Um modelo de infecção de feridas na pele murina para estudar a resposta imune contra um patógeno bacteriano

Pegue um camundongo anestesiado projetado para expressar uma proteína fluorescente em neutrófilos. Raspe o dorso e faça um corte circular. Extirpe a pele cortada para revelar a fáscia - uma camada de tecido conjuntivo por baixo.

Pegue uma seringa contendo uma suspensão de Staphylococcus aureus - uma bactéria patogênica - geneticamente modificada para produzir bioluminescência. Injete a suspensão entre a fáscia e o tecido subjacente, gerando uma infecção localizada da ferida.

Os receptores de reconhecimento de padrões nas células estromais na fáscia reconhecem os padrões moleculares associados ao patógeno nas bactérias. Essa ligação induz a liberação de citocinas pró-inflamatórias e quimioatraentes - resultando em inflamação.

Os quimioatraentes recrutam neutrófilos circulatórios no local da infecção. Os neutrófilos que chegam engolfam as bactérias em um fagossomo que se funde com os grânulos citoplasmáticos, causando a liberação de peptídeos antimicrobianos.

A NADPH oxidase - um complexo enzimático - se reúne na membrana do fagossomo e produz espécies reativas de oxigênio ou ROS. Os peptídeos antimicrobianos e ROS causam degradação bacteriana.

Como contra-resposta, as bactérias secretam fatores de virulência que permeiam a membrana dos neutrófilos, causando lise celular. A bactéria também libera enzimas para a deposição de fibrina para evitar a fagocitose.

A resposta imune leva a um abscesso - uma cápsula de fibrina contendo células bacterianas, neutrófilos e células mortas.

Registre a fluorescência de neutrófilos e a bioluminescência bacteriana para visualizar a interação bactéria-neutrófilo.

Para a inoculação de Staph aureus, encha uma seringa de insulina de calibre 28 com 50 microlitros do inoculante bacteriano bioluminescente preparado e use um dedo para puxar a derme do animal ferido para o lado. Segurando a seringa quase paralela ao tecido, insira lentamente a seringa no tecido até sentir uma diminuição repentina da resistência, indicando perfuração da fáscia.

Com a agulha colocada no centro da ferida, libere lentamente todo o volume do inoculante. Confirme se o inoculante forma uma bolha no centro da ferida com vazamento ou dispersão mínima e remova a seringa lentamente do animal. Em seguida, retorne o animal à sua gaiola com calor e monitoramento até a recuperação total.