS) do wizualizacji składu pierwiastkowego, używając dyfrakcji wstecznego rozpraszania elektronów (EBSD) do określenia obecności struktur krystalicznych, oraz używając transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) do analizy składu i struktury materiału. W tym protokole skupiona wiązka jonów (FIB) jest używana do izolowania próbek o wymiarze odpowiednim do analizy TEM. Ponieważ FIB jest techniką specyficzną dla danego miejsca, pokazujemy, w jaki sposób informacje z poprzednich technik można wykorzystać do identyfikacji obszaru zainteresowania, w którym sygnały Ca są najwyższe.

Poniżej przedstawiono spostrzeżenia dotyczące procesu kalcyfikacji podczas przeobrażenia rurczaka. Rysunek 1 pokazuje, że wartości pH w pobliżu obszaru kołnierza są wyższe niż w innych tkankach po przeobrażeniu. Rysunek 2i przedstawia rurczaka z jednorodnym rozkładem Ca, co sugeruje, że nie rozpoczęły się jeszcze istotne zdarzenia kalcyfikacyjne; Rysunek 2ii pokazuje rurczaka, który ulegał kalcyfikacji przez dłuższy czas, co sugeruje, że ...

Pokazujemy użycie różnych metod mikroskopowych, które są przydatne do obserwacji zwapnienia tubeworma, Hydroides elegans, a także do lokalizowania i charakteryzowania pierwszego zwapniałego materiału. Mikroskopia na żywo i mikroskopia elektronowa są używane razem w celu dostarczenia informacji funkcjonalnych i materiałowych, które są ważne w badaniu biomineralizacji.

Charakterystyka zwapnień przy użyciu technik mikroskopii optycznej i elektronowej na żywo w rurowcu morskim

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest określenie lokalizacji i struktury procesu kalcyfikacji poprzez zastosowanie kombinacji metod mikroskopii optycznej i elektronowej. Osiąga się to poprzez monitorowanie żywej larwy rurecznika podczas metamorfozy – etapu cyklu życiowego odpowiedzialnego za kalcyfikację, który można wykryć przy użyciu wskaźników fluorescencyjnych czułych na wewnątrzkomórkowe pH oraz sygnały wapniowe. Obrazowanie wewnątrzkomórkowego pH pozwala na badanie koncentracji protonów wchodzących do cytoplazmy i wychodzących z niej podczas procesu kalcyfikacji.Aby rozpocząć obrazowanie wewnątrzkomórkowego pH w larwach morskiego rurecznika, kompetentne pływające larwy barwi się wewnątrzkomórkowym barwnikiem wskaźnikowym pH, SNARF-1 AM. Larwy są następnie przenoszone do szalki z IBMX zawierającej wodę morską z cienkim szklanym okienkiem obserwacyjnym i umieszczane pod mikroskopem fluorescencyjnym, gdzie są naświetlane światłem o długości fali 488 nm, która jest absorbowana przez barwnik. Zbierane są emisje barwnika o długościach 580 nm oraz 640 nm. Wartości wewnątrzkomórkowego pH można obliczyć na podstawie stosunku tych wartości.Mikroskopia optyczna pozwala zidentyfikować

characterization-calcification-events-using-live-optical-electron

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film przedstawia koncepcje związane z obrazowaniem wapnia i zawiera przykładowy protokół obrazowania poklatkowego robaków znajdujących się w formowanych studzienkach agarozowych.

Obrazowanie wapnia: metoda wizualizacji aktywności neuronalnej u żywych C. elegans

Zintegrowany zestaw technik obrazowania został zastosowany do określenia morfologii polipów i struktury tkanek u karaibskich koralowców Montastraeaannularis i M. faveolata. Fluorescencja, szeregowa powierzchnia blokowa i dwufotonowa konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa pozwoliły zidentyfikować strukturę płatów, ściany polipów oraz oszacować gęstości i rozkłady chromatoforów i zooksantelli.

Multimodalne metody mikroskopii optycznej ujawniają morfologię i strukturę tkanek polipowych w karaibskich koralowcach budujących rafy

Obrazowanie zachowania i aktywności neuronalnej w długich skalach czasowych bez unieruchomienia zwierzęcia jest warunkiem wstępnym do zrozumienia zachowania. Obrazowanie komór mikroprzepływowych z agarozą (AMI) może być wykorzystywane do obrazowania aktywności i zachowania neuronów na wszystkich etapach życia Caenorhabditis elegans.

Mikrokomory agarozowe do długoterminowego obrazowania wapnia Caenorhabditis elegans

W tym artykule demonstrujemy obrazowanie na żywo poszczególnych robaków za pomocą niestandardowego urządzenia mikroprzepływowego. W urządzeniu wiele robaków jest indywidualnie zamkniętych w oddzielnych komorach, co pozwala na wielokrotny nadzór podłużny nad różnymi procesami biologicznymi.

Platforma mikroprzepływowa do obrazowania podłużnego u Caenorhabditis elegans

Tutaj szczegółowo wyjaśnione są protokoły wykonywania obrazowania mikrofokusowego tomografii komputerowej (mikroCT) trzech morskich bezkręgowców. W tym badaniu opisano takie etapy, jak utrwalanie próbki, barwienie, montaż, skanowanie, rekonstrukcja obrazu i analiza danych. Podano również sugestie, w jaki sposób protokół może być dostosowany do różnych próbek.

Obrazowanie rentgenowskie tomografii komputerowej z mikroogniskowaniem (microCT) Actinia equina (Cnidaria), Harmothoe sp. (Annelida) i Xenoturbella japonica (Xenacoelomorpha)

Ta metoda umożliwia połączenie optogenetyki i genetycznie kodowanych czujników wapnia do obrazowania wyjściowego poziomu cytozolowego wapnia i zmian w wywołanych przejściowych stanach wapnia w mięśniach ściany ciała organizmu modelowego C. elegans.

Obrazowanie wapnia in vivo w mięśniach ściany ciała C. elegans

Zgłoszono tutaj system do obrazowania wapnia u swobodnie zachowujących się Caenorhabditis elegans z dobrze kontrolowanymi, niezlokalizowanymi wibracjami. System ten pozwala naukowcom na wywoływanie niezlokalizowanych wibracji o dobrze kontrolowanych właściwościach przy przemieszczeniu w skali nano oraz na ilościowe określenie prądów wapniowych podczas reakcji C. elegans na wibracje.

Obrazowanie wapnia u swobodnie zachowujących się Caenorhabditis elegans z dobrze kontrolowanymi, niezlokalizowanymi wibracjami

Szybki fluorometr powtarzalności (FRRf) jest korzystną metodą pomiaru fotofizjologii II fotosystemu i produktywności pierwotnej. W tym miejscu opisujemy protokół pomiaru fotofizjologii PSII alg epizoicznych, Colacium sp. na zooplanktonie substratowym za pomocą FRRf typu kuwetowego.

Pomiar fotofizjologii dołączonego stadium Colacium sp. za pomocą fluorometru kuwetowego o dużej częstotliwości powtarzania

Choroby układu krążenia są główną przyczyną zgonów na całym świecie. Zwapnienie naczyń krwionośnych w znacznym stopniu przyczynia się do obciążenia chorobowością i śmiertelnością z przyczyn sercowo-naczyniowych. Protokół ten opisuje prostą metodę ilościowego oznaczania wytrącania wapnia za pośrednictwem komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych in vitro za pomocą obrazowania fluorescencyjnego.

Półautomatyczna i powtarzalna metoda biologiczna do ilościowego oznaczania depozycji wapnia in vitro

Obecne metody opisują nieratiometryczne podejście do wysokorozdzielczego, subkompartmentowego obrazowania wapnia in vivo u Caenorhabditis elegans przy użyciu łatwo dostępnych genetycznie kodowanych wskaźników wapnia.

Subkomórkowe obrazowanie neuronalnej obsługi wapnia in vivo

Tutaj prezentujemy protokoły i narzędzia do wizualizacji wapnia podczas zapłodnienia i wczesnej embriogenezy za pomocą genetycznie kodowanego reportera wapnia wyrażonego w linii zarodkowej modelowego nicienia C. elegans.

Wizualizacja in vivo stanów przejściowych wapnia podczas nawożenia i wczesnego rozwoju C. elegans

Poznaj metody mikroskopii optycznej i elektronowej do badania procesu biomineralizacji u rurowca morskiego Hydroides elegans. Techniki te pozwalają obserwować zwapnienie w czasie rzeczywistym.

Charakterystyka zwapnień przy użyciu technik mikroskopii optycznej i elektronowej na żywo w rurowcu morskim

Przeglądaj więcej filmów