Avaliando a Motilidade Bacteriana Usando um Dispositivo Microfluídico

Pegue um dispositivo microfluídico consistindo em um tubo de entrada conectado a uma câmara microfluídica feita de canais porosos para o movimento bacteriano.

A câmara é conectada a uma câmara de observação que é conectada a uma bomba de seringa por meio de um tubo de saída.

Sature as câmaras com um buffer para remover quaisquer bolhas de ar.

Coloque o dispositivo no palco do microscópio e posicione a lente objetiva acima da câmara de observação.

Ajuste as configurações do microscópio para visualizar claramente as células bacterianas individuais.

Coloque o tubo de entrada em uma suspensão de bactérias marcadas fluorescente.

Inicie o fluxo para atrair as bactérias para a câmara microfluídica, onde elas passam pelos canais porosos para chegar à câmara de observação.

Imagine a câmara de observação em intervalos regulares.

Gerar uma curva de avanço, que representa a fração de bactérias que passam pela matriz porosa ao longo do tempo.

Retire o microfluídico do vácuo e coloque-o no palco do microscópio. Use a bomba da seringa para saturá-lo com buffer de motilidade.

Usando microscopia de campo claro ou contraste de fase, ajuste a ampliação para visualizar células bacterianas individuais e foque no centro do canal de observação. Mude as configurações do caminho da luz para microscopia de fluorescência. Ajuste o foco com um deslocamento e o tempo de exposição da câmera para resolver células bacterianas individuais, neste caso, 100 milissegundos.

Em seguida, insira o tubo de entrada em um tubo de dois mililitros contendo a suspensão bacteriana. Inverta a direção da bomba e comece a retirar a suspensão com uma vazão de um microlitro por minuto.

Escaneie a seção transversal de todo o canal de observação, registrando uma imagem a cada minuto.