Strategie pobierania próbek i przetwarzanie próbek tkanek z biobanku z modeli biomedycznych świń

Pokazano praktyczne zastosowanie i wydajność metod generowania reprezentatywnych próbek tkanek modeli zwierzęcych świń dla szerokiego spektrum dalszych analiz w projektach biobanków, w tym wolumetrii, systematycznego losowego pobierania próbek i różnicowego przetwarzania próbek tkanek dla jakościowych i ilościowych analiz morfologicznych i molekularnych.

Ten film przedstawia dwie kluczowe techniki pobierania próbek i przetwarzania próbek tkanek świń z biobanku. Technika zanurzenia wiarygodnie szacuje całkowitą objętość narządów i tkanek, a technika orientatora generuje losowe izotropowe skrawki tkanek w celu bezstronnego oszacowania ilościowych parametrów morfologicznych. Główną zaletą techniki zanurzania do oznaczania gęstości tkanek jest to, że można ją zastosować do każdego rodzaju tkanki i daje wiarygodne wyniki zarówno dla małych, jak i dużych próbek.

Zaletą techniki orientatora jest to, że jest ona bardzo wydajna i działa również z dużymi próbkami tkanek. Aby rozpocząć wolumetrię dużego narządu, należy wyciąć z narządu kawałek tkanki o odpowiedniej wielkości. Ostrożnie przetrzyj próbkę ręcznikiem papierowym, aby usunąć nadmiar krwi i płynu tkankowego.

Następnie zważyć próbkę na wadze precyzyjnej i zanotować masę próbki. Dodaj 0,9% soli fizjologicznej do zlewki o odpowiedniej wielkości. Nie napełniaj całkowicie zlewki, aby zapobiec przelaniu się podczas wydrążania tkanek.

Umieść zlewkę na wadze, a następnie zanurz kleszczyki lub samodzielnie skonstruowany uchwyt na próbkę w soli fizjologicznej, aż znak na kleszczach lub uchwycie na próbkę dotrze do cieczy. Następnie zresetuj wyświetlanie skali do zera. Ostrożnie przymocuj próbkę tkanki do kleszczy lub uchwytu na próbkę i całkowicie zanurz próbkę w soli fizjologicznej, aż zostanie osiągnięta zaznaczona pozycja.

Aby uzyskać wiarygodne pomiary gęstości, ważne jest, aby upewnić się, że próbka jest całkowicie zanurzona i aby uniknąć kontaktu zanurzonej próbki z wewnętrznymi ściankami lub dnem zlewki. Trzymając próbkę w odpowiedniej pozycji, zapisz masę wyświetlaną na wadze. Użyj tego pomiaru i gęstości soli fizjologicznej w temperaturze pokojowej, aby obliczyć objętość próbki.

Następnie oblicz gęstość próbki tkanki na podstawie masy próbki i jej objętości. W przypadku dużych narządów i tkanek, takich jak ta nerka, należy wykonać powtarzające się pomiary z wieloma próbkami i obliczyć średnią gęstość na podstawie pojedynczych pomiarów. W przypadku małych próbek i małych narządów mierzonych łącznie, takich jak przysadka mózgowa, należy powtórzyć pomiar trzy razy przed obliczeniem średniej gęstości narządów na podstawie pojedynczych wartości pomiaru.

Na koniec oblicz całkowitą objętość narządu, tkanki lub przedziału narządu na podstawie jego masy i gęstości. Umieść nieruchomą próbkę tkanki na wydruku równokątnego koła z jedną krawędzią równoległą do kierunku od zera do 180 stopni. Następnie użyj tabeli liczb losowych, aby określić kąt losowy.

Znajdź odpowiednie znaki na skali koła równokątnego. Korzystając z tych znaków, przeciąć przekrój przez próbkę z płaszczyzną przekroju zorientowaną równolegle do kierunku losowego kąta wskazanego na skali koła równokątnego i pionowo do powierzchni spoczynkowej próbki. Umieść blok tkanki powierzchnią przekroju skierowaną w dół na okręgu ważonym cosinusem.

Krawędź powierzchni spoczynkowej jest umieszczona równolegle do kierunku jeden do jednego. Teraz przetnij nowy odcinek przez próbkę pod losowym kątem określonym za pomocą tabeli liczb losowych. Wynikowa płaszczyzna przekroju jest izotropowym jednorodnym przekrojem losowym.

Poniższa tabela przedstawia reprezentatywne gęstości kilku tkanek i narządów świń określone za pomocą techniki zanurzenia. Większość tkanek świń wykazuje wartości gęstości nieco wyższe niż ta odnosząca się do gęstości wody. Natomiast tkanki pływające w soli fizjologicznej, takie jak na przykład tkanka tłuszczowa, wykazują gęstość mniejszą niż jeden.

Rysunek ten przedstawia cztery reprezentatywne przekroje IUR mięśnia sercowego lewej komory świń przygotowane techniką orientatora. Zwróć uwagę na zmienione kąty cięcia w różnych sekcjach IUR. Po opanowaniu techniki zanurzania w celu określenia gęstości tkanki można ją wykonać w ciągu kilku minut.

Jeśli zostanie wykonany prawidłowo. Izotropowe jednorodne losowe skrawki tkanek wygenerowane techniką orientatora nadają się do oszacowania dowolnych ilościowych parametrów morfologicznych przy użyciu odpowiednich metod analizy stereologicznej. muzyka cyfrowa.