Preparação de amostras para metabolômica: um método para preparar amostras de células para perfil de metabólitos

A metabolômica é o estudo para identificar e quantificar os metabólitos presentes nas células. Para preparar a amostra, comece semeando células de câncer de mama junto com o meio de crescimento em duas placas rotuladas como teste e controle. Incubar por três dias a 37 graus Celsius. Agora, remova o meio e adicione meio fresco com estradiol na placa de teste e meio simples na placa de controle.

O estradiol se liga ao receptor de estrogênio alfa nas células do câncer de mama para induzir certas expressões, causando uma mudança na composição do metabólito. Incube as placas pela duração desejada. Substitua o meio por solução salina tamponada com fosfato gelado ou PBS para lavar as células e, em seguida, adicione acetona gelada. Os reagentes gelados interrompem a ação das proteases e, assim, evitam a degradação das proteínas.

Agora use um raspador para separar as células das placas e transfira-as para tubos com a ajuda de uma pipeta. Leve 20 microlitros dessa suspensão celular para um hemocitômetro e conte o número de células. Armazene as amostras a menos 80 graus Celsius até serem usadas para análise posterior. No protocolo a seguir, preparamos amostras de células MCF-7 para cromatogra