Rastreando a dinâmica da infecção bacteriana em um camundongo usando bioluminescência

Comece com uma suspensão de uma cepa atenuada de uma bactéria patogênica.

A cepa atenuada exibe patogenicidade reduzida devido a deleções direcionadas em genes de virulência.

As bactérias são marcadas cromossomicamente com um operon bioluminescente que permite a produção autônoma de luz.

As bactérias expressam o operon bioluminescente, produzindo uma enzima luciferase e um complexo enzimático que sintetiza o substrato da luciferase.

A luciferase oxida o substrato para produzir luz visível.

Centrifugar a suspensão e rejeitar o sobrenadante.

Lave as células com um tampão, centrifugue novamente e descarte o sobrenadante para remover os componentes não celulares residuais.

Ressuspenda as células no tampão para atingir uma concentração bacteriana ideal e coloque a suspensão em uma seringa.

Injetar a suspensão por via intraperitoneal num ratinho e transferi-la para uma gaiola.

Visualize o sinal bioluminescente em intervalos regulares.

A cepa atenuada permanece localizada e a bioluminescência diminui gradualmente, indicando eliminação da infecção.

Na manhã das injeções, descongele os criogenianos das células bacterianas a quatro graus Celsius por três a quatro horas. Mantenha os frascos no gelo após