Abstract
מודלים מפרצת saccular ניסוי הם הכרחיים לבדיקת אפשרויות טיפול כירורגים וendovascular רומן והתקנים לפני שהם הציגו לתוך פרקטיקה קלינית. יתר על כן, יש צורך במודלים ניסיוניים על מנת להבהיר את הביולוגיה מפרצת המורכבת מובילה לקרע של מפרצת saccular.
כמה סוגים שונים של מודלים ניסיוניים לפרצת saccular הוקמו במינים שונים. רבים מהם, לעומת זאת, דורשים כישורים מיוחדים, ציוד יקר, או סביבות מיוחדות, המגביל את השימוש הנרחב שלהם. מודל ניסיוני פשוט, חזק, ולא יקר שדרוש ככלי סטנדרטי שניתן להשתמש באופן אחיד במוסדות שונים.
המודל מפרצת דפנות אב העורקים בבטן עכברוש מייקרו משלב את האפשרות ללמוד שני אסטרטגיות טיפול endovascular רומן והבסיס המולקולרי של ביולוגיה מפרצת בסטנדרטית וזולאופן. שתלי סטנדרטיים באמצעות צורה, גודל, וגיאומטריה נקצרים מאב העורקים החזי יורדים של חולדה תורם ולאחר מכן הושתלו בעכברי נמען syngenic. מפרצת הם נתפרו מקצה לצד עם רציף או קטע 9-0 תפרי ניילון לאב העורקים בבטן infrarenal.
אנו מציגים הוראות נוהל צעד אחר צעד, מידע על ציוד דרוש, ולדון בפרטים אנטומיים וכירורגים חשובים ליצירת מייקרו מוצלחת של מפרצת דפנות אב העורקים בבטן בחולדה.
Introduction
קרע של מפרצת עורק מוח saccular גורם דימום מסכן חיים מוביל לשבץ, נזק נוירולוגים קבוע, או מוות. קרע ניתן למנוע על ידי אחד גזיר מייקרו או חסימת פרצת endovascular. טיפול רפואי למניעת צמיחה מפרצת וקרע טרם הוקם.
מודלים ניסיוניים לפרצת saccular יש צורך ללמוד את הביולוגיה של מפרצת עורקים ולבדיקה של מכשירים טיפוליים חדשניים ואסטרטגיות. למטרות אלה, כמה דגמים שונים במינים שונים פותחו ופורסמו 1. מודלים מפרצת גדולות בחזירים, כלבים, ארנבות ומשמשים רצוי כדי לבדוק את חידושי endovascular באדריכלות מפרצת מורכבת 1,2. מודלים עכבריים מפרצת, ומצד שני, לאפשר בדיקת שאלות מחקר במינים מהונדסים גנטי 3,4 ולהקל על בירור ביולוגיה מפרצת בתאית ומולקולרירמה טובה בהרבה ממינים גדולים יותר 1. למרות שטרנס התרדמה endovascular ופריסת מכשיר טרנס הכסל מוגבלת לחולדות גדולות יותר (> 400-500 גר ') וסטנטים קטנים יותר מ2.0 מ"מ ו1.5 מ"מ קוטר 5,6, יכולים גם להיות ממוקמים סטנטים באמצעות החדרה ישירה לתוך אב העורקים בבטן קטע מחסה מפרצות הניסיוניות. עבודה קודמת באמצעות עכברוש מודל פרצת מייקר בטן דפנות אב העורקים הוכיחה ההיתכנות שלה במכשירי תסחיפי רומן בדיקות והשימוש בו בחקר הבסיס המולקולרי של ביולוגיה מפרצת 3,7.
רבים מהמודלים מפרצת saccular פורסמו כרגע הניסיוניים דורשים ציוד יקר, סביבות מיוחדות (לדוגמא: חדרי ניתוח סטריליים עם יכולות שיקוף), יכולת רדיולוגיה התערבותית, או שימוש במינים יקרים. דרישות אלו מגבילות את השימוש הנרחב במודלים אלה, ולהוביל לשימוש במודלים שונים במעבדות שונות, אשר מ 'akes השוואת נתונים וניתוח-קשה, אם לא בלתי אפשרי. מודל ניסיוני פשוט, חזק, ולא יקר שדרוש ככלי סטנדרטי שניתן להשתמש באופן סטנדרטי במעבדות שונות כדי לקבל תוצאות דומות מהמוסדות שונים. לשם כך, יצרנו מודל מפרצת אב העורקים החולדה דפנות עורקי saccular.
מטרת דו"ח זה היא להציג הוראות נוהל צעד אחר צעד, מידע על ציוד דרוש, וכדי לדון במאפיינים אנטומיים וכירורגים חשובים ליצירת מייקרו מוצלחת של מפרצת דפנות אב העורקים בבטן בחולדה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הערה: חולדות וויסטר, זכר (משקל גוף ממוצע: 356 ± 44 גרם; 10-14 שבועות) שוכנו בחדר של בעלי החיים ב22-24 ° C ו אור שנים עשר שעות ביממה / מחזור כהה עם גישה חופשית לדיאטה גלולה, במים ברז רגילים וגם קיבל טיפול הומני בקנה אחד עם הנחיות מוסדיות. הניסויים היו נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לרווחת בעלי החיים באוניברסיטת הלסינקי, פינלנד.
הערה: בהפגנה הבאה השיטה כירורגית שלנו היא כדלקמן: להרדים את העכברוש על ידי הזרקה תת עורית מותאמת משקל של hydrochloride medetomidine (0.5 מ"ג / קילוגרם) וזריקת intraperitoneal של קטמין הידרוכלוריד (50 מ"ג / קילוגרם). מבחן לחוסר רפלקס הבוהן קמצוץ כדי לאשר שהעכברוש הוא בהרדמה מלאה. החל המשחה העין, קליפ האתר כירורגית, ולנקות את העור בחומר חיטוי מתאים, למשל כלורהקסידין, או באלכוהול או מים. שטוף את הידיים, לשים על ביגוד מגן, כיסוי ראש ופניםמסכה, וכפפות מנתחים סטרילית. יש לי סיוע עוזר כירורגית בשמירה על תנאי ניתוח ספטית ולתעד את המאפיינים כירורגית (כמפורט בטבלה 1). לפקח על עומק ההרדמה כל 15 דקות במהלך ניתוח על ידי ביצוע קצב נשימה, קצב לב, ותגובה לגירוי מזיק (מבחן קמצוץ הבוהן). הזרקה תת עורית של עצירות (0.03 מ"ג / קילוגרם) ניתנה לשיכוך כאבים לאחר ניתוח וחזרה במידת צורך בכל שעות 12.
1 חומרה, חומרים מתכלים, ומיקום
- לשמור את חדר הניתוח של בעלי החיים הקטנים ושקט, בקטריאלית, ולשמור על טמפרטורת החדר ב23 +/- 3 מעלות צלזיוס. כדי לבצע את הניתוח מפרצת הניסיונית הציוד המינימלי הבא הוא הכרחי:
- השתמש במיקרוסקופ ניתוחי ראש הטבלה באופן אידיאלי מצויד בהיקף עוזר ומצלמה מיקרוסקופ דיגיטלי. השתמש במשטח nonporous לשימוש חוזר תפעולי ומשטח מכשיר cleanable כדי להגן על ספסל המעבדה.
- השתמש בכלים הבאים סטנדרטיים כירורגית: מספריים כירורגי, מלקחיים רקמות, מפזר רקמות רך או מפשק שמירה עצמית, ושני חבקים כירורגית נגד יתושים.
- השתמש בערכה בסיסית מייקרו מכשיר הכוללת: בעל microneedle מעוקל, microforceps אחד מעוגל ושני ישר, וmicroscissor ישר או עקום.
- שמור את מכשירי מייקרו בצלחת כליות מלאות בתמיסת מלח סטרילית כדי לשמור על המכשיר שאינו דביקים ונקיים במהלך ניתוח. צלחת הכליות מרופדת בשטיח גומי או כפפה כירורגית כדי למנוע נזק לעצות של מיקרו המכשירים. ודא שכל הציוד הוא סטרילי וההליך מבוצע בטכניקת ספטית על פי ההמלצות הנוכחיות לניתוח הישרדות בחיות מעבדה
- בנוסף, משתמש במוליך קליפ כלי דם ושלושה מלחציים כלי דם זמניים atraumatic. חשוב שיש לי מלחציים משמשים כוח סגירה נמוך כדי למנוע פגיעה בקיר דק מאוד של אב העורקים החולדה. כמו כן להכין שליט עם ברים מחצית מילימטר בקנה מידה, רפידת גומי צבעונית קטנה, ומחט קהה קצרה.
- הנח את החולדות במצב שכיבה, לשתק את שני קדמי ואחוריים כפות עם קלטת כירורגית מבלי להחיל מתיחה או דחיסה לעור, ולכופף את הגב שלהם עם סמן עבה או עט כויה על ידי הצבתו תחת האזור בקרשים של הגב. חשוב לקבל כמה שיותר לורדוסה עמוד השדרה המותני ככל האפשר על מנת לשפר את חשיפת retroperitoneal וגישה לאב עורקי infrarenal המאפשר השקה מייקרו. מיצוב זה מומלץ ליצירה מפרצת אב העורקים בבטן, אבל לא הכרחי לקצירת שתל חזה.
2 שתל קציר
- Uהרדמה כללית nder, לפתוח את חלל בית החזה (שעת ההתחלה איסכמיה שתל). החל קמצוץ הבוהן רעיל כדי לאשר שהחולדה אינה מגיבה לפני שתמשיך לשלבים הבאים. לחתוך דרך דופן בטן midventral, לזהות את הסרעפת בדיוק מעל הכבד, ולחתוך את רקמות חיבור בחלק התחתון של סרעפת כדי לאפשר גישה לכלוב הצלעות. במספריים גדולים, צד קהה כלפי מטה, חותכים את צלעות רק סנטימטר אחד שמאלה וימינה של קו האמצע כלוב צלעות ולפתוח את חלל בית החזה. הריאות מגויסות לצד הימני של הלב. להקריב את החולדות על ידי מינון יתר עם הזרקת intracardiac של תא מטען hydrochloride.Pulmonary קטמין, וריד subclavian שמאל, וריד נבוב גולגולת עזב, ווריד azygous להפריע למסיק של אב העורקים החזי הפרוקסימלי.
- זנב לורידים הבולטים יש נקודת כניסה טובה להתחיל הנתיחה של אב העורקים החזי יורדים באמצעות מיקרו מספריים וmicroforceps.
- עקוב אחר b אב העורקים החזיAck מהקיר הגבי של בית החזה כלפי מעלה לקשת אב העורקים על ידי הכחשה עדינה בוטה ונתיחה עם המהדק כירורגית נגד יתושים.
- מהדק ולאחר מכן לחתוך את הוורידים עם מספריים. לשמור את ווי התלייה על הוורידים ולהשתמש בו כמפשק כדי לחשוף את קשת אב העורקים הבסיסית.
- הנח קשירת משי שאינו נספגת 6-0 בדיוק מעל עורק הצלע הראשון שעזב את אב העורקים.
- חותך את אב העורקים היורדים ממש מתחת לעורק subclavian השמאלי ולאחר מכן מתחת למייתר. זמירה ניתן לעשות על מנת לקבל את גיאומטריה מפרצת תקנית בניצב, או במידת צורך, כדי לקבל זווית מסוימת בין הציר של מפרצת אב העורקים ו. מדוד את השתל ברוחב והאורך שלה.
הערה: שתלים שנקטפו יכולים גם להיות מושתלים באופן מיידי לחולדות נמען או נוסף מעובד כדי להשיג decellularization של קיר השתל. ניתן לאחסן שתלי decellularized ב-4 מעלות צלסיוס עד מחדש השתלה במועד מאוחר יותר (איור 1). הdecellularization הדואר של הקיר מפרצת הוכח נטיית הפרצה להגדלת 11.
.3 השתל Decellularization
- שתלי תורם הקפאה בפוספט שנאגרו מלוחים ב-4 מעלות צלזיוס.
- למחרת, להפשיר את השתלים, לשטוף עם מים מטוהרים וללא יונים בטמפרטורת חדר, ודגירה של 10 שעה על 37 מעלות צלזיוס ב0.1% סולפט dodecyl נתרן.
- לבסוף, לשטוף את השתלים שטופל סולפט dodecyl נתרן שלוש פעמים עם תסיסה עדינה, להקפיא מחדש בופר פוספט, ולשמור ב-4 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
.4 מפרצת בריאה
- Dissection של אב העורקים בבטן
- אחרי החיה כבר מורדמת, קליפ הפרווה מהאתר כירורגית ולנקות את העור בחומר חיטוי מתאים. מבחן לחוסר תגובת הבוהן קמצוץ לפני חתך בעור. התחל הפרוקסימלי 1cm החתך לאיברי המין iעמדת midventral n (שעת התחלת מבצע). להפריד בזהירות את העור מהשרירים הבסיסיים. נתיחת קצה אחד לשני סנטימטרים מתחת לעצם החזה.
- בזהירות אך בתקיפות למשוך את שרירי בטן הבסיסיים, כדי למנוע נזק לאיברים שבבסיס. להאריך את חתך אורכי לאורך alba LINEA כלפי מעלה לתהליך xiphoid וסופו של דבר בכיוון זנב ברמה של שלפוחית השתן.
- בעדינות יפעיל לחץ על שלפוחית השתן לרוקן אותו כדי להקל על גישה למרחב retroperitoneal.
- הזז את המעי הדק וcecum הבולט לימין או מהשמאל. זהה את המעי הגס כלומר המעי הגס היורד בפינה השמאלית התחתונה של חלל הבטן.
- חותך את הרצועות שבבין המעי הדק והמעי הגס יורד בכיוון גולגולת כדי לאפשר חשיפה רחבה יותר של קיר גוף הגבי. הנח מפשק שמירה עצמית להחזיק את המעיים לגזרים.
- המיקום האידיאלי של i השקה פרצת קצה לצדs שנמצא ברמה שבין הכליות וורידי iliolumbar. אב העורקים בבטן טמון retroperitoneal המשובץ ברקמת שומן. במהלך הנתיחה לשים לב במיוחד לכמעט השופכנים השקופים המותאמים וכלי אשכים.
- אם יש צורך בנסיגה נוספת של מעיים, להשתמש חילופי גזה גדולים יותר. ורדוסה עמוד השדרה המותני מושרה במהלך מיצוב על ידי הצבת עט כויה או חפץ דומה מתחת לגב התחתון של העכברוש, מפחיתה באופן משמעותי את הצורך של נסיגת מעי.
- משטח הגחון של קיר גוף גב מכוסה הצפק הקודקודית דק. ברגע שזה נפתח, לדמיין את אב העורקים רק מתחת. במהלך נתיחה חדה ובוטה זהירה של אב העורקים בבטן מורידים גדולים סמוכים לתפוס רק adventitia כדי למנוע נזק לדופן כלי הדם.
- לעתים רחוקות, עורקים המותני קטנים מתעוררים ככלי מגזרי מפני שטח הגב של אב העורקים בבטן ומפריעים להכנה. קשירה וחיתוך של הכלי הוא לביתטוליפ אין כדי למנוע דליפה מדרדר במהלך תפירה מפרצת. שימוש במייקרו מלקחיים מעוקלים יכול להקל על מיקום קשירה בעומק.
- סוף לצד Anastomosis
- שים רפידת גומי בצבע מתחת לאב העורקים בבטן ולרפד אותו עם ספוגית גזה קטנה. הסר רקמת חיבור רופפת וadventitia ברמה של אתר ההשקה המתוכנן.
- הצמד את דיסטלי אב העורקים בבטן להשקה ראשון, אז הפרוקסימלי (שעת התחלת הידוק אב העורקים). הדבר מבטיח מילוי איתן של הכלי ומאפשר arteriotomy שלאחר מכן.
- בצע arteriotomy או באמצעות מיקרו מספריים ישר או עקום. מיקרו מלקחיים מחזיק את חתיכה קטנה מאוד של קיר הכלי לחתוך את צורה האליפטית.
- לשטוף את העורק ביסודיות עם מי מלח בשני הכיוונים באמצעות מחט קהה שקצו.
- מניחים את שני התפרים הראשונים של השקה קצה לצד זה בקצה הפרוקסימלי והדיסטלי של arteriotomy (שעת התחלת השקה). הימנע מאחיזה של קיר הכלי עם מיקרו מלקחיים בכל ההזדמנות אפשרית. ודא כי כל תפר ממוקם דרך כל השכבות של קיר הכלי.
- לבצע תפירה או כתפרים רציפים או מופרעים. אם תפירה קטעה נבחרה לאחר מכן למקם את תפר o`clock צד האחורי תשע ראשון. ניתן במרווחי תפרים לאחר מתחילים בסמוך לתפר הראשון. לתפוס את adventitia בזהירות. הימנע מכל סחיטה / אחיזה של אינטימה.
- כאשר הקיר האחורי גמור, לבדוק את חלק endoluminal של ההשקה לתפרים שלא במקומה. לבצע אותם ההליכים באותו סדר בצד הקדמי. ודא שהראשון של הסכום כולל של שלושה קשרים לתפר הוא מוצק אך לא הדוק מדי.
- עצירת דימום וסגירה
- לאחר סיום ההשקה צד הושלם (זמן השקה סוף), לשטוף את האתר עם מי מלח ולהסיר את מהדק דיסטלי הראשון, כדי לאפשר זרימה חוזרת (אב העורקים הסוף מהדק ti איסכמיה זמן ושתל הסוףלי).
- אם דימום ברור מתרחש מזרימה החוזרת ייתכן שיהיה צורך לתפור נוסף (שעת התחלה של עצירת דימום). במקרה של דליפת קטין, להשיג עצירת דימום עם לחץ עדין על אתר הדימום באמצעות חתיכה קטנה של ספוגית גזה.
- הסר את המהדק של כלי הדם הפרוקסימלי, לשטוף את אתר ההשקה פעם נוסף, ולחתוך את הקצוות הנותרים של המייתר בכיפה מפרצת.
- לאשר patency של מפרצת על ידי תצפית של גידול נפח של מפרצת בגל דופק העורקי שיא. להעריך patency עורק בטן דיסטלי באמצעות "מבחן החליבה" הישיר.
- הסר את יריעת הפלסטיק וספוגית הגזה הקטנה מתחת. מערבולת הדם הפועמת בתוך הפרצה שנוצרה נראית בבירור.
- כסה קווי תפר סביב ההשקה עם חתיכות קטנות של רקמת שומן או Spongostan לעצירת דימום נוסף, אם דליפה קטנה עדיין קיימת (זמן סוף עצירת הדימום).
- הסר את מטליות מפזר וגזת רקמות רכות.הנח את המעי הדק, cecum, ומסת השומן בחזרה במיקום הנכון שלהם.
- סגור את שרירי בטן קו האמצע באמצעות 5-0, 4-0, 3-0 או תפרים נספגים או לא נספגים ואחרי סגירת פצע עור באמצעות טכניקת תפר מתמשכת עם 3-0 תפר נספג polyfilament (זמן פעולת סוף). הערה: בחולדות הניסיון שלנו נסבלות תפרי עור נספגים טובים יותר מאשר תפרי monofilament שאינם נספגים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
סדרת טייס מורכבת 14 חולדות. בהמשך לכך כולל של 84 בעלים חיים פעלו על פי הפרוטוקול שהוצג למספר פרויקטי מחקר בין מרץ לספטמבר 2012. 29 בעלי חיים נוספים שימשו כתורמים לשתלי saccular עורקים. הניסויים שנותרו בוצעו באמצעות שתלי טופל מראש שנקטפו ואוחסנו מניסויים קודמים והשתמשו בחולדות מאותו המין, המתח, המשקל, והגיל.
משקל גוף, זמן פעילות כולל, זמן הידוק אב העורקים, זמן ליצירת השקה, זמן לעצירת דימום לאחר יצירת השקה, זמן איסכמיה שתל, וממדים מפרצת בזמן בריאה (רוחב פרצה ואורך) נרשמו והוציאו מטפסי דיווח מקרה כתובים . כל המאפיינים מסוכמים ומדמיינים בטבלה 1 ואיור 1.
למעט חיה אחת שעבר ניתוח שני בשל פקקת של abdoדיסטלי אב העורקים minal לאתר ההשקה לא היה תמותה או תחלואה periprocedural. זמן ממוצע מבצע היה פחות מ 52 דקות (52 ± 12 דקות). בבעלי חיים עם השתלה של מפרצת syngeneic (n = 21) הזמן ממוצע איסכמיה שתל היה 29 ± 7 דקות. זמן הידוק אב העורקים ממוצע בסך הכל היה 25 ± 7 דקות. ממדי פרצה מתגלים להיות קבוע עם סטייה נמוכה של גודל (כלומר מ"מ 2.5 ± 0.2 רוחב ואומרים אורך 3.8 ± 0.2 מ"מ).
הנתונים שנאספו עברו ניתוח והדמית תיאורים באמצעות תוכנה סטטיסטית. הערכים באים לידי ביטוי כממוצע סטיית ± סטנדרטי (SD) ו95% CI (CI).
איור 1:.-Decellularized ללא או שתלי תלי decellularized תורם ילידים שלא טופלו מאב העורקים החזי הם מייד מחדש מושתלים לתוך חולדות נמען (1). שתלי להיותdecellularized מטופלים עם סולפט dodecyl נתרן (SDS) וצלזיוס ב-4 תואר מאוחסן עד מחדש השתלה (2). הפנל היסטולוגית מתאר חתך אורך דרך (משמאל) ו( מימין) קיר שתל שלא טופל decellularized. מכתים Hematoxylin-eosin.
איור 2: מאפייני כירורגי. הגרפים לדמיין את התפלגות ערכי נתונים בודדים (נקודות שחורות קטנות), ממוצע נתונים (בר ארוך מודגש), וסטיית תקן (ברים שגיאה). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
| מאפיין | אומר | ± SD | 95% CI עליון - תחתון |
| משקל גוף ממוצע (גרם) | 363 | 47 | 350-373 |
| זמן ממוצע פעולה (דקות) | 50 | 11 | 48-53 |
| זמן ממוצע הידוק אב העורקים (דקות) | 25 | 7 | 23 - 27 |
| זמן ממוצע השקה (דקות) | 18 | 6 | 16 - 19 |
| זמן ממוצע של עצירת דימום (דקות) | 2 | 2 | 2 - 3 |
| זמן ממוצע איסכמיה שתל (דקות) | 29 | 7 | 26 - 32 |
| אומר רוחב פרצה (מילימטר) | 2.5 | 0.2 | 2.4-2.5 |
| אומר אורך פרצה (מילימטר) | 3.7 | 0.5 | 3.5-3.8 |
טבלת 1: מאפייני כירורגי. SD = סטיית תקן; CI = רווח סמך
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
התקדמות בהבנה של הביולוגיה המורכבת של מפרצת עורק מוח saccular שלנו תלויה בניתוח של נתונים אפידמיולוגיים וקליניים, כהשלמה מחקרי מעבדה בדגימות מטופל ועבודה ניסויית במודלים של בעלי חיים 3,12,13.
בעלי חיים קטנים כמו החולדות קשורים מיסודו עם עלויות נמוכות יותר של ניסויים ודיור, והפחיתו את הצורך של ציוד מיוחד. זמן פעולה ממוצע כולל של פחות מ 60 דקות ליצירת מייקרו של מפרצת דפנות בחולדות הוא הרבה יותר קצר מהזמן משמש ליצירה של מפרצת מורכבת יותר מייקרו ורידי עורקי כיס הסתעפות בארנבים וכלבים 2,14,15. היתרונות של עלויות נמוכות ושיטות מהירות יותר של יצירה מפרצת עשויים להקל הולכה של מחקרים עם מספר גדול יותר של ניסויים ועוצמה סטטיסטית מוגבר שלאחר מכן. בנוסף, מודלים עכבריים הנוכחיים יושמו בהצלחה לענות researc שאלות h צורך מתודולוגיה מעבדה מתוחכמת יותר, כולל בעלי חיים מהונדסים 3,4. בעת שימוש בעכברים ליצירת מפרצות דפנות, אחד צריך לזכור כי הצורך קטע 11-0 התפרים דורשים מיומנויות מייקרו נוספות. ביצועים של המודל מפרצת שהוצג בעכברים קשורים גם עם שיעורי תמותה גבוהים יותר (30%; בעיקר בשל סיבוכים במאזן נוזלים והרדמה וקוטר קטן יותר (0.5-1 מ"מ) של אב העורקים בעכבר) 3.
עקרונות יסוד של המודל מפרצת העכברוש ניתן לשלוט בפרק זמן קצר. קורס מבוא במייקרו מכרסם מומלץ לאלה שנמנים חוקרים בביצוע ניתוחים וטכניקות תפר מתחת למיקרוסקופ. שלבים עיקריים מודגשים בפרוטוקול שהוצג יהיו עוד יותר לפשט את ההליך. זהירות מיוחדת צריכה להיות למימוש במהלך הנתיחה של אב העורקים בבטן מורידים גדולים סמוכים.
ntent "> בקוטר כלי הדם ההיקפי הקטן של חולדה בגודל בינונית עושה טרנס תרדמה ופריסת מכשיר endovascular טרנס הכסל קשה 5,6. עם זאת, יכולים גם להיות ממוקמים מכשירים באמצעות החדרה ישירה בטן אב העורקים או מיקום ישיר לפרצה הניסיונית לפני הסוף -כדי אתר ההשקה 7,16. שינויי נפח בשרידי צוואר וגיאומטריה מפרצת יכולה להיות מעקב עם אולטרסאונד סדרתי ולא פולשנית בתדירות גבוהה, מיקרו-CT, או אנגיוגרפיה תהודה מגנטית ברזולוציה גבוהה 16. הניסויים קודמים גילו גבוהים הכולל שיעורי patency של 92.5% בחציון מעקב של שישה שבועות לאחר יצירה ללא peri- או 3,7,16 נוגדי קרישה וantiaggregation התוך פרוצדורליים. למעט צמיחת מקרה אחד משמעותית או הרחבה של מפרצת הניסוי לא נצפו ואף אחד מהם מקרע 3.עם זאת, אם את השתלים שנקצרו decellularized מפרצות demonstrate דפוס הטרוגנית של פקקת, recanalization, צמיחה, וקרע סופי 11. מפרצת הולכת וגובר במחקר האחרון הראתה סיסטיק הניכר adventitial ודלקת, קיר שיבוש מוחלט, והגדילה את הצטברות נויטרופילים בפקיק intraluminal לא מאורגן. בדרך זו המודל מאפשר ללמוד צמיחה מפרצת וקרע ועלול לשמש כדי להעריך את התגובות ביולוגיות הנגרמות על ידי מכשירי אמבוליזציה בגידול ופרצות קרע נוטה. אף אחד מהדגמים מפרצת הזמינים שניתן embolized באופן אידיאלי מייצג מפרצת של עורק אנושי saccular מוחית או לשכפל pathobiology מאחורי היווצרות מפרצת או קרע המדויק.
זה נשאר עניין של ויכוח באיזו מידת הבחירה של שתל (נרתיק ורידים או עורקים) ובחירה של angioarchitecture (דפנות או מבנה הסתעפות) להשפיע על התרגום של תוצאות לתוך פרקטיקה קלינית. בהחלט דגמים שונים הם אופטימליים לשונהמטרות, ויכולות להיות מותאמות לרמה גבוהה מאוד במוסדות מסוימים. המודל שהוצג לא יעשה מודלים אחרים מיושנים. הוא יישאר הכרחי לחוקר לבחור מתוך מגוון רחב של דגמים שונים טכניים ובעלי חיים אחד שמתאים הטוב ביותר את מטרות ניסוי, שיקולים מעשיים, וסביבת מעבדה.
עם זאת, צריכים באופן אידיאלי להתבצע כמה ניסויים באותו מודל סטנדרטי במוסדות ובמעבדות שונים, על מנת לאפשר השוואה טובה יותר של נתונים ושל מכשירים או טיפולים. נכון להיום אין הנחיות לבדיקות סטנדרטיות של מכשירי endovascular לפני יישום קליני, ומודלים של בעלי החיים נשארים underused 1. מודלים סטנדרטיים ירוויחו חשיבות פעם ניסויים פרה אקראיים רב מרכזי גם לצוץ בתחום זה של מחקר.
יצירת פרצת מייקרו מאפשרת סטנדרטיזציה של מקור שתל, יחס נפח לפתח, וכלי הורהלפרצת זווית ציר ארוכה. הטכניקה שהוצגה נועדה ליצור פרצה סטנדרטית עם וריאציה מינימאלית בממד מפרצת, מיקום, וביחס לעורק ההורה. רמה גבוהה זו של תקינה והעלויות נמוכות יחסית להפוך את מודל כלי טוב לבדיקת חומרי אמבוליזציה והתקנים האחר כך נבחנו במודלים מורכבים יותר ויקרים אחרים.
לסיכום מודל פרצת עכברוש דפנות מייקרו הציג הוא שיטה מהירה, זולה, ועולה בקנה אחד ליצור פרצות ניסיוניות שטופלו באמצעות גודל, צורה, ותצורה גיאומטרית של מפרצת ביחס לעורק ההורה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אי לנו אינטרס כלכלי או מסחרי בכל אחת מתרופות, חומרים, או הציוד המשמש.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medetomidine | Any genericon | ||
| Ketamin | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Phosphate buffered saline | |||
| Sodium dodecyl sulfate (0.1%) | |||
| 3-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP824G | |
| 5-0 non absorbable suture | Ethicon Inc., USA | 8618G | |
| 6-0 non absorbable silk suture | B. Braun, Germany | C0761060 | |
| 9-0 nylon micro suture | B. Braun, Germany | G1118471 | |
| Spongostan | Ethicon Inc., USA | MS0002 | |
| Operation microscope | Leica , Germany | M651 | |
| Digital microscope camera | Sony, Japan | SSC-DC58AP | |
| Standard surgical instruments | B. Braun, Germany | Multiple | See protocol 1.4 |
| Microsurgical instruments | B. Braun, Germany | Multiple | See protocol 1.5 |
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Temporary vascular clamps | B. Braun, Germany | FT250T | |
| Graph Pad Prism statistical software | GraphPad Software, San Diego, California, USA | V 6.02 for Windows |
References
- Bouzeghrane, F., et al. In vivo experimental intracranial aneurysm models: a systematic review. AJNR Am J Neuroradiol. 31, 418-423 (2010).
- Marbacher, S., et al. Complex bilobular, bisaccular, and broad-neck microsurgical aneurysm formation in the rabbit bifurcation model for the study of upcoming endovascular techniques. AJNR. American journal of neuroradiology. 32, 772-777 (2011).
- Frosen, J., et al. Contribution of mural and bone marrow-derived neointimal cells to thrombus organization and wall remodeling in a microsurgical murine saccular aneurysm model. Neurosurgery. 58, 936-944 (2006).
- Marjamaa, J., et al. Mice with a deletion in the first intron of the Col1a1 gene develop dissection and rupture of aorta in the absence of aneurysms: high-resolution magnetic resonance imaging. at 4.7 T, of the aorta and cerebral arteries. Magn Reson Med. 55, 592-597 (2006).
- Oyamada, S., et al. Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis. The Journal of surgical research. , 166-191 (2011).
- Lowe, H. C., James, B., Khachigian, L. M. A novel model of in-stent restenosis: rat aortic stenting. Heart. 91, 393-395 (2005).
- Marjamaa, J., et al. Occlusion of neck remnant in experimental rat aneurysms after treatment with platinum- or polyglycolic-polylactic acid-coated coils. Surg Neurol. 71, 458-465 (2009).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. Journal of investigative surgery : the official journal of the Academy of Surgical Research. 22, 445-451 (2009).
- Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new. , (2011).
- Marbacher, S., et al. Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model. Stroke. 45, 248-254 (2014).
- Frosen, J., et al. Remodeling of saccular cerebral artery aneurysm wall is associated with rupture: histological analysis of 24 unruptured and 42 ruptured cases. Stroke. 35, 2287-2293 (2004).
- Frosen, J., et al. Saccular intracranial aneurysm: pathology and mechanisms. Acta neuropathologica. , 123-773 (2012).
- Ysuda, R., Strother, C. M., Aagaard-Kienitz, B., Pulfer, K., Consigny, D. A large and giant bifurcation aneurysm model in canines: proof of feasibility. AJNR Am J Neuroradiol. 33, 507-512 (2012).
- Sherif, C., et al. Microsurgical venous pouch arterial-bifurcation aneurysms in the rabbit model: technical aspects. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).
- Marjamaa, J., et al. High-resolution TOF MR angiography at 4.7 Tesla for volumetric and morphologic evaluation of coiled aneurysm neck remnants in a rat model. Acta Radiol. 52, 340-348 (2011).
