Badanie potencjału arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych w rozwoju raka wątrobowokomórkowego in vivo

Witam, nazywam się dr Alaa Alshareeda z Międzynarodowego Centrum Badań Medycznych im. Króla Abdullaha na Wydziale Komórek Macierzystych i Medycyny Regeneracyjnej. Dzisiaj będziemy demonstrować wpływ mezenchymalnych komórek macierzystych na rozwój raka wątrobowokomórkowego na modelu szczurzym za pomocą technologii arkuszy komórkowych. Cześć, nazywam się Abdullah Almubarak.

Pracuję w Chirurgii Eksperymentalnej i Laboratorium Zwierząt na Uniwersytecie Króla Sauda. Używamy nagiego szczura, aby uniknąć odrzucenia po przeszczepieniu arkusza komórek. Ten diagram przedstawia procedurę przeszczepu arkusza komórkowego na nagich szczurach.

W tym badaniu zostaną wykorzystane nagie szczury w wieku od 8 do 12 tygodni. Najpierw zetnij szczury i wykonaj od siedmiu do dziesięciu centymetrów nacięcia między skórą a leżącymi pod nią mięśniami za pomocą skalpela, aby odsłonić wątrobę. Aby przenieść arkusz komórek, użyj sterylnej membrany.

Umieść membranę na arkuszu komórek, aby ją zebrać. Następnie umieść arkusz komórek z błoną na jednym płacie wątroby. Konstrukcja arkusza komórkowego.

Przed wysianiem komórek pokryj 3,5-centymetrowe szalki hodowlane UpCell reagującymi na temperaturę nierozcieńczonymi FBS. Powlekanie naczyń FBS wspomaga wzrost komórek w warstwie błony i zapobiega degradacji komórek. Upewnij się, że pokryłeś całą powierzchnię naczyń.

Inkubuj naczynia przez 24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% dwutlenku węgla i 95% powietrza. Następnego dnia usuń nadmiar FBS i pozostaw naczynia do wyschnięcia w temperaturze pokojowej przez co najmniej godzinę. Wysiewaj co najmniej milion komórek rakowych HepG2 samodzielnie lub w korozji z mezenchymalnymi komórkami macierzystymi do pożywki hodowlanej DMEM.

Pożywka uzupełniona o 10% FBS i 1% penicylinę-streptomycynę. Stosunek komórek nowotworowych do mezenchymalnych komórek macierzystych w tym badaniu wynosi 4:1. Po dodaniu komórek delikatnie potrząśnij naczyniami.

Inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% dwutlenku węgla i 95% powietrza. Oderwanie arkusza komórki. Przy 100% zbiegu komórek wyjmij naczynia z inkubatora o temperaturze 37 stopni Celsjusza.

Teraz inkubuj arkusz komórek rakowych HepG2 przez godzinę w temperaturze pokojowej, podczas gdy inkubuj HepG2 współhodowany z mezenchymalnymi komórkami macierzystymi przez 30 do 40 minut w temperaturze 20 stopni Celsjusza w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% dwutlenku węgla w 95% powietrzu. W czasie inkubacji w celu oderwania arkusza komórkowego należy rozpocząć procedurę na zwierzętach. Wszystkie badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez komisję etyczną Uniwersytetu Króla Sauda.

Wykonanie zabiegu chirurgicznego. Sprawdź głębokość znieczulenia, testując odruch wycofania pedału. Zdezynfekuj obszar operacji jodem.

Teraz nałóż drugi peeling z jodem. Przykryj zwierzę wysterylizowaną serwetą, aby uniknąć zanieczyszczenia nacięcia. Za pomocą wysterylizowanego skalpela wykonaj nacięcie między skórą a leżącymi pod nią mięśniami, o wielkości około siedmiu do dziesięciu centymetrów, aby odsłonić wątrobę.

Oddziel mięsień brzucha od skóry płaską tylną krawędzią skalpela. Ostrożnie dźgnij linea alba za pomocą skalpela i przedłuż cięcie ostrymi nożyczkami. Przeszczep arkusza komórkowego na wątrobie szczura.

Delikatnie postukaj naczyniem hodowlanym o ławkę, aby oderwać arkusz od jego powierzchni. Oddziel arkusz komórek od powierzchni naczynia, zeskrobując krawędzie arkusza w półkolu. Teraz delikatnie usuń całą pożywkę hodowlaną z naczynia.

Upewnij się, że arkusz jest nienaruszony i bez żadnych uszkodzeń, w przeciwnym razie nie można go użyć. Przygotuj sterylną błonę do zbioru i przenieś arkusz komórek. Dlatego najpierw namocz membranę zwykłą solą fizjologiczną, a następnie usuń nadmiar soli fizjologicznej sterylnym wacikiem.

Umieść mokrą membranę na arkuszu komórek, unikając pęcherzyków powietrza między membraną a arkuszem komórek. Dodaj kilka kropli soli fizjologicznej na membranę i arkusz komórek, aby zebrać materiał. Pozostaw membranę na kilka sekund, aby upewnić się, że arkusz komórek jest prawidłowo przymocowany do membrany, a następnie zbierz go.

Teraz przygotuj wątrobę do przeszczepu. Upewnij się, że powierzchnia wątroby jest sucha. Umieść błonę z arkuszem komórek na pojedynczym płacie wątroby szczura.

Dodaj kilka kropli wysterylizowanej soli fizjologicznej, aby oderwać arkusz komórek od membrany. Odczekaj pięć minut przed ostrożnym usunięciem membrany. Arkusz komórek można zobaczyć przymocowany do wątroby w tym filmie.

Na koniec zamknij leżące poniżej mięśnie i nacięcia skóry za pomocą pięciu nylonowych szwów. Po zamknięciu nacięcia należy zdezynfekować obszar operowany betadyną. Czas od znieczulenia do głowy w górę jest zmienny, ale zwykle wynosi od pięciu do 20 minut.

Ten rysunek pokazuje rozwinięty guz na wątrobie szczura po miesiącu od przeszczepu arkusza komórek HepG2. W tym przypadku guz rozwinął się po przeszczepieniu komórek nowotworowych HepG2 wytworzonych w arkuszu komórek i mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego. Podczas gdy ten pokazuje, najmniejszy rozwinięty guz na wątrobie szczura po przeszczepieniu arkusza komórkowego wykonanego z komórek rakowych HepG2 i mezenchymalnej komórki macierzystej struny pępowinowej, ten rysunek pokazuje barwienie H i E wątroby szczura po miesiącu od przeszczepu arkusza komórek.

Gdzie A reprezentuje normalne komórki wątroby szczura, a B pokazuje rakowe komórki wątroby szczura. Konkluzja. Więc po obejrzeniu tego filmu powinieneś być w stanie rozwinąć model raka wątrobowokomórkowego na nagim szczurze przy użyciu technologii arkuszy komórkowych. Dziękuję za oglądanie.