Preparação de Pulmão de Camundongo para Citometria de Fluxo: Gerando Suspensão Celular do Tecido Pulmonar para Análise de Citometria de Fluxo

- Comece pegando um camundongo sacrificado e prenda-o em uma placa de dissecação com fita adesiva. Use uma tesoura para cortar a pele. Faça uma incisão vertical através do diafragma e corte as costelas para alcançar a cavidade torácica, expondo o coração e os pulmões. Em seguida, faça uma pequena incisão no ventrículo esquerdo do coração. Em seguida, localize o ventrículo direito e insira uma seringa contendo PBS no lúmen do ventrículo. Perfunda PBS através do ventrículo direito, deixando o sangue fluir para fora da incisão pré-fabricada no ventrículo esquerdo até que os pulmões fiquem brancos. Retire o tecido pulmonar contendo nódulos tumorais e pique em pequenos pedaços.

Incube os pedaços no tampão de digestão pulmonar. A colagenase no tampão de digestão pulmonar ajuda a isolar as células e a DNAse ajuda a eliminar o DNA das células mortas. Coe a suspensão resultante através de um filtro de célula para remover aglomerados e uniformizar a suspensão celular. Centrifugue e ressuspenda o pellet no tampão de potássio de cloreto de amônio para lisar os eritrócitos residuais. Centrifugue para coletar os leucócitos e células tumorais no pellet. Ressuspenda o pellet em PBS suplementado co