JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 2:52 min • April 30th, 2023
- Comece com um tanque de acasalamento, um tanque com uma inserção removível que permite que os ovos caiam. Adicione dois peixes adultos machos e três fêmeas a um tanque de acasalamento dividido à noite antes da coleta de embriões para se aclimatarem durante a noite.
Na manhã seguinte, transfira os peixes para um novo tanque de acasalamento contendo água do sistema e remova o divisor. Aguarde de 15 a 30 minutos para dar tempo ao peixe de acasalar e desovar.
Agora colete os embriões e armazene-os em uma placa de Petri contendo o meio embrionário de Hank. Cultive-os a 28,5 graus Celsius durante todo o protocolo. Examine a morfologia dos embriões sob um microscópio de dissecação.
Você observará várias características de desenvolvimento. A clivagem do blastodisco dá origem a várias células. O blastoderma assume a forma de um copo invertido acima da célula vitelina. Os segmentos do mesoderma paraxial se desenvolvem na parte dorsal do embrião e assim por diante.
Além de 24 horas após a fertilização, basta classificar os embriões pelo comprimento total do corpo. No protocolo de exemplo, configuraremos o acasalamento de peixes repórteres mCherry transgênicos e classificaremos os embriões resultantes.
- Para começar, cultive embriões até os três meses de idade, que é a maturidade reprodutiva. Separe dois machos adultos e três fêmeas da cepa desejada em tanques de acasalamento divididos de água doce do sistema na noite anterior à coleta de embriões. Na manhã seguinte, depois que as luzes se acenderem, remova a divisória e deixe os peixes acasalarem naturalmente até que os embriões sejam observados no fundo do tanque.
Colete embriões em intervalos de 30 minutos e separe as placas de Petri do meio embrionário até que o número desejado seja coletado. Para estadiar os embriões, cultive-os em grupos de 50 a 75 por placa de Petri de 10 centímetros para promover um tempo de desenvolvimento consistente de todos os embriões. Em seguida, mantenha as placas a 28,5 graus Celsius.
Meça a idade do embrião usando o número de somito após a segmentação até aproximadamente 24 horas após a fertilização, ou HPF, e separe os embriões com base na idade de desenvolvimento.
Este artigo descreve um protocolo para acasalamento e coleta de embriões em peixes, com foco nas fases de desenvolvimento dos embriões. Ele fornece etapas detalhadas para aclimatar os peixes, coletar os embriões e examinar sua morfologia.
A geração precisa e o estadiamento do desenvolvimento de embriões de peixe-zebra são fundamentais para estudos em fase de descoberta que exigem material biológico sincronizado. Este protocolo permite o isolamento confiável de embriões em estágios definidos, apoiando aplicações posteriores, como análise transgênica e perfilagem quantitativa da expressão gênica. O estadiamento padronizado de embriões aumenta a confiança preditiva e a reprodutibilidade em todo o fluxo de pesquisas iniciais e pré-clínicas.
Este método integra-se na interface entre as fases iniciais de descoberta e os fluxos de trabalho pré-clínicos, fornecendo embriões de alta qualidade, correspondentes ao estágio, para análises genéticas, moleculares e fenotípicas.
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Última atualização: 29 agosto 2026