Obrazowanie konfokalne dwuniciowego RNA i receptorów rozpoznawania wzorców w zakażeniu wirusem RNA o ujemnym znaczeniu

Dwuniciowe RNA wytwarzane podczas replikacji wirusa RNA mogą być rozpoznawane przez receptory rozpoznające wzorce, aby wywołać wrodzoną odpowiedź immunologiczną. W przypadku wirusów RNA o ujemnym znaczeniu interakcja między niskim poziomem dsRNA a PRR pozostaje niejasna. Opracowaliśmy metodę mikroskopii konfokalnej do wizualizacji dsRNA i PRR arenawirusa w poszczególnych komórkach.

Tradycyjny dwuniciowy test wykrywania RNA zwykle nie jest wystarczająco czuły, aby wykryć dwuniciowe RNA powstałe w wyniku infekcji wirusem RNA o ujemnym sensie. Dlatego interakcja między dwuniciowym RNA a receptorami rozpoznawania wzorców gospodarza pozostała w dużej mierze nieuchwytna dla tych wirusów. Korzystając z tego protokołu, jesteśmy w stanie zwizualizować i scharakteryzować interakcję między białkiem jądrowym wirusa, dwuniciowym RNA i gospodarzem a PRR na poziomie pojedynczej komórki dla wirusa RNA o ujemnym sensie. Jest to test multipleksowy, który pozwala na jednoczesne barwienie dwuniciowego RNA i dwóch celów białkowych wirusa lub gospodarza w poszczególnych komórkach. W przeciwieństwie do testu RNA-FISH, technika ta jest niezależna od sekwencji RNA i zwykle kompatybilna z wykrywaniem przeciwciał docelowych białek. Rozpocznij 24 godziny przed zakażeniem, wysiewając 200 000 ludzkich komórek nabłonka płuc A549 na szkiełkach pokrywających z poli-D-lizyny na 12-dołkowych płytkach i hodując je w 37