Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Chez les mouches drosophilies, un stimulus visuel imminent signalant l’approche d’un prédateur active les circuits neuronaux qui déclenchent une réponse d’évasion. Pour manipuler le circuit neuronal qui contrôle une telle réponse, exprimer une opsine transgénique sensible à la lumière, comme la channelrhodopsine-2 dans des neurones spécifiques dans ce circuit.
La channelrhodopsine est un canal de cation photo-sensible qui s’ouvre lorsqu’il est exposé à la lumière bleu vif. L’afflux subséquent d’ions sodium pointe un potentiel d’action qui provoque le feu du neurone et le relais de l’information le long du circuit. En plus du stimulus lumineux, le cofacteur tout-trans-rétinien est nécessaire pour canalrhodopsine à ouvrir.
Par conséquent, fournir tout-trans-rétinien dans la nourriture de mouche, puisqu’il est habituellement présent en très petites quantités. En outre, en étudiant le rôle des neurones dans un circuit neuronal impliqué dans une réponse à un stimulus visuel, utilisez des mouches qui sont visuellement aveugles pour empêcher d’autres réponses de lumière.
Enfin, utilisez une lumière LED bleue pour déclencher le même comportement qui est causé par le stimulus imminent. Dans le protocole d’exemple, nous verrons la préparation des aliments et la réponse comportementale induite par la lumière des mouches exprimant la canalrhodopsine dans les neurones du lobe optique.
- Commencez par faire fondre les aliments standard à la mouche de la semoule de maïs au micro-ondes et laissez-les refroidir jusqu’à ce qu’ils soient chauds au toucher. Une fois refroidis, mélangez 50 microlitres de 20 millimillons entièrement trans-rétiniens préparés précédemment dans chaque flacon. Ensuite, laissez refroidir les flacons et protégez-les de la lumière jusqu’à ce que cela soit nécessaire.
Tout d’abord, anesthésier brièvement les mouches sur la glace. Ensuite, placez les mouches individuelles dans des pointes de pipette P1000 avec la pointe coupée pour former un diamètre de pore d’environ 2,25 millimètres, et scellez chaque extrémité avec du ruban adhésif. Une fois que la mouche s’est réveillée et explore la pointe pipette, retirez la bande et placez rapidement la pointe dans la rainure dans le support vertical. Fixez la puce en place avec une vis de pouce, qui ferme le bas de la pointe.
Les mouches explorent généralement la pointe pendant entre 30 et 60 secondes. À mesure que la mouche s’approche du sommet de la pointe, démarrez l’enregistrement de la caméra juste avant que la mouche n’émerge sur la plate-forme. Une fois que la mouche est apparue sur la plate-forme, attendez une à deux secondes, puis allumez les LED bleues. Utilisez une mise à jour pour mesurer manuellement l’heure jusqu’à ce que la mouche commence à voler.
