0 visualizações • 0:04 min. • April 30th, 2023
- Nas larvas de peixe-zebra, um estímulo visual pode ativar neurônios somatossensoriais e desencadear uma resposta de fuga. Existem dois tipos de neurônios encontrados na larva, neurônios trigêmeos e Rohon-Beard. Podemos manipular a atividade desses neurônios modificando-os para expressar canais iônicos transgênicos sensíveis à luz. Essa abordagem é chamada de optogenética.
Para realizar esta técnica, monte uma larva transgênica com o lado dorsal voltado para cima em gel de agarose e coloque-a sob um microscópio de dissecação. Use uma lâmina de barbear para destacar uma porção em forma de cunha de agarose ao redor da gema e da cauda. Encha esta área com água de ovo. Afaste a agarose do tronco e da cauda da larva.
Posicione a ponta de um cabo óptico perto do tronco onde o corpo celular do neurônio Rohon-Beard está localizado. Forneça um pulso de luz laser azul. Após a exposição à luz azul, os canais iônicos transgênicos sensíveis à luz na membrana do neurônio se abrem, permitindo a entrada de íons, desencadeando um potencial de ação que provoca a resposta de escape. Registre o comportamento da larva usando uma câmera de alta velocidade.
No protocolo de exemplo, montaremos as larvas
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