Separação de bactérias por quantidade de cápsula usando um gradiente de densidade descontínuo

Comece com um tubo contendo um gradiente de densidade descontínuo predefinido, preparado usando partículas de sílica coloidal não tóxicas revestidas com polivinilpirrolidona.

O gradiente compreende três camadas não sobrepostas dispostas em ordem crescente de densidades de cima para baixo.

Pegue uma biblioteca mutante de transposon bacteriano, uma suspensão agrupada de cepas bacterianas com mutações aleatórias induzidas por transposon.

Um subconjunto dessas mutações interrompe os genes que regulam a cápsula, uma camada de polissacarídeo ao redor da parede celular bacteriana, resultando em cepas com quantidades variáveis de cápsula.

Adicione a biblioteca bacteriana ao topo do gradiente muito lentamente, sem misturar a interface.

Centrifugue o tubo a uma velocidade moderada.

O gradiente facilita a migração diferencial de bactérias com base em suas quantidades de cápsulas.

As cepas hiperencapsuladas, sendo menos densas devido à sua camada de polissacarídeo hidratado, localizam-se próximas ao topo.

As cepas fracamente capsuladas se depositam no meio e as cepas mais densas e não encapsuladas migram para o fundo.

As cepas bacterianas separadas estão prontas para análise a jusante.

Adicione cuidados