Geração de esferóides a partir de linhagens celulares: um método de cultura celular tridimensional (3D)

Cultive a linha celular desejada como uma monocamada 2D aderente. Remova o meio de cultura e lave com solução salina tamponada com fosfato ou PBS. Em seguida, adicione tripsina e incube enquanto as células se desprendem da superfície do frasco e se tornam redondas. Adicione meios frescos para neutralizar a tripsina e suspender as células. Transfira a mistura para um tubo cônico e use uma centrífuga para pellet as células.

Substitua o sobrenadante por meio novo e ressuspenda o pellet da célula. Use um hemocitômetro para contar o número de células e calcular uma concentração de trabalho. Em seguida, transfira a quantidade certa de mistura de células para uma placa de poço de adesão ultrabaixa de fundo redondo e incuba. As células se depositam no fundo e se agregam. Eles acabarão se ligando um ao outro e formarão um conjunto compacto de células 3D, o esferóide.

No protocolo de exemplo, veremos como gerar esferóides 3D a partir de uma linha celular de câncer de cólon e como a imagem ao vivo é aplicada para rastrear sua formação. Comece lavando a linha de células de câncer colorretal de interesse com cinco mililitros de PBS e removendo as células do fundo do frasco com 0,5 mililitros de t